С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров
жүктеу/скачать 2,61 Mb. Pdf көрінісі
|
Farmatsevticheskaia biotekhnologiia Moiseev-DV 2020
Глава 11. ПОЛУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ВАКЦИН 121 Для получения дифтерийного токсина используют среду Lingood. Состав: триптически гидролизованная говяжья ткань и свиная поджелудочная железа (параметры гидролиза: рН 8,0–8,2; температура 48– 50ºС; гидролиз останавливают добавлением ледяной уксусной кислоты и кипячением смеси), содержание аминного азота в гидролизате составляет 120–130 мг/л. К полученному гидролизату добавляют пекарские дрожжи для сбраживания сахаров при 80ºС в течение одного часа. Затем добавляют натрия лактат и мальтозу. Стерилизуют среду при 112ºС в течение 30 мин. Аэрирование (воздух подают со скоростью 6–10 л/мин) и перемешивают (1200–1400 обор/мин), для ускорения образования токсина. Ферментацию проводят при 34–36ºС в течение 36–50 ч. После процесса культивирования сепарацию проводят путем центрифугирования на суперцентрифугах при 15000 обор/мин. Токсин накапливается в культуральной жидкости. К профильтрованной путем ультрафильтрации культуральной жидкости при медленном перемешивании (60–80 обор/мин) прибавляют 40% формальдегид и инкубируют при 39–40ºС 5 суток. За это время происходит детоксикация токсина, связанная с образованием метиламинных групп (обратимая стадия), которые, взаимодействуя с индольными, амидными, фенольными радикалами аминокислот, формируют стабильные метиленовые мостики (необратимая стадия). Затем охлаждают до 2–8ºС. Очистку проводят путем добавления натрия гексаметафосфата (соль Грехема) при постоянном перемешивании. Добавляют трихлоруксусную кислоту до изоэлектрического значения рН 3,8–4,0. Инкубируют 40–60 мин при температуре 4–10ºС. Осадок отделяют на суперцентрифугах при 12000 обор/мин. Растворят в боратно-буферном растворе при рН 7,8–7,9. Очистку от пигментов проводят на активированном угле. жүктеу/скачать 2,61 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|