ЖАППАЙ ҚАУІП ЖАҒДАЙЫНДА СОНЫМЕН ҚАТАР, БЕЙМƏЛІМ ЖЕРЛЕУЛЕРДІ

26
ДЕНСАУЛЫҚ САҚТАУ ҰЙЫМЫ ЖƏНЕ ГИГИЕНА 
САЛАУАТТЫ ӨМІР СҮРУ МƏСЕЛЕЛЕРІ
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
posed  the  methods  of  research,  provided  the 
practical  advices  for  experts-thanatologist  and 
biologists  to  optimize  the  removal,  storage  and 
transportation of biological material.
В 
современных  условиях  во  всем  мире 
особую  остроту  приобрела  проблема 
неуклонного количества неидентифицирован-
ных останков граждан, а также военнослужа-
щих,  участвовавших  в  локальных  вооружен-
ных  конфликтах.  Все  более  часто  возникают 
крупномасштабные  техногенные  катастрофы 
и  аварии,  природные  катаклизмы  (землетря-
сения,  наводнения  и  т.п.);  межнациональные 
конфликты;  осуществляются  террористиче-
ские  акты;  обнаруживаются  ранее  неизвест-
ные захоронения. 
В  результате  объектами  идентификации 
становятся останки неизвестных лиц в состо-
янии скелетирования, обугливания, выражен-
ной гнилостной трансформации, расчленения 
и  т.п.  Прижизненные  и  посмертные  обшир-
ные повреждения, посмертные разрушающие 
процессы  изменяют  человека  так,  что  он  не 
может  быть  опознан  с  помощью  традицион-
ных  медико-криминалистических  методов. 
Однако  установление  личности  погибших 
имеет  важнейшее  следственное,  нравствен-
ное и социальное значение.
К  настоящему  времени  судебными  меди-
ками  накоплен  большой  опыт  работы  в  оча-
гах  массовой  гибели  людей  и  имеются  ме-
тодические  рекомендации  по  организации 
деятельности  судебно-медицинской  службы 
в  условиях  катастроф,  основными  задачами 
которой  являются  опознание  личностей  и 
установление причины их смерти. Примером 
тому может служить крушение в черте города 
14  сентября  2008года    самолета  «Боинг  737-
500»  компании  «Аэрофлот-Норд»,  летевший 
из Шереметьево. Тогда была проведена рабо-
та по генетическому исследованию и иденти-
фикации фрагментов тел 88 погибших. Нель-
зя не вспомнить трагедии в Северной Осетии-
Алании,  крушение  «Невского  экспресса»      в 
результате взрыва в России и т.д. [8,9]   
На  территории  Казахстана  –  крушение  
вертолета  «МИ-8»  погранслужбы  Комитета 
национальной безопасности Казахстана в Ка-
зыгуртском районе Южно-Казахстанской об-
ласти  в  сентябре  2009  унесло  жизни  десяти 
пограничников,  столкновение  рейсового  ав-
тобуса следующего по маршруту Тараз-Алма-
ты и встречной грузовой автомашины в июле 
2010, в результате которого погибли 18 чело-
век,  падение  самолета  АН-2    №UN  0161    24 
июня 2010 года около с.Сарыбулак Айыртау-
ского  района  Северо-Казахстанской  области 
в 1 км. от с.Сарыбулак в результате которого 
погибли командир воздушного судна и второй 
пилот.  В результате данных катастроф иден-
тификация останков проводилась экспертами  
молекулярно-генетического  отдела  Центра 
судебной медицины.  
На поступающих на экспертизу скелетиро-
ванных,  гнилостно  измененных,  обугленных 
останках  мягкие  ткани  если  и  сохраняются, 
то  разлагаются  настолько,  что  установить 
даже  видовую  и  половую  принадлежность 
практически невозможно.  Поэтому объектом 
исследования становится  костная ткань.  Она 
более  устойчива  к  воздействию  различных 
факторов  внешней  среды  (ультрафиолето-
вые лучи, влажность, микроорганизмы и др.), 
значительно  медленнее  подвергаются  раз-
рушению;  и,  соответственно,  исследуемые  в 
них  биологические  структуры  сохраняются 
более продолжительный период. Применение 
молекулярно-генетических  методов  анализа 
в  таких  случаях  позволяет  решить  проблему 
идентификации костных останков и установ-
ления их принадлежности конкретному лицу.
