С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров
жүктеу/скачать 2,61 Mb. Pdf көрінісі
|
Farmatsevticheskaia biotekhnologiia Moiseev-DV 2020
- Бұл бет үшін навигация:
- Упаковка в липосомы
- Селективные гены
Глава 8. ГЕННАЯ ИНЖЕНЕРИЯ В ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ 97 «Мини-клетки» получают путем блокирования донорных клеток в митозе колцемидом. При продолжительной обработке клеток колцемидом в них вокруг каждой хромосомы формируется новая ядерная мембрана. Обработка цитохалазином В и центрифугирование приводит к образованию мини-клеток, представляющих микроядра, инкапсулированные в цитоплазматическую мембрану. Упаковка в липосомы используется для защиты экзогенного генетического материала от разрушающего действия рестриктаз. Липосомы, состоящие из фосфатидилсерина и холестерина, наиболее пригодны для введения ДНК в клетки животных и растений. Системы переноса с помощью липосом низкотоксичны по отношению к клеткам. Метод биологической баллистики (биолистики) является одним из самых эффективных на сегодняшний день методов трансформации растений, особенно однодольных. Суть метода заключается в том, что на мельчайшие частички вольфрама, диаметром 0,6–1,2 мкм, напыляется ДНК вектора. Бомбардировку осуществляют с помощью генной пушки за счет перепада давления или под действием электрического разряда. При достаточной скорости частицы металла с напылением могут непосредственно проникать в ядро, что сильно повышает эффективность трансформации. Часть клеток, которые находятся в чашке Петри в центре под пушкой, гибнет, а часть, расположенная по периферии чашки, выживает и трансформируется. С помощью биолистической пушки были трансформированы однодольные растения, такие как кукуруза, рис, пшеница, ячмень. При этом были получены стабильные растения– трансформанты. IV этап. Молекулярная селекция. Для последующей идентификации трансформированных клеток, несущих рекомбинантную ДНК, вектор должен содержать один или несколько генов-маркеров. Выделяют две группы маркерных генов, позволяющих отличить трансформированные клетки от исходных, – селективные и репортерные гены: Селективные гены – придают клеткам селективное преимущество, т.е. устойчивость к антибиотикам (канамицину, тетрациклину и др.) или гербицидам. Основной принцип работы у такого маркера – способность трансформированных клеток расти на селективной питательной среде с добавкой определенных веществ, ингибирующих рост и деление обычных клеток. Например, в присутствии гена лактамазы бактериальная клетка |