состоящими из комплементарных нуклеотидов. Однако после такого
спаривания полной целостности двойной спирали не восстановится,
поскольку останутся два разрыва в фосфодиэфирном остове. Для его
восстановления, то есть сшивания, или лигирования нитей используют
фермент ДНК-лигазу (рисунок 8.2).
Сшивка по «тупым» концам (коннекторный метод) «Тупые» концы могут быть соединены за счет действия ДНК-лигазы,
если и фермент, и «тупые» концы присутствуют в реакционной смеси в
высоких концентрациях. В этом случае реакция лигирования имеет свои
особенности и ее эффективность ниже, чем при «сшивке» по «липким»
концам.
Сшивка фрагментов с разноименными «липкими» концами В ситуации, когда необходимо сшить фрагменты, образованные
разными эндонуклеазами рестрикции, и имеющие разные, то есть
некомплементарные друг другу «липкие» концы, применяют так
называемые линкеры (или «переходники»).
Линкеры – это химически синтезированные олигонуклеотиды,
представляющие собой сайты рестрикции или их комбинацию.
Существуют большие наборы таких генных «переходников». Естественно,
что при использовании линкеров должна учитываться необходимость
соблюдения правил экспрессии генетической информации. Часто в
середину линкера помещают какой-либо регуляторный генетический
