С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров
жүктеу/скачать 2,61 Mb. Pdf көрінісі
|
Farmatsevticheskaia biotekhnologiia Moiseev-DV 2020
- Бұл бет үшін навигация:
- Сопутствующие примеси
- Количественное определение
Часть 3. Частные вопросы биотехнологии. Микробная биотехнология 260 Общие принципы контроля качества инсулина человеческого Селективное расщепление пептидных связей Происходит ограниченный протеолиз молекулы инсулина, при котором идет распад на 4 части молекулы. Т.е. получают так называемую «пептидную карту», которую сравнивают со стандартным образцом. Расщепление происходит под действием протеазы стафилококка золотистого. Сопутствующие примеси Определение примесей, превышающих молекулярную массу инсулина (его димеры, тримеры и полимеры). Эксклюзионная хроматография. Образуются при нарушении технологии производства и в процессе хранения. Родственные белки (инсулиноподобные пептиды: проинсулин; глюкагон, панкреатический полипептид). ВЭЖХ. Проинсулин-подобные иммунореактивные примеси. Иммунохимический метод (ИФА, радиоиммунологический анализ). Ppt – количество частиц примесей на 1 млн. частиц инсулина: до 30000 ppt – традиционные инсулины; 500 – 1000 ppt – монопиковые инсулины; до 20 ppt (по Европейской фармакопее до 10) – монокомпонентные инсулины. Осложнения при приеме инсулина, связанные с наличием примесей: липодистрофия; аллергические реакции (на чужеродные белки) и инсулинорезистентность (антитела, связываясь с инсулином, уменьшают его концентрацию и соответственно вводимую дозу). Цинк. Атомно-абсорбционная спектрометрия. Кроме перечисленных примесей проводят испытания на бактериальные эндотоксины, потерю в массе при высушивании, сульфатную золу и микробиологическую чистоту. Количественное определение. Проводят методом ВЭЖХ. Активность гормона оценивают в международных единицах. Кроме инструментальных методом по статье ГФ РБ можно провести определение биологической активности инсулина. Активность испытуемого образца инсулина определяют путем сопоставления его гипогликемическогo (сахаропонижающегo) действия с гипогликемическим действием стандартного образца инсулина. Перед испытанием растворы разводят до концентрации 1 ЕД/мл. Определение биологической активности инсулина проводят на здоровых кроликах массой 2,5–3,5 кг. Предварительно определяют чувствительность к инсулину. Для этого кроликам дважды с интервалом 7–8 суток после 18 ч голодания вводят |