Углеродсодержащие пористые материалы в качестве
Определение основных компонентов физиологических жидкостей
жүктеу/скачать 1,06 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- 2.8.2 Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах (проба на ферментопатию эритроцитов)
| 2.8 Определение основных компонентов физиологических жидкостей
2.8.1 Определение компонентов крови Микрометод определения активности липазы сыворотки крови Активность липазы возрастает при острых воспалительных процессах поджелудочной железы, хронических панкреатитах, опухолях поджелудочной железы. Субстратом в опыте являются эмульсии масел. Ход определения В две пробирки наливают по 0,25 мл воды, по 0,3 мл стабилизированной эмульсии оливкового масла или суспензии сухих сливок и по 0,1 мл трис-буфера для создания рН в среде 8,0. В опытную пробирку добавляют ОД мл сыворотки крови. Вторая пробирка служит контролем. Содержимое пробирок перемешивают и помещают в термостат при 37°С на 60 мин. После этого в обе пробирки наливают по 0,3 мл 95% -го этанола для прекращения действия фермента, а в контрольную пробирку—0,1 мл сыворотки крови. Вводят по 1 капле тимолфталеина, перемешивают и титруют освободившиеся жирные кислоты 0,05 н. раствором едкого натра до светло-голубой окраски. Активность липазы находят по разности в количестве щелочи, пошедшей на титрование опытной и контрольной проб: (7) где х – единицы активности липазы в 1 мл сыворотки крови; А – количество миллилитров 0,05 н. раствора едкого натра, пошедших на титрование опыта; 5 – количество миллилитров 0,05 н. раствора едкого натра, пошедших на титрование контроля; 0,1 – взятое в опыт количество сыворотки крови. У здорового человека активность липазы составляет от 0,5 до 1,5 единицы. 2.8.2 Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах (проба на ферментопатию эритроцитов) Генетический дефект этого фермента в эритроцитах приводит к снижению устойчивости эритроцитов к гемолизу. При полном отсутствии фермента гемолитическая анемия проявляется в раннем детском возрасте. Недостаточная активность фермента проявляется острой гемолитической анемией, вызванной поступлением в организм дополнительных экзогенных факторов, обладающих окислительными свойствами (содержание в пище конских бобов – фавизм, прием сульфаниламидных, противомалярийных и других лекарственных препаратов). Качественная проба Мотульского — Кемпбеля в модификации Тонца и Бетке 0,02 мл цельной крови гемолизируют в пробирке с 1 мл дистиллированной воды. В отдельной пробирке перемешивают 0,1 мл раствора натриевой соли глюкозо–6–фосфат (в концентрации 8,25 мг/л), 0,1 мл раствора НАДФ+ (концентрация 0,5 мг/л), 0,25 мл раствора метиленового синего (концентрация 0,32 мг/л) и 0,2 мл трис-буферной системы с рН = 8,5. Содержимое двух пробирок смешивают, смесь покрывают 1–2 мл жидкого парафина и ставят в термостат при 37 °С. При наличии глюкозо–6–фосфатдегидрогеназы в эритроцитах происходит восстановление НАДФ+ до НАДФН + Н+, который затем восстанавливает окисленную форму метиленового синего (синего цвета) в восстановленную форму (бесцветную). При наличии активного фермента обесцвечивание раствора наблюдается за 40–55 мин (не более 90 мин). Обесцвечивание, наблюдающееся более чем через 90 мин, указывает на недостаточность фермента. Спектральный анализ пигментов крови Сущность методики исследования Если видимый свет проходит через слой окрашенного вещества, то последнее избирательно поглощает лучи определенной длины волны и проходящий свет дает характерный спектр поглощения. Определенные полосы спектра поглощения представляются в виде темных полос, соответствующих лучам, которые поглотил исследуемый пигмент. Так как определенному пигменту соответствует и определенный спектр поглощения, то он может служить для целей анализа на присутствие того или иного пигмента. Для опыта оснащение: спектроскоп. Ход определения Берут микропипеткой 0,2 мл крови из пальца и выливают в пробирку, содержащую 9,8 мл дистиллированной воды, разливают полученный раствор крови в 4 пробирки: Содержимое первой пробирки разбавляют вдвое водой и наблюдают спектр поглощения оксигемоглобина. Видны 2 полосы (темные) в желто-зеленой части спектра. Зарисовать. Во вторую пробирку прибавляют 2–3 капли реактива Стокса. Двухвалентное железо, являющееся действующим началом реактива Стокса, легко окисляется, отнимая от оксигемоглобина кислород, превращая его в гемоглобин. Наблюдают одну широкую полосу в желто-зеленой части спектра, характерную для гемоглобина. Зарисовать. В третью пробирку добавляют 2–3 капли свежеприготовленного, насыщенного раствора железосинеродистого калия. Жидкость приобретает красно-бурую окраску. Наблюдают 3 полосы поглощения: две в желто-зеленой, одну – в красной, характерных для метгемоглобина. Зарисовать. В четвертой пробирке через раствор крови пропуска ют в течение 10 мин (под тягой) светильный газ, который обычно содержит в своем составе оксид углерода (II). Образовавшийся карбоксигемоглобин придает крови цвет красной смородины. Его спектр поглощения имеет две полосы в желто-зеленой части спектра, сдвинутые по сравнению со спектром поглощения оксигемоглобина к фиолетовой части спектра. В отличие от оксигемоглобина при добавлении реактива Стокса образование восстановленного гемоглобина не происходит. жүктеу/скачать 1,06 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|