Особенно  трагичны  последствия  авиаци-
онных  катастроф,  поскольку  вовлеченные  в 
них  люди,  становясь  жертвами,  зачастую  те-
ряют  большинство  из  индивидуальных  при-
знаков, позволяющих идентифицировать их в 
ряду большого числа погибших. 
Нельзя  не  учитывать  обстоятельства  ги-
бели  людей,  следственные,  нравственные  и 
социальные  причины,  ментальность  населе-
ния  определенного  региона,  некоторый  «не-
здоровый»  ажиотаж,  царящий  вокруг  проис-
шествия.  Указанные  причины  требуют  про-
ведение экспертиз в крайне короткий срок  с 
максимальной результативностью. 
Для  успешного  проведения  идентифика-
ции костных останков важны все этапы:
•Слаженная  работа  следственных  органов 
с  судебно-медицинскими экспертами-танато-
логами, которые  провели   сравнительно-ана-
томическое  сопоставление  останков,  изъяли 
и  пронумеровали  костные    фрагменты  для 
молекулярно-генетической  экспертизы,  с  су-
дебно-медицинскими 
экспертами-биолога-
ми, своевременно изъявшими образцы крови 
близких родственников погибших;
•Следственными 
органами 
оперативно 
проведенные  розыскные  мероприятия  близ-
ких родственников погибших;
•Своевременная  доставка  останков  в  спе-
циальных условиях  в молекулярно-генетиче-
ский отдел;
•Оценка  состояния  полученного  для  ис-
следования материала, при этом учитывается 
время  с  момента  происшествия,  условия  до-
ставки биологического материала, масштабы 
воздействия  как  техногенных,  так  и  природ-
ных факторов;  
•Правильная организация работы и приме-
нение эффективных методик при проведении 
молекулярно-генетических  идентификацион-
ных экспертиз.

27
ГИГИЕНА И ОРГАНИЗАЦИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ. 
ВОПРОСЫ ЗДОРОВОГО ОБРАЗА ЖИЗНИ
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
Изучение  опыта  работы  с  костным  мате-
риалом  судебно-медицинских  экспертов  Бе-
лоруссии  и  Израиля,  а  также  собственный 
практический  опыт  нашей  лаборатории  за 
короткий  срок  ее  существования  позволили 
правильно и четко организовать работу. 
При  сравнительно-анатомическом  сопо-
ставлении  у  экспертов-танатологов  могут 
возникнуть  сомнения  в  принадлежности  от-
дельных фрагментов одному трупу, тогда не-
обходимо изымать все имеющиеся фрагмен-
ты частей тела. 
Костные  объекты  по  сравнению  с  други-
ми биологическими объектами исследования 
генотипической  экспертизы  (кровь,  сперма, 
слюна,  клетки)  содержат  в  сотни  и  тысячи 
раз  меньше  количества  ДНК,  которая,  как 
правило,  в  значительной  степени  разруше-
на, т.е. фрагментирована. Поэтому не всегда 
можно получить положительный результат. 
