Решением Учебно-методического совета фгбоу дпо рманпо минздрава России «28» ноября 2016г
жүктеу/скачать 4,09 Mb. Pdf көрінісі
|
| «Сэндвич» – разновидность неконкурентного гетерогенного ИФА;
метод широко используется для определения АТ и АГ (рис. 2.10): 1. На твердой поверхности пластиковой лунки сорбированы антитела (АТ). В лунку вносится исследуемый биологический материал, чаще всего сыворотка или плазма крови больного. 2. Исследуемые антигены (АГ) в ходе инкубации связываются с АТ, сорбированными на планшете. Несвязавшиеся компоненты удаляют отмыванием. 3. В лунку вносят конъюгат, который представляет собой антитела, меченые ферментом. Если в ячейке имеются образовавшиеся на первой стадии процесса иммунные комплексы, то конъюгат соединяется с определяемыми антигенами и образуется тройной комплекс – «сэндвич». Несвязавшаяся часть конъюгата остается в жидкой фазе и удаляется отмыванием. 122 4. В лунку добавляется субстратно-хромогеный реагент, который под влиянием фермента конъюгата превращается в окрашенный продукт реакции. Количество тестируемых антигенов оценивают по содержанию окрашенного продукта реакции, строят калибровочную зависимость и проводят определение концентрации тестируемых антигенов в образцах пациентов. Концентрация определяемого вещества прямо пропорциональна интенсивности окраски пробы и, следовательно, оптической плотности. По аналогичной схеме работают тест-системы для определения АТ, но в качестве иммуносорбента в них используются АГ, а конъюгат содержит раствор АГ, меченых ферментом. Рис. 2.10. « Сэндвич». Последовательность анализа Тест-системы с использованием стрептавидина и биотинилированных моноклональных антител получили распространение для усиления аналитических характеристик тест-систем. В этом случае стандарты, контроли и пробы пациентов сначала добавляются в микроячейки, покрытые стрептавидином. Затем добавляют биотинилированные АТ (это смесь высокоочищенных специфичных моноклональных АТ к различным эпитопам), фермент-меченые АТ (конъюгат), и реагенты перемешиваются. Результатом реакции между различными антителами и определяемым антигеном становится образование «сэндвич»-комплекса, который 123 связывается со стрептавидином в ячейках. Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Особенностью таких систем является отдаление ферментной реакции от стенки планшета, поэтому окраска развивается в объеме и тест-система аналитически становится более чувствительной. Конкурентный гетерогенный иммуноферментный анализ cхематично представлен на рис. 2.11. В этом случае определяемые АГ или АТ пациента конкурируют с аналогичными мечеными АГ или АТ конъюгата за места связывания с иммуносорбентом. Рис. 2.11. Конкурентный иммуноанализ жүктеу/скачать 4,09 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|