1-15 дәрістер. Микроскопиялық техниканың негіздері Дәріс Тақырыбы
Абсолютті спирттен кейін өткізу процесі келесі схема бойынша жалғасады
жүктеу/скачать 152,73 Kb.
|
1-15 дәрістер Микроскопиялық техника негіздері(7)
- Бұл бет үшін навигация:
- Парафинді нысанға сіңірту арнайы тізбектерден тұрады
| Абсолютті спирттен кейін өткізу процесі келесі схема бойынша жалғасады:
Қоспа I (75% абсолютті спирт және 25% хлороформ), 1 сағат 30 мин. Қоспа II (50% абсолютті спирт және 50% хлороформ),1 сағат 30 мин. Қоспа III (25% абсолютті спирт және 75% хлороформ),1 сағат 30 мин. Тазахлороформ І.-1 сағат 30 мин. Таза хлороформ II.-1 сағат 30 мин. Қажет болған жағдайда II және III қоспаларда, материал 24 сағ. және одан да көп уақытқа қалдыруға болады. Материал қоспаның бес бөлігін өткізгеннен кейін, I қоспасы төгіліп, II қоспасы өз орнын алады. III қоспа қайтадан дайындалады. Нысанды спирт және хлороформның жаңа қоспасына ауыстырған кезде алдымен сұйықтықтың бетіне қалқып шығады, содан кейін шынының түбіне батуы керек. Егер зат батып кетпесе, ол хлороформмен нашар қаныққан. Материалды осы ерітіндіде ұзақ мерзімге қалдыру ұсынылады. Таза хлороформда материал әрқашан бетінде қалқып жүреді. Жақсы дегидратацияланудың индикаторы материалды II және III қоспаға және таза хлороформға ауыстырған кезде лайланбау болып табылады. Хлороформмен жақсы қаныққан кезде нысандар мөлдір болатынын есте ұстаған жөн. Нысандарда мөлдір емес жерлердің пайда болуы фиксатордың немесе фиксациялануға қатысты ақаулықтарды көрсетеді. Жұмыстың соңғы кезеңі - хлороформды парафинмен толық ауыстыру. Процесс хлороформның булануына негізделген, оның орнына балқытылған парафин ұлпаға енеді. Булану өте тез жүрмеуі керек, әйтпесе парафин ұлпаларға еніп үлгермейді, нысандар кішірейіп және парафинмен мүлдем қанықпауы мүмкін. Бұл жағдай материалдық зиянның ең көп таралған себебі болып табылады. Парафинді нысанға сіңірту арнайы тізбектерден тұрады Аз мөлшерде хлороформ қақпағы жақсы ұнтақталған шыны ыдыстарға құйылады және қақпағы жақсы жабылатын ыдыс алынуы керек. Сұйықтық деңгейі материалдан 2-4 мм жоғары болуы керек. Бөтелкені аздап еңкейтіп, қабырғаға аздап балқытылған, бірақ ыстық емес парафин құю керек, ол сұйықтықтың бүкіл бетін жұқа қабатпен жабуы керек. Парафин қатып қалған кезде сұйықтықтың үстінде материалдан тығын жасайды, бұл еріткіштің тез булануына жол бермейді. Бюкстер тығыз жабылып, термостатқа + 400С температурада бір тәулікке қойылады. Бір күнде хлороформды буландыруға кірісуге болады. Алдымен қақпақты сәл ашып, бөтелкелерді температурасы + 600С термостатқа қойю керек. Хлороформ буланған кезде материал балқытылған парафинмен сіңдіріледі, егер ол бөтелкеде жеткіліксіз болса, толтыруға болады. Еріткіштің толық жоғалуы оған тән иіс пен дәмнің болмауымен анықталады. Егер булану кешіктірілсе, онда парафинді төгіп, орнына тазасын құю керек. Хлороформның булануының максималды дәлдікпен өндірілуін анықтау. Ереже бойынша, әдетте булану 5-тен 8 күнге дейін созылады. Материалды термостатта ұзақ уақыт ұстау қажет емес, оны мерзімінен бұрын алып тастау керек, өйткені бұл оны микротомда кесуге жарамсыз етеді. Балқытылған парафиндегі материал таза хлорофомдағыдай біртекті және мөлдір болуы керек. Еріткіш парафиннен, демек, заттан толығымен жойылған кезде, материал термостаттан алынып, толтырылады. Құю дегеніміз - балқытылған парафин затпен және этикеткамен бірге қалыпқа құйылады, ол қату керек. Материалды парфинмен тазарту жетістігі көбіне парафиннің сапасына байланысты. Ол біртекті, аморфты, таза, ұшпа қоспасыз және белгілі бір балқу температурасына ие болуы керек (+50-540С). Жоғары балқу температурасы қаттылықпен, төмен балқу температурасы парафиннің жұмсақтығымен байланысты. Коммерциялық парафин тез арада жұмысқа жарамсыз, өйткені ол жоғарыда аталған қасиеттерге ие емес. Жоғары сапалы парафинді алу үшін 1 кг парафинге 30 граммға дейін ара балауызын қосып қақпағы ашық қайнаған дистилденген суда 5-7 күн қайнатады. Суды күн сайын жаңадан ауыстырады. Қайнау температурасында парафинді механикалық қоспалардан эмаль ваннасына тазарту үшін ыстық воронка арқылы (воронка суық болса парафин қатып қалады) сүзеді, оның қабырғаларына глицерин жағылады. Қатқан парафинді 10х10 см өлшемді таяқшаларға кеседі. Парафинмен жұмыс істеу кезінде белгілі бір ережелерді сақтау керек: балқытылған парафинді суық суға тамып кетуден ғана емес, сонымен қатар оның буларынан да қорғау керек, сондықтан онымен жұмыс жасағанда онымен дем алмауға тырысу керек. жүктеу/скачать 152,73 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|