Извлечение  ДНК  из  костного  материала 
очень сложный процесс, включающий в себя  
следующие этапы:
•Подготовка  костного  материала.  Целью 
данного этапа является устранение загрязне-
ния чужеродным ДНК и измельчение (полу-
чение костных опилок) [7,8,9,13,14]. Однако, 
каждый  этап  подготовки  связан  и  с  возмож-
ной потерей ДНК костей. Измельчение кости 
проводится  с  помощью  криомельницы  с  ав-
томатической подачей жидкого азота; 
•Выделение  ДНК  проводится  методом 
органической  экстракции  (фенольная),  с 
использованием  абсорбирующих  веществ, 
специальных  наборов  на  основе  магнитных 
частиц вручную либо с применением автома-
тических станций для выделения ДНК (био-
робот); 
В  молекулярно-генетическом  отделе  Цен-
тра  судебной  медицины  успешно  применя-
ются следующие методики и способы выде-
ления ДНК: 
Метод органической экстракции включает 
в себя: 
•Декальцинация - лизис клеток с использо-
ванием соответствующего лизирующего рас-
твора (например, SDS (детергент), EDTA); 
• Расщепление белка с помощью фермента 
протеиназы К (разрушает белки);
•Смесь  фенол-хлороформ,  используемая 
для отделения ДНК от белков и других ком-
понентов  клетки,  с  последующим  центри-
фугированием.  Разделение  происходит,  от-
деляет  ДНК  от  белков  и  других  клеточных 
компонентов в  растворе и в результате ДНК 
остается в водной фазе;
•Очищение  и  концентрация  ДНК  с  помо-
щью  колонок  «Amicon  Ultra»,  «Microcon» 
производства  компании  «Millipore»  (Герма-
ния  ),  «QIAquick  PCR  purifi cation  Kit»  про-
изводства  компании  «QIAGEN»  (Германия),    
либо путем осаждения спиртом;
Преимуществом  данного метода является:
•Получение ДНК хорошего качества и вы-
сокой концентрации;
•Подходит для разных объектов;
•Хорошо  работает  со  старым,  разложив-
шимся материалом, костями;
•Выделенная ДНК очень стабильна и хоро-
шо хранится в замороженном состоянии.
Недостатки метода: 
•Высокая токсичность;
•Необходимо большое количество костного 
материала (3,5 г);
•Занимает много времени;
•Не всегда удаляет ингибиторы;
•Не всегда эффективен при работе с малы-
ми объектами;
•Возможна  контаминация  (большая  смена 
наконечников и пробирок);
•Трудно автоматизировать.
Набор 
«PrepFilerTM 
» 
производства 
«Applied  Biosystems»  (США)  на  основе  маг-
нитных частиц. Сущность метода заключает-
ся в следующем:
•Декальцинация  -  лизис  клеток  с  исполь-
зованием  BTA  буфера  с  добавлением  DTT  и 
протеиназы К в течение суток;
•К исследуемым образцам добавляют лизи-
рующий раствор и магнитные шарики;
•Выделенная  ДНК  связывается  с  магнит-
ными шариками;
•Вымывание  клеточных  элементов  в  про-
цессе отмывания;
•Элюирование ДНК с помощью низкосоле-
вого буфера.
Преимущества данного метода:
• Быстрый;
•Выделение качественной ДНК;
•Метод  одной  пробирки,  что  избавляет  от 
ингибиторов;
•Можно 
автоматизировать 
(биоробот 
AutomatExpress 
производства 
компании 
«Applied Biosystems»).
Недостатком  метода  является  его  дорого-
визна и необходимость дополнительного обо-
рудования.
Биоробот  EZ1  компании  «QIAGEN»  (Из-
раиль),  приобретенный  в  2011  году.  При-
лагаемый  набор  «QIAamp  DNA  Investigator 
Kit» производства компании «Qiagen» в виде 
катриджей.  Сущность  метода  также  заклю-
чается  в  использовании  магнитных  частиц  и 
аналогична набору «PrepFilerTM». Этап под-
готовки, декальцинации и лизиса проводится 
вручную любым возможным способом. Преи-
муществом данного метода является возмож-
ность  одновременного  выделения  ДНК  из  8 
объектов, длительность процесса занимает 18 
минут, то есть его применение весьма успеш-
но  в  случае  массовой  гибели  людей.  Недо-
статком метода является дороговизна. 

28
ДЕНСАУЛЫҚ САҚТАУ ҰЙЫМЫ ЖƏНЕ ГИГИЕНА 
САЛАУАТТЫ ӨМІР СҮРУ МƏСЕЛЕЛЕРІ
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
Возможность  использовать  различные  ме-
тоды выделения ДНК в зависимости от целей 
и  задач,  поставленных  перед  экспертом,  по-
зволяют быстро и результативно решать их. 
Следующие  этапы  проведения  эксперти-
зы  аналогичны  исследованиям  других  видов 
биологических  тканей  (кровь,  сперма,  клет-
ки  различного  эпителия,  волосы,  мышечная 
ткань и т.д.):
•Определение количества и качества выде-
ленного  ДНК  проводится  с  помощью  систе-
мы ПЦР-анализа в режиме реального времени 
модели 7500 производства компании «Applied 
Biosystems».  Система  обладает  специфично-
стью для человека, высших приматов, надеж-
ностью  и  воспроизводимостью  результатов 
[12]. Используемые наборы: для количествен-
ного  анализа  ДНК  человека  с  использовани-
ем  уникальной  копии  мишени  с  аутосомной 
специфичностью;  для  количественного  ана-
лиза  ДНК  мужской  Y-хромосомной  спец-
ифичностью;  для  одновременного  количе-
ственного анализа ДНК человека и ДНК муж-
ской Y-хромосомной специфичностью.
•Полимеразная  цепная  реакция  (ПЦР, 
polymerase  chain  reaction  -  PCR)  представля-
ет  собой  циклический  терморегулируемый 
процесс,  позволяющий  получить  большое 
количество  копий  интересующего  участка 
исследуемой  нуклеиновой  кислоты.  Следует 
отметить, что в современной литературе тер-
мин «амплификация» часто употребляют как 
синоним ПЦР [10,11,12,13,14]. 
•Методы анализа. Анализ STR-локусов ау-
тосом ядерной ДНК в настоящее время явля-
ется наиболее эффективным, перспективным 
и  активно  развивающимся  направлением 
ДНК-анализа  [5,12,14].  Проводится  с  помо-
щью  генетического  анализатора  с  программ-
ным  обеспечением,  в  частности  в  нашей  ла-
боратории это анализатор компании «Applied 
Biosystems»  модель  3130  четырехкапиляр-
ный. В вероятностных расчетах, проводимых 
при  оценке  достоверности  результатов  ана-
лизов,  используются  данные  популяционной 
генетики [15].
В отличие от STR-локусов аутосом, анализ 
STR-локусов половых Х и Y-хромосом, а также 
мт-ДНК  имеет  низкую  информативность.Y-
хромосома  передается  из  поколения  в  по-
коление  от  отца  к  сыну,  практически  в  не-
изменном  виде.  Типирование  по  маркерам 
У-хромосомы  используется  при  установле-
нии  родства  по  мужской  линии:  отец,  сын, 
брат,  дедушка по  отцу,  дядя  по  отцу и  т.д. У 
мужчин  половая  X-хромосома  практически 
не рекомбинирует в мейозе с Y-хромосомой и 
передается дочерям в неизменном виде. Типи-
рование по маркерам X-хромосомы не нашло 
широкого применения в криминалистических 
целях, так как содержится как у мужчин, так 
и у женщин. В настоящее время при исследо-
вании  STR-локусов    Y-хромосомы  и  мтДНК 
проводятся вероятностные расчеты для оцен-
ки достоверности результатов. 
В настоящее время, в качестве стандартных 
локусов  митохондриальной  ДНК  (мтДНК) 
для  установления  родства,  во  всем  мире 
приняты  участки  HV1  и  HV2.  Типирование 
мтДНК  по  данным  локусам  осуществляется 
путем  секвенирования.  мтДНК  идентична  у 
всех  родственников,  связанных  материнской 
линией  родства  (за  исключением  редких  му-
тационных событий). Таким образом, мтДНК 
можно  использовать  как  генетический  мар-
кер  материнской  линии  наследования,  и 
главным  образом  при  установлении  родства 
(принадлежность  индивида  к  конкретной  ге-
нетической  линии)  особенно  в  тех  случаях, 
когда  генетическая  дистанция,  разделяющая 
родственников,  больше,  чем  одно  поколе-
ние  (бабушка  –  внуки),  т.е.  косвенная  иден-
тификация.  Исследование  мт-ДНК  с  целью 
идентификации  личности  проводится  тогда, 
когда  для  экспертного  исследования  доступ-
ны крайне малые количества биологического 
материала или ДНК, содержащаяся в образце, 
сильно деградирована и хромосомная ДНК не 
может быть амплифицирована. Митохондри-
альная ДНК многократно использовалась для 
анализа  костных  останков,  возраст  которых 
исчисляется  десятками,  сотнями  и  даже  де-
сятками тысяч лет. Типирование митохондри-
альной  ДНК используется при установлении 
таких  родственных  связей  как:  родство  по 
женской линии; родство по матери [1,6,7,9]. 
