Высшее образование
жүктеу/скачать 5 Mb.
|
19b6c9a
| 1
\ I L_J I
коферменты, конкурентные ингибиторы, аллостерические эффекторы и т.п. Такое связывание весьма специфично (Кх Ю-4 М), что позволяет выделить тот или иной энзим из множества других белков. Например, из желудочного сока человека методом одноэтап- ной аффинной хроматографии выделена кислая липаза, использующаяся в заместительной терапии при заболеваниях печени. Для синтеза аффинного сорбента, соответствующего специфичности данного фермента, лиганд (субстрат или его аналог) присоединяют к инертной матрице (макропористые гидрофильные гели, синтетические полимеры, неорганические носители). Для уменьшения пространственных трудностей при взаимодействии фермента с матрицей лиганд присоединяют к носителю через промежуточное звено (вставку, ножку, спейсер). Присоединение ли- гандов к поперечносшитой агарозе — сефарозе обычно проводят, активируя ее бромцианом (см. с. 91). Связывание с сефарозой, активированной бромцианом, л-амино-бензилянтарной кислотой, используемой в качестве лиганда, обеспечивает взаимодействие сорбента с каталитическим центром только карбоксипептидаз благодаря сходству лиганда с субстратами карбоксипептидазы:
Матрица—О—С—NH II О С-концевой остаток Аффинный сорбент с лигандом. фенилаланина в субстрате Бензилянтарная кислота изостерична карбоксипептидазы структуре остатка фенилаланина Сорбенты, содержащие цибакрон голубой и некоторые другие красители антрахинонового ряда, используют для аффинной хроматографии НАД-зависимых дегидрогеназ, а носители, имеющие цикло- пептидный антибиотик грамицидин, — для протеолитических ферментов: Афинный сорбент, содержащий антрахиноновый краситель Таблица 4.2 жүктеу/скачать 5 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|