Решением Учебно-методического совета фгбоу дпо рманпо минздрава России «28» ноября 2016г

120 
результатов проводят фотометрически. Существует несколько модификаций 
метода ИФА 
Гетерогенный (твердофазный) ИФА в микропланшетном формате 
получил наибольшее распространение в тест-системах для лабораторных 
исследований. В качестве твердой фазы используется поверхность лунок 
полистиролового планшета, на которую адсорбированы входящие в состав 
тест-системы известные антигены или антитела (иммуносорбент). В ходе 
специфической реакции иммуносорбента с определяемыми в исследуемом 
образце антителами (АТ) или антигенами (АГ) образуются иммунные 
комплексы, которые оказываются фиксированными на твердой фазе. 
Субстанции, не участвующие в реакции, и избыточное количество реагентов 
удаляются при многократной промывке. По механизму реакции среди 
гетерогенных методов различают конкурентный и
неконкурентный. 
Непрямой 
неконкурентный 
гетерогенный 
ИФА 
представлен 
несколькими этапами (рис. 2.9): 
1. На твердой поверхности пластиковой лунки сорбирован антиген 
(АГ). В лунку вносится исследуемый биологический материал, чаще всего 
сыворотка крови пациента.
2. Исследуемые антитела (АТ) во время инкубации связываются с 
антигеном, сорбированным на планшете. Несвязавшиеся белки удаляют 
отмыванием. 
3. В лунку вносят конъюгат – то есть АТ с заранее прикрепленным к 
ним ферментом, например пероксидазой, способные связаться с АТ человека, 
закрепившимися на иммуносорбенте. Если в ячейке имеются образовавшиеся 
на первой стадии процесса иммунные комплексы, то конъюгат соединяется с 
определяемыми антителами во время второй инкубации. Несвязавшийся 
конъюгат остается в жидкой фазе и удаляется отмыванием. 

121 
4. В лунку добавляется субстратно-хромогеный реагент, который под 
влиянием фермента конъюгата, связавшегося с иммунными комплексами, 
превращается в окрашенный продукт реакции.
Рис. 2.9. Этапы неконкурентного ИФА 

жүктеу/скачать 4,09 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: