Репликация днк: учебное пособие
Ферменты репликативного комплекса
жүктеу/скачать 2,57 Mb. Pdf көрінісі
|
|
4.3.2. Ферменты репликативного комплекса Скорость синтеза ДНК резко возрастает при объединении белков в прочный комплекс. Кроме ДНК-полимераз в этих репликативных машинах присутствуют различные белки, необходимые для репликации. 4.3.2.1. Факторы репликации Геномная ДНК синтезируется ДНК-полимеразами при участии белковых факторов, обеспечивающих взаимодействие ДНК-полимераз с ДНК и процессивность синтеза ДНК. На отстающей цепи продукты синтеза ДНК дискретны, а РНК-затравки удаляются до завер- шения реакции. В этот каскад превращений кроме Ро1δ и ε вовлечены также РНКаза Н, ДНК- лигаза I и флэп-эндонуклеаза-1 (FЕN-1). Недавние исследования показали, что FЕN-1 физи- чески взаимодействует с РСNА, который стимулирует ее нуклеазную активность в сотни раз. Предполагается, что созревание фрагментов Оказаки осуществляется при согласован- ном действии Ро1δ, РСNА, FЕN-1 и RPА. ДНК-лигаза I – один из компонентов, необходимых для соединения фрагментов Оказаки. Показано, что этот фермент также взаимодействует с РСNА и влияет на РСNА– зависимый синтез ДНК Ро1δ и Ро1ε. Согласно одной из гипотез, РСNА может быть задействован в репликативной вилке как связующее звено между ДНК- полимеразами и другими факторами для координации процессов элонгации и процессинга отстающей цепи. Согласно другой гипотезе, важнейшим фактором, координирующим дей- ствие всех других белков при переключении синтеза от одной ДНК-полимеразы к другой, равно как и завершение синтеза, является репликативный белок А. И. М. Спивак. «Репликация ДНК: учебное пособие» 43 4.3.2.1.1. RPA (replication protein A) и SSB Когда цепи ДНК разъединены, молекула ДНК становиться достаточно уязвимой и нестабильной. Все возможные нарушения в структуре одиночных цепей исключаются бла- годаря действию белков SSВ (Single strand DNA-binding proteins или helix-destabilizing proteins). Они связываются с одиночными цепями, стабилизируют их, при этом не закрывая оснований и оставляя их доступными для ДНК-полимеразы. SSB белок сам не способен раз- делять нити ДНК, но помогает геликазе выравнивать их, подготавливая основу для синтеза. Двухдоменный белок покрывает восемь нуклеотидных пар, при этом не закрывая их. Так как один белок пристраивается сразу же за другим, то они способны быстро покрывать однони- тевую ДНК, по мере ее появления и препятствовать образованию РНК-подобных шпилеч- ных структур. Обычно работает в тетрамерной форме, сразу покрывая 32 нуклеотида. Как происходит присоединение SSB к ДНК показано на рис. 13. Одним из ключевых факторов эукариотической репликации является гомолог SSB репликативный белок А. Этот белок состоит из полипептидов с молекулярной массой 70 (р70), 32 (р32) и 14 (р14) кДа, т. е. является гетеротримером. RРА известен как фактор, связы- вающий однонитевую ДНК. Сродство RРА к двунитевой ДНК на три порядка ниже. На опре- деленных этапах репликации, рекомбинации или репарации ДНК комплементарные цепи жүктеу/скачать 2,57 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|