Схематическое изображение хромосом человека при G-окрашивании в соответствии с международной классификацией
Геномные технологии
К технологиям относят:
Методы выделений ДНК
Идентификация специфических последовательностей
Установление первичной структуры ДНК-фрагментов (секвенирование ДНК)
Получение рекомбинантных ДНК и их амплификация
ДНК-диагностика заболеваний
Использование ДНК-технологий для получения лекарственных препаратов и лечения различных болезней
Методы выделения ДНК.
ДНК может быть выделена из любого типа тканей и клеток, содержащих ядра. Этапы выделения ДНК включают быстрый лизис клеток, удаление фрагментов клеточных органелл и мембран с помощью центрифугирования, ферментативное разрушение белков протеиназами и экстрагирование ДНК из раствора с помощью фенола и хлороформа. Затем ДНК осаждают, как правило, этанолом и после удаления надосадочной жидкости растворяют в буферном растворе.
Оценку качества экстрагированной ДНК проводят на основании измерения оптической плотности раствора ДНК в области белкового и нуклеинового спектров поглощения, т.е. при 280 и 260 нм, соответственно. Для чистых образцов ДНК соотношение оптических плотностей, полученных при 260/280 нм, должно быть больше 1,8.
Молекула ДНК одной хромосомы среднего размера содержит 150х106 пар нуклеоти-дов и имеет длину около 4 см. Молекулы такого размера чувствительны к механическим воздействиям, возникающим в растворе в процессе выделения, и часто фрагментируются. В ходе выделения получают молекулы ДНК значительно меньше исходных, но всё равно очень большие - тысячи или десятки тысяч пар нуклеотидов. Такие молекулы неудобны для исследований, и их приходится дополнительно фрагментировать.
Генетические методы.
В зависимости от целей исследования все молекулярно-генетические методы можно подразделить на две группы: методы, направленные на поиск неизвестных мутаций (первичная идентификация) и анализ известных мутаций.
