Рисунок 12.3 – Первое клонирование гибридных клеток на полной
культуральной среде
Идентификация гибридных клеточных линий, секретирующих специфические антитела Теперь
необходимо
идентифицировать
гибридные
клетки,
вырабатывающие АТ к иммунизирующему АГ. Для этого обычно проводят
скрининг культуральной среды в лунках, содержащих секретируемые АТ.
Среду из тех лунок, в которых есть растущие клетки, отбирают и
переносят в лунки другой микротитровальной плашки, предварительно
покрытые слоем молекул АГ-мишени. Если в культуральной среде
находится АТ (первое антитело), распознающее один из эпитопов данного
АГ, то оно свяжется с АГ и останется в лунках после их промывания.
Затем в лунки добавляют второе АТ, специфичное к мышиным АТ. Оно
будет присоединяться к любому первому АТ, связанному с АГ. К
используемому в иммунном анализе второму АТ предварительно
присоединяют фермент, который превращает неокрашенный субстрат в
окрашенное соединение. Изменение цвета содержимого одной из лунок
говорит о том, что исходная культуральная среда содержала АТ,
