Лабораториялық сабақтың тақырыбы №9 Сәбіз клеткаларының паренхимиялық мәдениетінде каллус тіндерін алу Лабораториялық сабақтың оқыту нәтижелері
жүктеу/скачать 0,77 Mb.
|
1 2
- Бұл бет үшін навигация:
- Лабораториялық сабақтың мазмұны: Жабдықтар мен материалдар
|
Лабораториялық сабақтың тақырыбы №9 Сәбіз клеткаларының паренхимиялық мәдениетінде каллус тіндерін алу Лабораториялық сабақтың оқыту нәтижелері: 1. Зертханалық жұмыстарды жүргізу ережелерін біліп, техникалық қауіпсіздік ережелерімен танысады. 2. Зертхана бөлмесіне қойылатын талаптар туралы түсініп, іске асыруда білім дағдыларын қалыптастырады. 3. Зертханалық жұмыстарды жүргізуде өзінің іс-әрекет жоспарын әзірлейді, құрал-жабдықтармен жұмыс істеуге мүмкіндік алады. Лабораториялық сабақтың мазмұны: Жабдықтар мен материалдар: Оқу зертханасы, ламинарлық бокс, термостат, центрифуга, микроскоптар, Су моншасы, Тоңазытқыш, дистиллятор, автоклав; пластикалық және шыны ыдыс; сәбіз тұқымы, каллус матасының дайын үлгілері. Каллус тіні-жасушалық саралаудың бір түрі, өсімдік ағзаларының дедифференцияланған жасушаларының ұйымдастырылмаған пролиферациясы арқылы пайда болады. Табиғатта өсімдіктерде каллус тіні ерекше жағдайларда (мысалы, Жарақат кезінде) пайда болады және ұзақ уақыт жұмыс істейді. Бұл мата жарақат орнын қорғайды, жойылған органның анатомиялық регенерациясы немесе регенерациясы үшін қоректік заттарды жинауы мүмкін. Каллус пайда болуы әрдайым жарақат әсеріне байланысты емес. Каллус гормональды баланстың бұзылуына байланысты кесік бетіне байланыссыз экспланттың ішкі тіндерінің пролиферациясы нәтижесінде пайда болуы мүмкін. Өсіп келе жатқан каллус мата қабаттарын жұлып, бетінде дамиды. Өсірілетін каллус жасушаларын алу үшін Жоғары өсімдіктердің әртүрлі органдары тіндерінің фрагменттері – тамырлары, жапырақтары, сабақтары, шаңдар, ұрықтар (экспланттар) ауксиндер бар жасанды ортаға, пробиркаларға, колбаларға, Петри тостағандарына (in vitro) орналастырылады. In vitro өсіру кезінде қолданылатын ең маңызды гормондардың бірі-жасушалардың бөлінуін және созылуын белсендіретін ауксиндер. Жасушаларға еніп, ИУК мембраналардың функционалдық белсенділігіне, рибосом мен ядролық аппараттың жұмысына әсер ете отырып, ерекше рецепторлармен байланысады. Ауксин ретінде 2,4-дихлорфеноксихлорсус қышқылы (2,4-Д), нафтилуксус қышқылы (НУК), индолилмай қышқылы (ИМК), экспланттың түріне байланысты 0,5 - 10 мг / л концентрациядағы индолилуксус қышқылы (ИУК) қолданылады. Каллус немесе экспланттан жасалған өсімдіктерді Регенерациялау үшін цитокининдердің жоғары мөлшері бар ортаны пайдаланады. Ең көп қолданылатын заттар: 6-бензиламинопурин (БАП), зеатин, 6-фурфуриламинопурин (кинетин). Каллус түзілу процесі эксплант тіндерінің дедифференциялануы алдында болады. Ддифференция кезінде тіндердің өсімдіктегі ерекше функцияларына тән құрылымын жоғалтады және бөлінетін жасушалардың жай-күйіне қайтарылады. Егер каллус алу үшін пайдаланылатын эксплант органның фрагменті болса, онда оның құрамында эпидермальді жасушалар, камбия жасушалары, тамыр жүйесі, жүрек және бастапқы қабықтық паренхималар бар. Көбінесе пролиферируют жасушалары камбия, қабығы, сердцевинной паренхимасының. 16 сурет-Сәбізден каллус алу кезеңдері (http://plantgen.com) Дақыл жасушалары екі түрде өмір сүре алады: сұйық қоректік ортада суспензия түрінде және каллус түрінде қатты қоректік ортаның бетінде. Беттік өсіру қатты агаризацияланған ортада жүзеге асырылады. Беттік әдіспен өсірілген каллус матасы қатаң белгіленген анатомиялық құрылымы жоқ жұқа қабырғалы паренхимиялық жасушалардың аморфты массасын білдіреді. Массаның түсі ақ, сарғыш, жасыл, қызыл болуы мүмкін. Өсіру жағдайына және шығу тегіне байланысты каллус ұлпалары болады: - борпылдақ, қатты оводненные, жеке жасушаларға оңай ыдырайтын; - орташа тығыздығы, меристематикалық ошақтары жақсы білінетін; - тығыз, редукцияланған камбия және тамырлары бар. Әдетте, ұзақ мәдениетте ауксиндер бар орталарда каллус тіндері пигментацияны жоғалтады және борпылдақ болады. Жасушаның каллус тіндерін өсіру циклінде бірнеше бөліктерден кейін созылу өсіміне кіріседі, жетілген каллус тіні ретінде сараланады және азып-тозады. Қартаю, бөлу және одан әрі өсу қабілетінің жоғалуы, сондай - ақ каллус жасушаларының өлі болмауы үшін, бастапқы каллус 28-30 күннен кейін жаңа қоректік ортаға тасымалданады, яғни каллус тінінің бәсеңдеуін немесе субкультивациялануын жүргізеді. Өсімдіктер жасушалары мен ұлпалары арасындағы физиологиялық және құрылымдық айырмашылықтардың пайда болуы олардың функционалдық мамандануына байланысты дифференциация процесі деп аталады. "Дифференциация" ұғымы эмбриональды, меристематикалық жасушаның мамандандырылған түрленуін көрсетеді. Меристематикалық жасушалар, құрылымы мен қызметі бойынша бір типті, әртүрлі ағзалардың тіндерін жасай отырып, әртүрлі жолдармен дами бастайды. жүктеу/скачать 0,77 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|
1 2