Анализируя  проведенную  нами  работу  по 
идентификации  костных  останков  в  случае 
падения  вертолета  «МИ-8»,  автокатастро-
фы  на  трассе  Тараз-Алматы  в  2009,  падения 
самолета  АН-2    №UN  0161    в  2010,  а  также 
многочисленные  экспертизы  по  идентифи-
кации  неопознанных  костных  останков,  был 
определен порядок проведения и методов ис-
следования, поэтапные обязанности для каж-
дого  сотрудника  лаборатории,  позволяющие  
исключить излишние экономические затраты 
и  сократить  время  проведения  экспертизы. 
Очень важно всегда иметь в отделе необходи-
мое количество реактивов и расходных мате-
риалов  с  учетом  не  только  текущей  работы, 
но и случаев массовых катастроф.
Выработаны  рекомендации  для  судебно-
медицинских  экспертов  танатологов  и  био-
логов по изъятию биологического материала:
•Фрагмент  трубчатой  кости  с  дистальным 
концом, длиной 15-20 см, очищенный от мяг-
ких  тканей  и  распиленный  вдоль  пополам. 
Если по каким-либо причинам трубчатые ко-
сти  отсутствуют,  тогда  можно  предоставить 
фрагменты плоских костей (черепа, лопатки, 
ребра, костей таза) размером 5х10 см.; 

29
ГИГИЕНА И ОРГАНИЗАЦИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ. 
ВОПРОСЫ ЗДОРОВОГО ОБРАЗА ЖИЗНИ
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
•При  сохранении  мягких  тканей  и  отсут-
ствия в них гнилостных изменений (в случа-
ях  массовых  катастроф),  изымать  несколько 
кусочков  ткани  одного  фрагмента  из  разных 
мест и из более глубоких слоев размерами от 
2х2  см  до  5х5  см,  в  зависимости  от  количе-
ства биологического материала;
•Если  при  сравнительно-анатомическом 
сопоставлении имеются сомнения в принад-
лежности  отдельных  фрагментов  одному 
трупу,  тогда  лучше  изымать  для  исследова-
ния  несколько  различных  костей  от  одного 
предполагаемого трупа;
•Все изъятые образцы тканей должны быть 
пронумерованы,    подписаны  и  немедленно 
помещены  в  морозильную  камеру,  в  замо-
роженном  состоянии  доставлены  в  молеку-
лярно-генетическую  лабораторию.  Для  этих 
целей  можно  использовать  переносные  хо-
лодильные камеры, позволяющие поддержи-
вать температуру ниже ноля в течение суток; 
•При  изъятии  образцов  крови  у  родствен-
ников  необходимо  учитывать  следующие 
близкие родственные связи [2,3,4]:
•Мать, отец – идеальный вариант;
•Если жив или известен только один из ро-
дителей,  тогда дополнительно можно предо-
ставить  образцы  крови  детей  потерпевшего 
(-ей) и их матери (отца), брата, сестры;
•Если  родителей  нет,  тогда  предоставить 
образцы крови детей потерпевшего (-ей) и их 
матери (отца), брата, сестры;
•Если потерпевший мужчина, тогда допол-
нительно возможно установление родства по 
мужской  линии,  для  чего  предоставляются 
образцы  крови  мужчин  родственников  по 
мужской линии, т.е. отец, сын, брат, дедушка 
по отцу, дядя по отцу и т.д.
•Установление родства по женской линии, 
родства по матери проводится при невозмож-
ности исследовать ядерное ДНК и как допол-
нительный метод, для чего предоставляются 
образцы  крови  бабушки  по  материнской  ли-
нии,  матери,  сестры,  тети  по  матери  и  т.д.; 
когда  генетическая  дистанция,  разделяющая 
родственников,  больше, чем одно  поколение 
(бабушка – внуки).
Идентификация массовых жертв авиаката-
строф, неопознанных костных останков, имеет не только судебно-медицинское и криминали-
стическое, но также социально-нравственное и гражданско-правовое значение.
