Репликация днк: учебное пособие
жүктеу/скачать 2,57 Mb. Pdf көрінісі
|
| Рис. 16. Строение PCNA
Строение «скользящего зажима у про– и эукариот (PCNA) РСNА стабилизирует комплекс ДНК-полимеразы δ с праймер-матрицей, предотвра- щает преждевременную диссоциацию фермента и тем самым обеспечивает высокую про- цессивность синтеза. Однако при этом РСNА способствует фиксации в новообразованной ДНК ошибочно включенных природных и модифицированных нуклеотидов. Фосфорили- рование РСNА-связывающего домена RFС, вероятно, является способом регуляции РСNА- зависимого синтеза ДНК, осуществляемого ДНК-полимеразой δ или ε. Фосфорилирование РСNА-связывающего домена RFС Са 2+ -кальмодулин-зависимой протеинкиназой II (СаМ- КII) ингибирует связывание РСNА с RFС и, как следствие, подавляет РСNА-зависимый син- тез ДНК, катализируемый ДНК-полимеразами δ и ε. С другой стороны, RFС в комплексе с РСNА и ДНК недоступен для фосфорилирования СаМКП. По другим данным, фосфорили- рование РСNА-связывающего домена в большой субъединице (145 кДа) RFС, блокирующее связывание РСNА, может осуществляться при участии циклин-зависимых киназ, регулиру- ющих клеточный цикл. Многие белки, учавствующие в ДНК-метаболизме, имеют сайты свя- зывания с PCNA. Среди них лигаза I, метилтрансфераза для поддерживающего метилиро- вания вновь синтезированной ДНК, некоторые гликозилазы, ингибитор циклин-зависимых киназ р21, флэп-эдонуклеаза I (FENI). Т. е. PCNA служит для сборки комплекса репликации и может привлекать к нему специфические белки в зависимости от конкретных условий. 4.3.2.2. Эндонуклеазы. FEN-1 В ходе процессинга фрагментов Оказаки, равно как и в процессе репарации ДНК, в качестве промежуточных продуктов реакции возникают структуры ДНК, имеющие свисаю- И. М. Спивак. «Репликация ДНК: учебное пособие» 48 щий 5'-конец (флэп). Главная причина появления таких структур – активность Ро1δ, обеспе- чивающая синтез с вытеснением цепи («strand-displasment»). Основным ферментом, выщеп- ляющим флэп-структуры, является флэп-эндонуклеаза-1 (FEN-1). Предполагается, что при выщеплении таких структур FEN-1 взаимодействует с различными белками, в том числе с RРА и PCNA. Количественная оценка связывания RРА и FEN-1 с ДНК отчетливо показала конкуренцию RРА с FEN-1 за флэп-структуры протяженного размера, так как относительно длинный флэп позволяет RРА находиться в вытянутой конформации и обеспечить эффек- тивное связывание с ДНК за счет всех его ДНК-связывающих доменов. Это может указывать на возможность ингибирования активности FEN-1 RРА. В тоже время связь с короткими флзпами у глобулярной конформации RPA не столь велика, что позволяет преиммуществено связыаваться с ними FEN-1. жүктеу/скачать 2,57 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|