Решением Учебно-методического совета фгбоу дпо рманпо минздрава России «28» ноября 2016г
Иммунноцитохимические исследования
жүктеу/скачать 4,09 Mb. Pdf көрінісі
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Ионоселективный анализ.
| Иммунноцитохимические исследования.
Иммуноцитохимическими называют методы микроскопического выявления и идентификации молекулярных компонентов клеток, основанные на реакции антиген- антитело. Иммуноцитохимическое исследование – это комбинация цитологического и иммуноферментного методов. При постановке иммуноцитохимических методов требуется, прежде всего, так фиксировать исследуемый клеточный материал, чтобы в клетках сохранялась нативность выявляемых антигенов. Пероксидаза хрена в присутствии небольшого количества перекиси водорода катализирует окисление 3,3'-диаминобензидина с образованием нерастворимого золотисто- коричневого продукта. Если пероксидазу непосредственно или опосредовано присоединить к антителам, то эта реакция может происходить только там, где меченные ферментом антитела связались с антигеном. При микроскопии окрашенных препаратов на фоне обычной цитологической картины, например костного мозга, можно идентифицировать коричневый продукт ферментативной реакции, образовавшийся в местах связывания использованных антител с выявляемыми антигенами. Иммуноферментное маркирование можно осуществлять при помощи комплекса щелочная фосфатаза-антитела к щелочной фосфатазе. Конечный продукт ферментативной реакции имеет хорошо заметный красивый красный цвет. Ионоселективный анализ. Ионоселективный анализ – один из наиболее широко используемых методов клинической биохимии. Он основан на использовании ионоселективных электродов, которые представляют собой электрохимические системы, формирующие потенциал в растворе электролита, зависящий от концентрации ионов. С помощью ионоселективных электродов 134 определяется активность ионизированных молекул. Ионы, связанные с белками, другими анионами и находящиеся в комплексе, не регистрируются ионоселективными электродами, т.е. общая концентрация микроэлемента не регистрируется. Это важно, так как биологически активными являются именно ионизированные молекулы. В клинической биохимии широко определяемыми катионами являются Н + (pH), К + , Na + , Ca 2+ , Mg 2+ , Li + и анион Cl - . Основным элементом ионоселективного электрода является мембрана, проницаемая только для определенного иона. Состав мембраны подбирается на производстве. В стеклянных электродах формируется кристаллическая решетка, ячейки которой чувствительны к тестируемому иону. В мембранных электродах в состав полимера вводится индуктор проводимости для соответствующего иона, который формирует каналы специфической проницаемости. В частности в мембрану для определения активности К + часто вводится валиномицин, Na + – нистатин. К достоинствам ионоселективных электродов относятся: возможность прямого измерения активности при контакте электрода с биологической жидкостью, портативность и минимальный объем биожидкости (микролитры), быстрый ответ, что позволяет использовать метод при неотложных состояниях. Анализаторы ионоселективные измеряют активность ионов в сыворотке, плазме, цельной крови, диализатах, моче. Минимальный объем пробы 100 мкл. Как правило, диапазон измеряемых концентраций в сыворотке, плазме, цельной крови: К+ 0,2-40.0 ммоль/л; Na+. 20.0-200.0 ммоль/л; Ca 2+ 0.10-6.00 ммоль/л; рН 6.0-8.0 ед. рН; Cl - 25.0-200.0 ммоль/л. Разрешение: К + 0.01 ммоль/л; Na + 0.1 ммоль/л; Ca 2+ 0.01 ммоль/л; рН 0.001 ед. рН; Cl - 0.1 ммоль/л. Диапазон измерения и чувствительность вполне достаточны для измерения активности ионов в крови в норме и при патологии. жүктеу/скачать 4,09 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|