молекул могут также применяться искусственные хромосомы дрожжей и
бактерий.
Методы прямого введения генов в клетку Для введения генетического материала в клетки разных организмов
применяют ряд общих методов прямого переноса, таких как:
трансформация,
трансдукция,
трансфекция,
микроинъекция,
электропорация, метод «мини-клеток», упаковка в липосомы, электронная
пушка.
Трансформация – метод введения рекомбинантной ДНК в клетку
благодаря увеличению проницаемости ее клеточной оболочки. Клетки
обрабатывают ледяным раствором CaCl
2
, а затем выдерживают при
температуре 42ºС в течение 1,5 мин.
Трансдукция – процесс переноса бактериальной ДНК из одной
клетки в другую бактериофагом. Общая трансдукция используется в
генетике бактерий для картирования генома и конструирования штаммов.
При трансфекции ДНК адсорбируется на кристаллах фосфата
кальция (Грэхем Ван дер Эб, 1973). Образуются частицы кальциевого
преципитата. Они поглощаются клеткой путем фагоцитоза. Для
трансфекции используется декстран, полимер, адсорбирующий ДНК.
Эффект вхождения в клетки и время экспрессии высоки, но частота
стабильной трансформации ниже, чем при использовании преципитата
кальция. Частоту трансфекции увеличивает глицериновый шок (4 минуты
в 15% растворе глицерина).
Электропорация – метод заключается в воздействии импульсов
высокого напряжения на мембрану, которое, скорее всего, вызывает
временное образование большого количества пор, что обратимо
увеличивает проницаемость мембран. Через образующиеся на короткое
время поры чужеродная ДНК проникает в клетку. Это простой,
эффективный и воспроизводимый метод. С его помощью были получены
трансгенные растения кукурузы, риса и сахарного тростника.
Микроинъекция ДНК позволяет с помощью тонких микроигл и
микроманипулятора вводить в клетку или прямо в ядро векторную ДНК с
включенным в нее трансгеном. Данный метод обладает значительной
эффективностью и позволяет вводить любую ДНК в любые клетки, и для
сохранения в клетках введенного гена не требуется никакого селективного
давления.
