Вопросы для ветеринарных специалистов лабораторий ргп «рвл» Бруцеллез, инфекционный эпидидимит и методы их диагностики?Бруцеллёз
жүктеу/скачать 434 Kb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- 193. Контроль за дезинфекцией лабораторных посуд после постановки серологических реакций
- 194. Что такое флуоресцентная детекция в ПЦР.
- 195. Основные показатели для оценки качества ПЦР тест-систем.
- 196 Факторы влияющие на появление ложноотрицательных результатов ПЦР-анализа
- 197. Оформление пробирок для постановки серологических реакций на бруцеллез.
| 192. Внутренний контроль ПЦР анализа. При постановке реакции проводится соответствующий контроль: положительный — препарата ДНК исследуемого возбудителя; отрицательный — деионизированной воды. Последний необходим для проверки реакционной смеси на наличие контаминации продуктами амплификации (ампликонами).
193. Контроль за дезинфекцией лабораторных посуд после постановки серологических реакций. Контролем дезинфекции посуды служат смывы с поверхности, которые сеются на МПБ. Выдерживаем сутки в термостате. При качественной дезинфекции не должно наблюдаться осадка, изменения цвета и прозрачности бульона. 194. Что такое флуоресцентная детекция в ПЦР. В большинстве случаев амплифицированный фрагмент ДНК или кДНК выявляют методом электрофореза в 1,5-2% геля агарозы в присутствии бромистого этидия, который образует с фрагментами ДНК устойчивый комплекс. При облучении геля ультрафиолетом длиной волны 290-330 нм амплифицированные фрагменты ДНК проявляются в виде светящихся полос.Специфичность полосы определяется её положением по отношению к ДНК-маркерам и положительному контролю. Использование гибридизации с внутренними ДНК-зондами позволяет в ряде случаев значительно повысить чувствительность и специфичность детектирования ПЦР-продуктов. Благодаря отсутствию необходимости в подготовке и проведении электрофоретического разделения, возможности автоматизации для анализа большого количества образцов и использования нерадиоактивного формата детектирования, этот метод становится все более распространенным. В некоторых случаях применение специальных флюоресцентных "маркеров" позволяет контролировать проведение амплификации или детектирование конечных продуктов ПЦР непосредственно в реакционной пробирке 195. Основные показатели для оценки качества ПЦР тест-систем. ПЦР Тест-системы должны храниться в определенном температурном режиме. Использовать тест системы до указанного срока годности. Просроченные тест системы неиспользуются. 196 Факторы влияющие на появление ложноотрицательных результатов ПЦР-анализа. Чувствительность ПЦР может достигать математически возможного предела (детекции 1 копии ДНК- матрицы), поэтому существует высокая степень опасности получения ложно- положительными результата в силу переноса через предметы и реогенты как самой ДНК- матрицы (реже), так и аплифеконов (очень часто), получаемых в больших количествах во многих пробирках в течение ежедневной работы. В связи с этим нами разработаны специальные требования к планировке и режиму работы ПЦР- генодиагностической лаборатории. Причинами ложно- положительных результатов являются следующие 3 вида контаминации:1.Перекрестная контаминация от пробы к пробе (в процессе обработки клинических образцов или при раскапывании реакционной смеси), приводящей к появлению спорадических ложно- положительных результатов;2.Контаминация рекомбинантными плазмидами, содержащими клонированные последовательности детектируемого гена;3.Контаминация продуктами амплификации (амплификонами) являются наиболее частой причиной ложно- положительных результатов, поскольку в процессе ПЦР- диагностики амплификоны накапливаются в больших количествах и очень легко переносятся с аэрозолями и через приборы. Поэтому детекция продуктов ПЦР должна проводиться в изолированной комнате сотрудником, не производящим обработку клинических образцов и не готовящим реактивы для ПЦР. Приготовление основных растворов также должно производится в отдельной чистой комнате. Все растворы должны храниться и использоваться в небольших порциях.Необходимо постоянно использовать собственные лабораторные контроли и периодически применять зашифрованные отрицательные и положительные контрольные образцы для оценки специфичности и чувствительности ПЦР- генодиагностических исследований. 197. Оформление пробирок для постановки серологических реакций на бруцеллез.Для постановки серологических реакций используем пробирки флоринского. В используемом штативе подписываем первую и последнюю пробирку, согласно количеству проб. Также подписываем номер ведомости, общее количество проб и контроль. жүктеу/скачать 434 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|