ЛИТЕРАТУРА
1. Anderson S., Bankier A.T., Barrell B.G. et al. Sequence and organization of the human mito-
chondrial genome // Nature. -1981. -V. 290. -P. 457-465
2. Георгиев Г.П. Гены высших организмов и их экспрессия.-М.: Наука, 1989.- 255 с.
3.Гыскэ Л.И., Иванов П.Л. Молекулярно-генетический подход к судебно-медицинской экс-
пертизе биологического родства на ранних стадиях эмбрионального развития// Суд.-мед. экс-
перт.- 1995.-  №3. - С. 36-40
4. Иванов ПЛ., Гуртовая С.В., Вербовая Л.В. и др. Геномная “дактилоскопия” в экспертизе 
спорного отцовства и определения биологического родства // Суд.-мед. эксперт.- 1990. ¹ 2.
5.  Иванов  П.Л.  Использование  индивидуализирующих  систем  на  основе  полиморфизма 
длины амплифицированных фрагментов (ПДАФ) ДНК в суд.-мед. экспертизе идентификации 
личности и установления родства // Суд.-мед. эксперт. -1999. ¹ 4. 
6.  Иванов  П.Л.  Экспертная  идентификация  останков  императорской  семьи  посредством 
молекулярно-генетической верификации родословных связей // Суд.-мед. эксперт.- 1998. ¹ 4. 
7.  Иванов  П.Л.  Молекулярно-генетическая  идентификация  останков  царской  семьи                          
// Вестн. РАН. -1994. ¹10; Он же. Идентификация останков царской семьи: вклад молекуляр-
ной генетики // Вестн. РАН. -1996. ¹ 4.
8. Иванов ПЛ., Жаров В.В., Фролова С.А. и др. Комплексное применение технологий мо-
лекулярно-генетической индивидуализации биологических объектов для судебно-экспертной 
идентификации неопознанных останков жертв террористических актов в Москве в 1999 году 
//  Суд.-мед. эксперт.- 2002. ¹ 4. 
9.  Иванов  ПЛ.,  Фролова  С.А.,  Орехов  В.А.  и  др.  Типирование  митохондриальной  ДНК  - 
новый уровень решения идентификационных задач при судебно-медицинской экспертизе не-
опознанных останков жертв террористических актов в Москве и вооруженного конфликта в 
Чеченской Республике // Суд.-мед. эксперт.- 2001. ¹ 3. 
10.  Картель  Н.А.,  Макеева  Е.Н.,  Мезенко  А.М.  Генетика.  Энциклопедич.  словарь 
.-Мн.:Технологiя, 1999. - 448 с.
11.Котлярова С.Э., Коваленко С.Н., Шаронова Д.А., Новоселов В.П. и др. Применение ме-
тода полимеразной цепной реакции для анализа полиморфных участков генома человека при 
поведении  суд.-мед.  экспертизы    вещественных  доказательств//    Суд.-мед.  эксперт.-  1994.  - 
№2. - С. 19-21
12.  Кухарьков  Ю.В.,  Боровко  С.Р.,  Пучков  Г.Ф.,  Миклевич  Н.А.ДНК-типирование.-

30
ДЕНСАУЛЫҚ САҚТАУ ҰЙЫМЫ ЖƏНЕ ГИГИЕНА 
САЛАУАТТЫ ӨМІР СҮРУ МƏСЕЛЕЛЕРІ
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
Мн.:БелАКК, 2003.
13.  Перепечкина  И.О.,  Пименов  М.Г.,  Стегнова  Т.В.  Исследование  объектов  суд.-биол. 
экспертизы полимеразной цепной реакцией // Метод. рекомендации. -М.:ЭКЦ МВД России, 
1995.-  16 с.
14. Пименов М.Г., Культин А.Ю., Кондрашов С.А. Научные и практические аспекты кри-
миналистического ДНК-анализа// Учеб. пособие.-М., 2001.
15.  Перепечина  И.О.,  Гришечкина  С.А.  Вероятностные  расчеты  в  ДНК-дактилоскопии                  
//Метод. рекомендации.-М., 1996.
© Д.Жарлыганова, 2012

жүктеу/скачать 4,34 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: