Вопросы для ветеринарных специалистов лабораторий ргп «рвл» Бруцеллез, инфекционный эпидидимит и методы их диагностики?Бруцеллёз

Как осуществляется биологический метод выделения чистой культуры?

жүктеу/скачать 434 Kb. бет 29/54 Дата 21.10.2022 өлшемі 434 Kb. #44662

Бұл бет үшін навигация:

• 90. Лабораторная диагностика анаэробной энтеротоксемии
• 91. Какую серологическую диагностику проводят при анаэробной энтеротоксемии, ход постановки реакции
• 92. При каких условиях происходит синтез последовательностей, комплементарных матричной ДНК при постановке ПЦР
• 93. Что такое амплификация при ПЦР
• 94. Серологическая реакция для диагностики сибирской язвы
• 95. Что такое « жемчужное ожерелье» и порядок его проведения
• 96.Допустимые сроки исследования при туберкулезе.
• 97. Какое заболевание вызывает Cl . chauvoei

89. Как осуществляется биологический метод выделения чистой культуры? Это заражение лабораторных животных, их организм служит фильтром. Так же осуществляют дробный высев или пересев на несколько чашек с плотной средой, с целью получения изолированных колоний, выделяемого микроба, высев на элективные и дифференциально – диагностические среды. 90. Лабораторная диагностика анаэробной энтеротоксемии?enterotoxaemiainfectiosaanaerobica – (син.: размягченная почка, болезнь переедания, травяная болезнь и т. п.) – тяжело протекающая болезнь, проявляющаяся геморрагическим энтеритом, нервными явлениями, поражением почек и признаками общей интоксикации. Возбудитель-Clostridiumperfringens, не подвижные, крупные, толстые палочки,слегка закругленными концами. В лаб свежий труп, пораженные части 12 перст и тощей кишок, кусочки внут органов, содержимое кишечника (в пипетках). Красим по Грамму +,МПА,МПБ,Глюкозо-кров.агаре(неполный гемолиз), на среде Китта – Тароцци(сt,без t),: бурное газообразование и рост культуры, сопровождается равномерным помутнением.Обнаружение токсина в содержимом тонкого отдела киш-ка,получ.экстракта вводим в/бр.2б/м в дозе 0,5 мл.Ср.наб.8 дней.Дифдиаг брадзот, сиб язва, пастереллез, листериоз, некротический гепатит, кормовые отравления. 91. Какую серологическую диагностику проводят при анаэробной энтеротоксемии, ход постановки реакции? РН-реакция нейтрализации. Фильтрат содержимого кишечника или 8 – 12 часовую культуру разливают в 5 пробирок по 1,0 мл.идобовляют по 1,0мл диагностических антитоксических сывороток Cl. Perfringen(A,B,C,D,E,F)расведенных стерильным физ.р/ром до содержание 10АЕ в 1,0мл. В 1-ю пробирку-сыв.типа А, во 2-ю-типаС,в 3-ю –типа D,в 4-ю- типа Е,в пятую – 1,0 мл физ.р- ра(контроль) и на 30 мин в термостат 37º. Смесь из каждой пробирки вводят в/б или в/в по 0,5мл 2-м б/м весом 15 – 18 г,или в/кож.по 0,2мл морской свинке или кролику. Наблюдение за животными ведут в течение 48 час. Результаты реакции нейтрализации учитывают при гибели контрольных белых мышей или образования некроза у контрольных морских свинок (кроликов).Тип возбудителя определяет по схеме. При обнаружении токсинов типа С и D дальнейшую работу по выделению культуры не проводить. 92. При каких условиях происходит синтез последовательностей, комплементарных матричной ДНК при постановке ПЦР?Основной принцип ПЦР состоит в том, что реакция полимеризации(синтез полимерной цепи ДНК из мономерных нуклеотидных звеньев) инициируется специфическими праймерами (короткими фрагментами «затравочной» ДНК) в каждом из множества повторяющихся циклов. Специфичность ПЦР определяется способностью праймеров «узнавать» строго определенный участок ДНК и связываться с ним согласно принципу молекулярной комплементарности. В обычной реакции ПЦР используется пара праймеров, которые «ограничивают» амплифицируемый участок с 2х сторон, связываясь с противоположными цепями ДНК – матрицы. Для многократного увеличения количества копий исходной ДНК нужна цикличность реакции. Как правило, каждый из последовательно повторяющихся циклов ПЦР сост из 3х этапов: 1. Денатурация или плавление ДНК, 2х цепочная ДНК под действием высокой темп. Переходит в однацепочное состояние. 2. Связывание (отжига) праймеров с матричной ДНК. 3. Элонгация (удлинение) цепи. Смена этапов каждого цикла осуществляется путем изменения температуры реакционной смеси. Сначала праймеры могут связаться только с определенной последовательностью исходной ДНК, нов последующихь циклах они связываются с копиями этой последовательности, синтезированными в предыдущих циклах. При этом количество основного продукта ПЦР (копии последовательности ДНК, ограниченной праймерами) теоритически удваивается в каждом цикле, то есть растет с числом циклов экспоненциально. 93. Что такое амплификация при ПЦР – искусственное увеличение числа копий ДНК. Метод ПЦР основан на принципе естественной репликации ДНК. Включающем расплетение двойной спирали ДНК, расхождение нитей ДНК и комплиментарное дополнение обеих. Репликация ДНК может начаться не в любой точке, а только в определенных стартовых блоках - коротких двунитевых участках. Суть метода заключается в том, что маркировав такими блоками специфический только для данного вида (но не для других видов) участок ДНК, можно многократно воспроизвести (амплифицировать) именно этот участок. 94. Серологическая реакция для диагностики сибирской язвы?РП-реакция преципитации. Перед постановки реакции свежий мат-л предворительно выдерживает в тер мостате в теч.18-20час.Несвежий мат-л экстрагируют без выдерживания в термостате. Экстрагирования проводят 2-мя способами: холодный и горячий. Горячий : 1 – 2 г материала помещают в пробирку или колбу, заливают физ.р-ом 1:10 и кипятят 30 – 40 мин в водяной бане. Холодный – 1-2г растирают в ступке с песком, переносят в колбу, залив карбалинизированным (0,3% ным) физ. р-ом 1:10и ост на 16 – 18 ч при комнатной температуре.Полученные экстракты фильт. ч/з асбестовую вату, первые капли фильтрата удаляем. Реакцию ставят путем наслаивания: в уленгутовскую проб 0,2-0,3 мл преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем наслаивают равное количество экстракта,чтобы м/у компонентами была ясно выраженная граница; подслаивания: сначала экстракт, затем прецип.сыворотку. Одновременно ставят контроль: 1) сыворотка + стандартный сибереязвенный антиген, полож результат ч/з 1-2 мин; и позже чем ч/з 15мин.после постановки реакции на границе между компонентами появиться тонкое беловатое кольцо. 2) прецип.сыворотка + физ.р – р., результат должен быть отриц. 95. Что такое « жемчужное ожерелье» и порядок его проведения? Готовим три пробирки по 10мл (или 3 колбы по 100мл) с МПА, в две из которых вносим пенициллин 0,5 ЕД и 0,05 ЕД на 1 мл среды, третья – контрольная. Агар разливаем в чашки Петри и после застывания делаем насечки или вырезаем пластинки(1,5*1,5см), кот-й переносят на предметные стекла и помещают в чашки Петри. На каждую пластинку делаем высев 3-х часовой бульонной культуры. Чашки закрываем крышками и помещ в термостат(37³на 3 часа). Через 3 часа просматриваем с сухой и иммерсионной системами. Перед просмотром зону роста накрывают покровным стеклом. Сибиреязвенные микробы на МПА с пениц принимают шаровидную форму, а их цепочки имеют вид «жемчужного ожерелья». На контрольномагаре сибиреязвенные микробы образуют длинные цепочки, состоящие из типичных палочек. 96.Допустимые сроки исследования при туберкулезе.Максимальный срок исследования у КРС 90 дней, когда погибают лаб жив, первый рост на твердых питательных средах наблюдается на 20 день, у птиц первый рост на пит ср 10 – 14 дн, лаб жив гибнут ч/з 1 мес. 97. Какое заболевание вызывает Cl.chauvoei?Cl. chauvoei — строгий анаэроб, хорошо растет на средах Китта — Тароцци, Хоттингера, красится по Грамму положительно. Вызывает ЭМКАР(эмфизем.карбункул). жүктеу/скачать 434 Kb. Достарыңызбен бөлісу: