Астана Медициналық Журналы

Таблица 2. 
Влияние  салсоколлина на антагонистическую активность L. fermentum
Примечание.     в- высокая; с- средняя
При  изучении  влияние  салсоколлина  на 
плазмокоагулазную  активность  S.  aureus  
установлено,  что  в  целом  при  добавлении  в 
плазму салсоколлина не сказывается на свер-
тывающей активности   S. aureus.  Лишь наи-
более    высокая  концентрация  салсоколлина 
(0,02  г/мл)    замедляет  свертываемость  плаз-
мы крови на протяжении первых 6 часов ин-
кубирования, в отличие от контроля (табл.3). 
Таблица 3. 
Влияние салсоколлина на плазмокоагулазную активность S. аureus
+
+
+
+
+
1
2
3
4
5
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Далее  определяли  влияние  салсоколлина 
на гемолитическую активность Str. pyogenes, 
при  этом  отмечено,  что  экстракт  в  исследо-
ванных концентрациях не оказывает ингиби-
рующего действия на гемолитическую актив-
ность.  Только  наиболее  высокая  концентра-
ция  салсоколлина  (0,02  г/мл)  незначительно 
уменьшает  зону  гемолиза  вокруг  колоний  
Str. рyogenes на кровяном агаре (табл.4). 
Таблица 4. 
Влияние салсоколлина на гемолитическую активность  Str. рyogenes 
(зона гемолиза, в мм).
Контроль
9,0
Таким образом,
В  результате  проведенных    исследований 
in  vitro,  установлено,  что  препарат  салсо-
коллин  в  концентрациях,    сопоставимых  c 
терапевтическими  дозами  практически  не 
оказывает  влияния  на  жизнеспособность  и 
антагонистическую активность лактобацилл, 
не подавляет плазмокоагулазную активность 
S. aureus и гемолитическую активность -  Str. 
рyogenes. 
ЛИТЕРАТУРА
1.  Данченко Е.О. // Мед. и соц.-психол. проблемы алкогольной и наркотической зависимости: 
Материалы 1-й Рос.-Белорус. конф. — Витебск, 2002. — С.119—123 
  2.   Козловский А.В., Лелевич В.В., Шейбак В.М. и др.Биологически активные соединения 
в  регуляции  метаболического  гомеостаза.  Ч.1.//  Материалы  международ.  науч.  конф.  — 
Гродно, 2000.- С. 243—246
3.  Конакбаева  Р.Д.,  Умбеталина  Н.С.,  Досмагамбетова  Р.С.  и  др.  Клиническое  применение 
«Салсоколлина» у больных хроническими диффузными заболеваниями печени //Фармация 
Казахстана.- 2004:Спец. вып. – С.95-97
4.  Кузгибекова  А.Б.  Применение  препарата  «Салсоколлин»  в  детской  гастроэнтерологии                    
// Фармация Казахстана.- 2004:Спец. выпуск. - С.59-62 
5.  Бондаренко  В.М.,  Грачева  Н.М.,  Мацулевич  Т.В.  Дисбактериозы  кишечника  у  взрослых              
106
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ТƏЖІРИБЕЛІК   МЕДИЦИНА  МƏСЕЛЕЛЕРІ

// КМК Sci Press. М., 2003. - 220 с.
6. Гаврилова Н.Н., Ратникова И.А., Баякышова К. Антагонистически активные штаммы мо-
лочнокислых  бактерий,  выделенные  из  кишечника  человека  и  животных  //  Материалы 
международ. науч.-практ. конф. памяти Г.И. Гончаровой «Пробиотические микроорганиз-
мы – совр. сост. вопроса и перспективы использования». – М., 2002. - С. 31-32
©Коллектив авторов, 2012
УДК  616-018-021.6-092.4:616.379-008.64
А.М.Тулиева, А.А. Жузжасарова, А.Г. Мейрамова,
 
А.А.Кикимбаева
АО «Медицинский университет Астана»
РГП «Карагандинский государственный медицинский университет»
ТРИПТОФАННЫҢ ДИАБЕТОГЕНДІ МЕТАБОЛИТТЕРІНІҢ ƏСЕРІ ЖАЙЫНДАҒЫ 
ОҚШАУЛАНҒАН ҰЙҚЫБЕЗ АРАЛШЫҚТАРДЫҢ 
РАСТРЛЫҚ ЭЛЕТРОНДЫҚ МИКРОСКОПИЯСЫ 
А.М.Тулиева, А.А. Жузжасарова, А.Г. Мейрамова,
 
А.А.Кикимбаева
Триптофанның  диабетогенді  метаболиттерінің  бірі  8-оксихинальдиннің  оқшауланған 
ұйқыбез аралшықтарға тікелей əсері аралшықтардың беткейінде орналасқан жасушалардың 
қатты  зақымдануына,  В-жасушалардың  деструкциясына  жəне  олардың  құрамындағы 
инсулиннің төмендеуіне əкеліп соқтырады. 
SCANNING ELECTRON MICROSCOPY OF ISOLATED PANCREATIC ISLETS 
TREATED BY DIABETOGENIC METABOLITS OF TRYPTOPHAN
A. Tulieva, A. Zhuzjasarova, A. Meyramova, А. Kikimbayeva
 
Direct action of 8-oxyquinaldine, one of diabetogenic metabolits of Tryptophan, on the isolated 
rat’s pancreatic islets result more marked destructive changes of cells located on the surface of islets 
and by reducing of insulin content in B-cells. 
8
-оксихинальдин (8  ОД) является одним 
из диабетогенных производных 8-окси-
хинолина.  8  ОД  является  конечным  продук-
том нарушенного при дефиците витамина В6 
в организме  обмена ксантуреновой кислоты 
[1].  Однако,  до  настоящего  времени  вопрос 
о  его  содержании  в  крови  и  тканях  при  на-
рушениях  триптофанового  обмена,  сопрово-
ждающихся  усиленным  образованием  ксан-
туреновой  кислоты,  не  изучался.  Известно, 
что  8ОД  вызывает  хорошо  выраженный 
эспериментальный  диабет,  который  проте-
кает  несколько  более  мягко  по  сравнению  с 
вызываемым другими производными 8-окси-
хинолина. Между тем, в опытах на животных 
представляется затруднительным ответить на 
вопрос о том, каков эффект 8ОД на В-клетки 
поскольку  не  известно,  в  каких  количествах 
107
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ВОПРОСЫ  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

он  образуется  при  нарушениях  триптофано-
вого  обмена.  Кроме  того,  одновременно  при 
этом  накапливается  ксантуреновая  кисло-
та,  что  мешает  выявлению  чистого  эффекта 
8ОД, поскольку она также вызывает повреж-
дение В-клеток. 
Задача исследования состояла в изучении с 
помощью  растровой  электронной  микроско-
пии на модели изолированных островков ха-
рактера  прямого  эффекта  8-оксихинальдина 
на В-клетки панкреатических островков.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Опыты  проведены  на  неонатальных  кры-
сятах  4-5-дневного возраста линии LEWIS*. 
Для изоляции использована коллагеназа про-
изводства  фирм  “FLU KA”(Швейцария)  и 
“SERVA”(ФРГ).
Методика  изоляции.    Поджелудочные  же-
лезы  неонатальных крысят дезагрегировали 
в    2%-ном  растворе  коллагеназы  в  течение 
6  мин.;  материал  четырежды  промывали  в 
растворе  Hanks  и  центрифугировали  в  тече-
ние  2  мин.,  после  чего разделяли  в  градиен-
те  плотности  декстрана    (“SERVA”,  ФРГ). 
Островки  промывали  в  растворе  Hanks.  За-
тем в питательную среду  контрольных  проб 
(1) вводили 8-оксихинальдин (SIGMA, США) 
в  концентрации  92-104  мкг/мл  при  рН  7,33-
7,39. Препарат действовал в течение 30 мин., 
после чего питательную среду заменяли све-
жей.  Островки  идентифицировали  с  помо-
щью дитизона.         
Опыты  проведены  на  7-дневных  крыся-
тах. Изолированные с помощью коллагеназы 
панкреатические островки после очистки по-
мещались  в  питательную  среду  RPMI-1640, 
содержавшей  8  ОД  в  концентрации  98-110 
мкг/мл.  В  него  помещались  изолированные 
островки,  которые  инкубировались  при  рН 
7.32-7.39 и температуре +37
0
 С с добавлени-
ем  О
2
  в  течение  2  часов,  после  чего  их  вы-
сушивали  с  помощью  углекислоты,  напыля-
ли  золотом  и  исследовали  в  сканнирующем 
электронном микроскопе S-570 «Hitachi» при 
ускоряющем напряжении 15 кв. 
Для    оценки  состояния  островков  с  помо-
щью  световой  микроскопии  и  содержания  в 
В-клетках  инсулина  изолированные  остров-
ки, после предварительного культивирования 
в  питательной  среде  RPMI-1640  с  добавле-
нием  5%-ной    бычьей  сы воротки  и  5,5  мМ 
глюкозы,  фиксировали    в  жидкости  Буэна, 
обезвоживали  в  спиртах  возрастаю щей  кре-
пости  и  заливали  в  парафин.  Срезы  толщи-
ной  4  мкм  окрашивали  альдегидфуксином 
(Avocado Chemi cal Company, США, MERCK, 
ФРГ) [2,4], а также на инсулин псевдоизоци-
аниновым  мето дом  (“SER VA”,ФРГ)    [3,5,7]. 
Препараты  исследовали  в  светооптическом 
и  люминесцентном  микроскопе  при  длине 
волны возбуждающего све та, рав ной 350-370 
нм.  Плотность  окраски  оценивали  фотоме-
трически  по  степени  светопоглощения  и  по 
интенсивности флюоресценции [6,8].  Обна-
руженные  в  препаратах  островки  бы ли  под-
разделены на 3 гру п пы: 
•Не повре ж де нные – “A”; 
•Зна чи те льно  поврежденные  со  снижен-
ным содержанием инсулина -“Б”;  
•Неповрежденные  со  сниженным  количе-
ст вом депониро ванно го инсу лина – “В”.
Их  ко ли че ство  подсчитывалось  и  вы-
ражалось в процент ном отношении к общему 
числу островков. 
            
РЕЗУЛЬТАТЫ  И   ОБСУЖДЕНИЕ
При  исследовании  содержания  повреж-
денных  и  сохранивших  целостность  ин-
тактных  ОПЖ  после  3-дневного  куль-
тивирования,  а  также  после  предвари-
тельного 
воздействия 
8-оксихинальдина, 
получены  следующие  результаты  (табли-
ца).                                                                                                                                                    
Таблица. 
Влияние 8-оксихинальдина на состояние изолированных 
панкреатических островков и на содержание в них инсулина
108
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ТƏЖІРИБЕЛІК   МЕДИЦИНА  МƏСЕЛЕЛЕРІ

  Рис.1. 
Растровая электронная микроскопия. 
Интактный панкреатический островок;
ув. х 1250.
Рис.2. 
Растровая  электронная  микроскопия. 
Интактный панкреатический островок; 
ув. х 8830.
Рис.3. 
Растровая  электронная  микроскопия. 
Панкреатический островок после воздействия 
8 ОД; Деструкция  В-и А-клеток; ув х 6150. 
Рис.4.
Изолированный 
панкреатический 
островок после воздействия 8 ОД;
Деструкция В-клеток; ув.х280
. 
Рис.5. 
Интактный изолированный панкреати-
ческий островок; гистоструктура 
и содержание инсулина в В-клетках 
не изменены; ув.х280. 
Полученные  данные  свидетельствуют  о 
том, что 8-оксихинальдин  оказывает очевид-
ное  прямое  повреждающее  влияние  на  изо-
лированные панкреатические островки, хотя 
и значительно уступающее действию других 
диабетогенных  производных  8-оксихиноли-
на, которые вызывают разрушение более чем 
90% островков в культуре.  
Исследование с помощью растровой (скан-
нирующей)  электронной  микроскопии  со-
стояния поверхностного слоя клеток панкре-
атических  островков  показало  следующее.  
Клетки интактных островков имеют правиль-
ную сферическую, чаще шаровидную  форму, 
с  гладкой  поверхностью  (рис.1,2),  достаточ-
но  плотно  прилегают  друг  к  другу.  Остров-
ки имеют  компактную  овальную,  иногда  не-
правильную,  но  всегда  законченную  форму 
с  хорошо  различимыми  многочисленными 
А-  и  В-клетками  (рис.1).  Резко  выраженные 
отличия выявлены при исследовании остров-
ков,  подвергнутых  действию  8  ОД:  клетки, 
расположенные на  поверхности,  а  также в  2 
нижележащих  слоях,  подвергнуты  деструк-
ции.  В  отдельных  местах  они  сливаются  в 
бестструктурную  массу  (рис.3).  При  иссле-
довании  поверхности  нескольких  островков 
не удалось обнаружить клеток, сохранявших 
свою целостность.     
Исследование  содержания  инсулина  в 
В-клетках  на  основе  фотометрии  окрашен-
ных  псевдоизоцианиновым  флюоресцент-
ным    методом  препаратов  дало  следующие 
результаты. В контрольных интактных препа-
ратах содержание инсулина в относительных 
109
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ВОПРОСЫ  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

единицах составило 1,84±0,05, в препаратах, 
подвергнутых  действию  одного  из  наиболее 
сильно  действующего  цинксвязывающего 
диабетогенного  вещества  –  стрептозотоцина 
–  1,06±0,04,  а  в  срезах  островков  инкубиро-
вавшхся с 8 ОД – 1,36±0,05.
Исследование  состояния  гистострукту-
ры островков, подвергнутых  действию 8 ОД 
позволило  выявить  наличие  гидропической 
дегенерации,  пикноза  ядер  В-клеток,  резкое 
снижение  количества  депонированного  в  их 
цитоплазме  инсулина  (рис.4)  по  сравнению 
с контролем (рис.5), отмеченное всеми мето-
дами, уменьшение их  числа, хотя и не столь 
выраженное как при диабете, вызванном дру-
гими производными 8-оксихинолина.  
Результаты  свидетельствуют  о  том,  что  
культивированные  панкреатические  остров-
ки    повреждаются    в  условиях  прямого  воз-
действия  на  них  8-оксихинальдина.  Между 
тем,  этот  эффект  хотя  и  очевиден,  но  выра-
жен  в  меньшей  степени    в  сравнении  с  вли-
янием  других  производных  8-оксихинолина. 
Наибольшие  изменения  выявлены  со  сторо-
ны В-клеток поверхностного слоя островков 
с  помощью  метода  растровой  электронной 
микроскопии.
Полученные  результаты  не  позволяют  от-
ветить  на  вопрос,  какова  же  роль  8-оксихи-
альдина  в  развитии    диабета,  вызываемого 
диабетогенными  метаболитами  триптофана, 
образующимися в организме при нарушениях 
его обмена.  Несмотря на очевидный повреж-
дающий эффект, значение 8-оксихинальдина  
в развитии диабета по-видимому не является 
определяющим  по двум причинам: 
•Ксантуреновая  кислота,  образующаяся  в 
значительных  количествах  и  раньше  8-окси-
хинальдина, еще до его воздействия успевает 
оказать повреждающее действие на В-клетки, 
которое достаточно хорошо изучено [1]; 
•Несмотря    на  то,  что  ксантуреновая  кис-
лота способна превращаться в 8-оксихиналь-
дин,  вопрос  о  том,  в  каких  количествах  он 
образуется  в  организме  при  расстройствах 
триптофанового  обмена  остается  на  сегодня  
открытым.
*  Выражаем  признательность  директо-
ру  Института  Диабета  «Герхардт  Катч» 
(ФРГ) по науке, проф. К.-Д.Конерт за воз-
можность  выполнения  фрагмента  иссле-
дования  в  лаборатории  Института  Диабе-
та,  Директору  отдела  Diabetes  Transplant 
Unit  Сиднейского  Университета,  проф. 
B.Tuch, научному сотруднику L.Williams и 
руководителю  Диабетологической  иссле-
довательской  группы  (Караганда)  проф. 
Мейрамову  Г.Г. за оказанную   материаль-
но-техническую помощь в выполнении ис-
следования.                                                                                                                         
ЛИТЕРАТУРА
1. Мейрамов  Г.Г.,  К.-Д.Конерт,  Мейрамова  А.Г.  О  диабетогенном  действии  ксантуреновой 
кислоты // Пробл. эндокринол.-2001-.47, №1.-С.39-44
2. Kvistberg D., Lester G., Lazarow A. Staining of Insulin with Aldehyde-fucshin //J.Histochem. & 
Cytochem.-1966.-V.14.-P.104-111
3. Coalson  R.E.  Pseudoisocyanin  Staining  of  Insulin  and  Specifi ty  of  Emperical  Islet  Cell  Stain                     
//Stain.technol.-1966.-N2.-P.121-129
4. Meyramov G.G., Niedderer H. The Histofunctional Method Appreciating of Functional State of 
the Pancreatic B-cells in Tissue Culture // Diabetes research & clin.  рract.,  J Intern Diabet Fed-
eration.-1988.- V. 5, N11.- Р.226-227
5. Meyramov G.G., Meyramova R.G.  The high Specifi cal Fluorescent Method Revealing of Zinc-
ions in Pan c reatic B-cells // Diabetes, //J Am Diabet Assoc.-1991.-V.40, N5.- P. 65.
6.Meyramov  G.G. Victoria  4R Method Staining of Insulin in  B-cells  of Isolated Pancreatic Islets                 
/          G.G.Meyramov, A.A.Kikimbaeva, A.G.Meyramova  // Acta    diabetol.,  //Europ    Diabet  J.- 
2003.- V. 40, N4.- P. 208-209
7.Meyramov  G.G.  Displacing  of  Zn+2-ions  from  Toxic  Complexes  Zn+2-Chelator  Protect  B-
cells of Destruction / A.G.Meyramova, A.A.Kikimbaeva, G.G.Meyramov // Diabet. & metabol.                    
// J Diabet  Assoc. France.-2003.-V.29, N4.-P.83-84
8. Meyramov  G.G.,  A.A.  Kikimbaeva,  A.G.  Meyramova.  Fluorescent  Histochemical  method       
Staining of Insulin in B-cells of Isolated Pancreatic islets by Diethylpseudoisocyanine Chloride        
//Acta  diabetol., //Europ  Diabet J.-2005.-V.42, N1.-P.66.
                            
110
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ТƏЖІРИБЕЛІК   МЕДИЦИНА  МƏСЕЛЕЛЕРІ

© С.С. Ануарбекова, 2012
УДК 579.2
С.С. Ануарбекова
РГП «Республиканская коллекция микроорганизмов КН МОН РК». Астана
ЭКОНОМИКАЛЫҚ ШЫҒЫН ЖАҒЫНАН МИКРООРГАНИЗМДЕР 
КУЛЬТУРАЛАРЫН САҚТАУ
С.С. Ануарбекова
Республикалық
е
микроорганизмдер  коллекциясында
 
микроорганизмдер  культурала-
ры  бірнеше  əдістермен  сақталады.  Бұл  мақалада  осы  жəне  басқа  əдістерді  қолданғандағы 
экономикалық шығындардың нəтижесі көрсетілген
 
THE CONSERVATION OF CULTURE OF MICROORGANISMS
INCLUDING ECONOMICAL WASTES
S. Anuarbekova
The conservation of culture of microorganisms is brought about in several ways in The Republic 
collection of microorganisms. Economical calculations of wastes using different methods of conser-
vation are represented in this article.
С
овременная  промышленная  биотехно-
логия  базируется  на  применении  ме-
тодов генной и клеточной инженерии. Тради-
ционными  остаются  производство  антибио-
тиков,  ферментов,  гормонов,  пробиотиков, 
витаминов и других биологически активных 
веществ с  помощью биологических  агентов: 
бактерий,  вирусов,  животных  и  раститель-
ных клеток, их компонентов и внеклеточных 
веществ [1-6].
Следовательно, основой любого биотехно-
логического производства является потенци-
ал культур микроорганизмов. 
Необходимым  условием  успешной  рабо-
ты  с  микроорганизмами  является  правиль-
ное  поддержание  их  с  целью  сохранения  не 
только  жизнеспособности  клеток,  но  и  так-
сономических  и  производственных  свойств. 
Общего  метода  одинаково  пригодного  для 
хранения  многочисленных  и  разнообразных 
групп микроорганизмов, пока не существует. 
Поэтому в крупных коллекциях разные груп-
пы  микроорганизмов  сохраняются  различ-
ными  методами  [7-9].  Для  исключения  воз-
можности  потери  микроорганизма,  каждый 
штамм сохраняется не одним, а несколькими 
способами, что практикуется в Республикан-
ской коллекции микроорганизмов (РКМ).
Хранение  культур  микроорганизмов  явля-
ется дорогостоящей процедурой.
ЦЕЛЬ
Установить  объем  экономических  затрат 
при  хранении  различными  методами  и  на 
различных  защитных  средах,  что  будет  спо-
собствовать при выборе условий хранения.
Фонд РКМ составляют культуры молочно-
кислых бактерий, аспорогенных и спорообра-
зующих бактерий, мицелиальных и дрожже-
вых  грибов.  Нами  было  рассчитаны  финан-
совые затраты при хранении их различными 
методами: субкультивирование на скошенной 
агаризованной  среде,  субкультивирование 
под  минеральным  маслом,  лиофилизация  и 
криоконсервация.  При  подсчетах  учитывали 
стоимость  питательных  сред,  реактивов,  по-
суды, используемой для хранения, вазелино-
вого  масла,  защитных  сред,  применяемых  в 
лиофилизации и криоконсервации. Проведен 
сравнительный  анализ  затрат  при  приготов-
лении питательных сред на основе заводских 
заготовок и при использовании естественных 
источников питательных веществ, необходи-
мых для роста и размножения микроорганиз-
мов. 
В  данной  публикации  приведены  некото-
рые расчеты.
Молочнокислые  бактерии  представлены 
родами Lactobacillus, Lactococcus, Streptococ-
cus, Bifi dobacterium.
111
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ВОПРОСЫ  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

Для культивирования и хранения лактоба-
цилл  используются  среды  МРС-1  (бульон), 
МРС-4 (агар) и для лиофилизации - обрат.
Нами произведен подсчет затрат финансо-
вых  средств  на  приготовление  МРС  (
З
  –  за-
водского  изготовления)  с  использованием 
готовой  среды  («HiMedia»,  Индия)  и  приго-
товленной  на основе естественных ингреди-
ентов  (печень  говяжья,  молоко,  дрожжи  пе-
карские) в условиях лаборатории (
Л
).
Состав  среды  МРС-1
Л
,  приготовленной  в 
лабораторных условиях.
•В 300 мл дистиллированной воды раство-
рить при нагревании: 10 г пептона; 1 мл твин-
80;  0,05  г  MnSO
4
×4H
2
O;  0,2  г  MgSO
4
×7H
2
O; 
0,2 г цистеина; 2 г K
2
HPO
4
; 2 г цитрата аммо-
ния; 5 г ацетата Na; 20 г глюкозы;
•Прибавить  50  мл  дрожжевого  автолизата 
(250 г/л дистиллированной воды) и 100 мл пе-
ченочного экстракта (1 кг печени говяжьей/л 
дистиллированной воды);
•Объем довести до 500 мл дистиллирован-
ной  водой,  а  затем  гидролизованным  моло-
ком (1 г панкреатина и 5 мл хлороформа на 1 
л молока) до 1 000 мл (рН 6,2-6,6);
•Отфильтровать через фильтровальную бу-
магу, разлить в пробирки по 4 мл.;
• Автоклавировать 20 мин при 0,5 атм.
Состав  среды  МРС-4
Л
,  приготовленной  в 
лабораторных условиях:
А.    В  200  мл  дистиллированной  воды  до-
бавить 5 г пептона;
• Микробиологический  агар из расчета  на 
500 мл (смотреть по аннотации), перемешать 
с 1, довести до кипения.
      • Автоклавировать 1,5 атм - 15-20 мин.
Б.  В  чистую  колбу  добавить:  25  мг 
MnSO
4
×4H
2
O;  100  мг  цистеина;  100  мг 
MgSO
4
×7H
2
O; 10 г глюкозы; 1 мл твин-80; 50 
мл дистиллированной воды;
•Помешивая, довести до кипения.
В. Приготовление обрата:
•Обрат (250 мл на 500 мл агара) разогреть;
•Добавить  в обрат  5  мл/л  хлороформа  и  1 
г/л панкреатина в термостат при 40-41°С, по-
мешивая в течение 1 ч.;
•Оставить на 1 сутки;
•Автоклавировать при 0,6-0,7 атм – 20 мин; 
профильтровать.
Г. К «А» добавить «Б» и «В»: автоклавиро-
вать 0,7 атм – 20 мин; добавить сорбиновую 
кислоту,  разведенную  на  спирте  –  10  мл  (из 
расчета 400 мг/л);
Д. К 500 мл МПА добавить 25 мл дрожже-
вого автолизата.
Е. Приготовление дрожжевого автолизата:
•Дрожжи  250  г/л  дистиллированной  воды 
– перемешать;
•В термостат на 1 сутки при  56°С, в тече-
ние 1-го часа перемешивать;
•Автоклавировать 1 атм – 20 мин.
При  сравнении  состава  МРС-агара
З
  и 
МРС-бульона
З
 с приготовленными в услови-
ях лаборатории, ясно, что они соответствуют 
по составу питательных веществ и микроэле-
ментов. В ходе работы было установлено, что 
хранение  на  обеих  средах  позволяет  сохра-
нить одинаковый первоначальный показатель 
спектра жизнеспособности. 
Далее приведены расчеты финансовых за-
трат.
Стоимость  1  л  среды  МРС-бульона
Л
  со-
ставляет  318  тг,  стоимость  1  л  среды  МРС-
бульона
З
 - 758 тг.
Стоимость 1 л среды МРС-агара
Л
 составля-
ет 2 000 тг, стоимость 1 л среды МРС-агара
З
 
- 982 тг.
Итак,  МРС-агар  и  МРС-бульон  заводско-
го  изготовления  приемлемы  по  стоимости, 
требуют  меньших  затрат  рабочего  времени, 
которые  затрачиваются  для  приготовления 
таких  ингредиентов,  как  печеночный  или 
дрожжевой экстракт.
Ниже приведены расчеты при использова-
нии  различных  методов  хранения  молочно-
кислых бактерий.
При  хранении  на  скошенной  агаризован-
ной среде учитываются затраты на питатель-
ные  среды  (по  5  мл  в  пробирке),  стоимость 
посуды (пробирка), используемой для хране-
ния, количество пересевов в год.
Хранение  на  скошенной  агаризованной 
среде:  МРС-4
Л
  составляет  936  тг,  МРС-4
З
  - 
796 тг при пересеве 1 раз в месяц. 
При  хранении  под  минеральным  маслом 
учитываются  затраты  на  питательные  среды 
(по 10 мл), стоимость 10 пробирок, стоимость 
вазелинового масла, длительность хранения.
Хранение под минеральным маслом: МРС-
4
Л
  –  203  тг,  МРС-4
З
  -  208 тг  при  хранении  в 
течение года.
При  хранении  в  лиофильно  высушенном 
состоянии учитываются затраты на:
•10 пробирок со скошенной агаризованной 
средой (по 5 мл в пробирке) для культивиро-
вания микроорганизмов;
•Стоимость  защитной  среды  (в  данном 
случае обрата);
•  Стоимость  10  флаконов,  используемых 
для закладки биоматериала.
Лиофилизация  при  использовании  для 
культивирования МРС-4
Л
 – 198 тг, МРС-4
З
 
 - 
163 тг.
При криоконсервации учитываются затра-
ты на:
•10 пробирок со скошенной агаризованной 
средой  для  культивирования  микроорганиз-
мов (по 5 мл в пробирке);
•Стоимость  криозащитной  среды  (в  РКМ 
используется  такой  состав:  20%-ный  гли-
церин,  10%-ная  сахароза,  10%-ный  поливи-
нилпиролидон  на  основе  соответствующей 
112
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ТƏЖІРИБЕЛІК   МЕДИЦИНА  МƏСЕЛЕЛЕРІ

жидкой  среды  для  культивирования  микро-
организма);
•Стоимость 10 криопробирок.
Криоконсервация  при  использовании  для 
культивирования МРС-4
Л
  составляет 1  181,4 
тг, МРС-4
З
 – 1 138 тг.
Аспорогенные бактерии представлены ро-
дами  Staphylococcus,  Streptococcus,  Serratia, 
Micrococcus, Escherichia и др. 
Большинство  аспорогенных  культур  хра-
нятся с использованием микробиологическо-
го агара. Здесь представлены наши расчеты с 
учетом всех затрат:
•Хранение  на  скошенной  агаризованной 
среде – 729,3 тг;
•Хранение под минеральным маслом – 368 
тг;
•Лиофилизация  (желатинозно-сахарозная 
среда) – 146 тг;
•Криоконсервация – 1 249 тг.
Бактерии рода Bacillus представлены вида-
ми B. subtilis, B. thuringiensis, B. licheniformis, 
B. polymyxa.
В практике работы  с  бациллами  часто ис-
пользуются микробиологический агар, мясо-
пептонный  агар  (МПА)  и  его  модификации: 
МПА
б
,  сусло-мясо-пептонный  агар,  сахари-
зованный МПА, МПА Хоттингера.
При  этом  мы  сравнивали  МПА
З 
с  МПА
Л
, 
так  как  для  приготовления  МПА  в  лабора-
торных  условиях  многие  годы  использовали 
мясо говядины, сейчас же фирмы предлагают 
«мясной  экстракт»,  который  добавляется  в 
микробиологический агар. 
Например,  затраты  при  хранении  штамма 
B. thuringiensis dendrolimus 49 составляют:
•Хранение  на  скошенной  агаризованной 
среде МПА
Л
 
– 257 тг, МПА
3
 
- 227 тг при реко-
мендуемом пересеве 2 раза в год;
•Хранение  под  минеральным  маслом  – 
МПА
Л
 
– 276 тг, МПА
З
 
– 252 тг;
•Лиофилизация  (среда  с  сывороткой)  – 
МПА
Л
 
– 578 тг, МПА
З
 
– 563 тг; 
•Криоконсервация  –  МПА
Л
 
–  1  142  тг, 
МПА
З
 
– 1 127 тг.
Затраты  при  хранении  штамма  B.  subtilis 
IKI составляют:
•Хранение  на  скошенной  агаризованной 
среде МПА
Л
 – 363 тг, МПА
З
 – 304 тг при ре-
комендуемом пересеве 4 раза в год;
•Хранение  под  минеральным  маслом 
МПА
Л
 – 276 тг, МПА
З
 – 252 тг;
•Лиофилизация  (желатинозно-сахарозная 
среда) – МПА
Л
 
– 167,5 тг, МПА
З 
– 152,5 тг; 
•Криоконсервация  –  МПА
Л
 
–  1  142  тг, 
МПА
З
 
– 1 127 тг. 
Такие различия при использовании метода 
субкультивирования  на  скошенных  агаризо-
ванных средах у двух культур на одной и той 
же среде связаны с количеством пересевов в 
год.
Различия  в  затратах  на  лиофилизацию  за-
висят  от  используемой  среды.  Затраты  при 
использовании  обрата  для  высушивания  со-
ставляют всего 163 тг, при использовании же-
латинозно-сахарозной  среды  –  152,5  тг,  при 
использовании защитных сред на основе ло-
шадиной сыворотки или сыворотки крупного 
рогатого скота – 591 тг. 
Дорогостоящим  является  метод  криокон-
сервации за счет дороговизны криопробирок 
– 142 тг/шт. 
Таким  образом,  экономически  выгодными 
являются  среды  заводского  приготовления, 
они стандартны, требуют меньших финансо-
вых затрат и рабочего времени. Все использу-
емые  нами  методы позволяют  стабильно со-
хранять жизнеспособность клеток, несмотря 
на  то,  что  лиофилизация  и  криоконсервация 
являются  дорогостоящими  методами,  чем 
субкультивирование,  но  более  удобны,  так 
как в таком состоянии можно хранить до де-
сяти лет, тогда как постоянное пассирование 
приводит  к  утрате  культурой  микроорганиз-
ма производственных свойств.
На  основе  данных  расчетов  проведены 
расчеты  по  предоставлению  платных  услуг 
РКМ,  в  которое  входит  предоставление  для 
различных  целей  культур  микроорганизмов, 
проведение процедуры депонирования, оцен-
ки  показателя  жизнеспособности,  проведе-
ние обучающих курсов по хранению культур 
микроорганизмов  и  т.д.,  при  этом  учитыва-
лась занятость перснонала, амортизация обо-
рудования и коммунальные затраты.
ЛИТЕРАТУРА
1  Егорова  Т.А.,  Клунова  С.М.,  Живухина  Е.А.  Основы  биотехнологии.  –  3-е  изд.  – 
М.:Академия, 2006. – 208 с. 
2  Сазыкин Ю.О., Орехов С.Н., Чакалева И.И. Биотехнология. – М.:Академия, 2006. – 254 с. 
3  Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии - про-
дуценты биологически активных веществ. - Киев:Наук. думка, 1982. - 280 с.
4  Шлегель Г.Г. Общая микробиология: Пер. с нем. - М.:Мир, 1987. -  567 с.
5  Бери Д. Биология дрожжей. – М.:Мир, 1985. - 95 с.
6  Дудикова Г.Н. Биотехнологические основы использования лактоба цилл для защиты зерно-
продуктов от бактериальной контаминации: Дис. … докт. биол. наук. - Алматы, 2002. - 320 
с.
113
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ВОПРОСЫ  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

7  Каталог культур микроорганизмов. – Астана, 2003. - 186 с.
8  Рук-во  к  практическим  занятиям  по  микробиологии  /  Под  ред.  Н.С.  Егорова.  –  М.:МГУ, 
1995. – 220 с.
9  Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. – М.:Дрофа, 
2004. – 256 с.
©Коллектив авторов, 2012
М.Ж. Каирова, С.С. Шоныкбаева, Н.Б. Молдагулова, С.М. Шайхин
РГП Республиканская коллекция микроорганизмов КН МОН РК. Астана
ІРІМШІКТЕРДІҢ ƏРТҮРЛІ СОРТТАРЫНАН БӨЛІНІП 
АЛЫНҒАН ЛАКТОБАЦИЛЛУС ИЗОЛЯТТАРЫНЫҢ БИОЛОГИЯЛЫҚ 
ЕРЕКШЕЛІКТЕРІ
М.Ж. Каирова, С.С. Шоныкбаева, Н.Б. Молдагулова, С.М. Шайхин
Ірімшіктердің  əртүрлі  сорттарынан  бөлініп  алынған  лактобацилла  изоляттарының 
биологиялық ерекшеліктері  зерттелінді. Жоғары антагонистік белсенділікке, қышқыл түзетін 
қасиетке жəне адгезиялық белсенділіктеріне ие изоляттар Республикалық микроорганизмдер 
коллекциясында депондалынды.
BIOLOGICAL FEATURES OF LACTOBACILLUS ISOLATED 
FROM DIFFERENT SORTS OF CHEESE
M. Kairova, S.Shonykbaeva, N. Moldagulova, S. Shaikhin
Biological features of lactoballus isolated from different sorts of cheese were studied. Isolates of 
lactobacillus with a high antagonistic and acid activities and adhesive capacity were deposited in 
Republic collection of micro-organisms.
М
олочнокислые  бактерии  (МКБ)  явля-
ются промышленно-ценными микро-
организмами  и  среди  них  наиболее  широко 
известны  виды  из  родов  Lactobacillus  и  Bifi -
dobacterium.  В  качестве  пробиотиков  на  се-
годняшний  день  ценность  представляют  19 
видов  лактобацилл:  L.  acidophilus,  L.  crispa-
tus,  L.  hamster,  L.  agilis,  L.  delbrueckii  subsp. 
bulgaricus, L. intestinalis, L. aviaries, L. gallina-
rum, L. plantarum, L. amylovorus, L. gasseri, L. 
rhamnosus,  L.  brevis,  L.  johnsonii,  L.  reuteri, 
L. casei, L. murinus, L. ruminis и L. salivarius. 
Установлено,  что  применение  пробиотиче-
ских препаратов приводит к восстановлению 
кишечной  микрофлоры  организма  человека 
[1], снижает частоту аллергических реакции, 
риск  образования  рака  толстого  кишечника 
[2, 3] и др. Их иммуностимулирующая актив-
ность установлена в опытах над животными 
и  при  клинических  испытаниях  выявлен  их 
антидиарейный эффект (L. rhamnosus и L. pa-
racasei) [4].
Лактобактерии  имеют  огромное  значение 
для  человека  в  качестве  заквасочных  (стар-
терных)  культур  (например,  Lactococcus  lac-
tis) в пище [5] и в ферментировании продук-
тов  (нр.,  L.  delbrueckii  в  йогуртах  и  L.  plan-
tarum в квашении капусты и силосовании), а 
также в качестве симбионтов женской уроге-
нитальной системы (нр., L. jensenii) и кишеч-
ника  (нр.,  L.  gasseri)  [6,  7].  Выявлена  опре-
деленная  роль  штаммов  лактобацилл  при 
эндокардите  [8]  и  в  целом,  они  отнесены  к 
безопасным микроорганизмам или, к GRAS-
114
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ТƏЖІРИБЕЛІК   МЕДИЦИНА  МƏСЕЛЕЛЕРІ

группе (Genetically Recognized As Safe), озна-
чающее  международное  признание  их  безо-
пасности и разрешающее их неограниченное 
использование  в  пищевой  и  фармацевтиче-
ской  промышленностях,  а  также  безопасное 
применение  у  детей  с  первых  дней  жизни. 
Лактобациллы представляют интерес для ме-
дицины не только в качестве пробиотиков, но 
и  в  качестве  транспортеров  вакцин.  Однако, 
до сих пор не определены генетические осно-
вы  их  пробиотических  свойств  –  например, 
не известна взаимосвязь различного пробио-
тического эффекта лактобацилл со штаммо-, 
видо- и родоспецифическими свойствами.
К  безопасным  штаммам,  имеющим  про-
должительную  историю  существования  на 
рынке пробиотиков, относятся L. casei Shirota 
и  некоторые  штаммы  группы  L.  acidophilus. 
В  сравнении  с  традиционными  заквасочны-
ми  культурами,  например,  в  кисломолочных 
продуктах,  большинство  пробиотических 
штаммов не имеют длительного срока суще-
ствования на рынке. В Германии такие виды 
как  L.  rhamnosus, E.  faecium и  E.  faecalis от-
несены ко 2 группе риска, как потенциальные 
патогены. Однако допускается отнести штам-
мы из перечисленных видов к 1 группе риска 
(группа не представляющая риска для здоро-
вья), если имеются установленные факты их 
безопасности. 
В  целом,  ускоренная  индустриализация 
производства  молочнокислых  продуктов  ос-
новывается  на  использовании  небольшого 
числа  штаммов  (L.  rhamnosus  GG)  молочно-
кислых  бактерий,  которые  адаптированны 
для  условий  промышленного  производства. 
Но  при  этом  не  учитывается  природное раз-
нообразие этих микроорганизмов и  их влия-
ние  на  здоровье  человека  [9].  Показано,  что 
превалирование  тех  или  иных  видов  микро-
флоры  кишечника  связано  с  их  географиче-
ской привязанностью, т.е. в различных стра-
нах доминируют различные виды и штаммы 
микроорганизмов, поэтому употребление им-
портных пробиотических продуктов на осно-
ве ограниченного числа штаммов МКБ может 
привести к коренному изменению естествен-
ной микрофлоры  у  населения  нашей страны 
и других государств.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В работе были использованы девять изоля-
тов бактерий (11, 8.2, 6.4, 9.1, 9.2, 5.4, 7б, 15, 
5.1), выделенные из коммерчески доступных 
сыров различных сортов. Изоляты культиви-
ровали на среде МРС 1 при 37
0
С. По органо-
лептическим  свойствам  выделенные  молоч-
нокислые бактерии имели  кисломолочный  и 
сладковато-кислый запах.
Антагонистическую  активность  лактоба-
цилл  определяли  по  общеизвестному  мето-
ду отсроченного антагонизма по отношению 
к  тест-штаммам:  Salmonella  typhimurium, 
Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli,  Kleb-
siella  ozaenae,  Candida  albicans  и  Proteus  mi-
rabilis  Протеолитическая  и  лизоцимная  ак-
тивность  изолятов  молочнокислых  бактерий 
определяли  по  общеизвестным  методикам 
[10].
Кислотообразующую  активность  опреде-
ляли по количеству органических кислот, на-
копленных  МКБ  при  минимальном  зараже-
нии обезжиренного молока за 17 часов (метод 
Тернера).
РЕЗУЛЬТАТЫ  И  ОБСУЖДЕНИЕ
Как  известно,  пробиотические  особенно-
сти  молочнокислых  бактерий  связаны  с  ши-
роким  спектром  антагонистической  актив-
ности  по  отношению  к  патогенной  и  услов-
но-патогенной  микрофлоре.  В  связи  с  этим, 
нами проведено определение антагонистиче-
ской  активности  выделенных  изолятов  лак-
тобацилл.  Полученные  экспериментальные 
данные  показали  наличие  высокой  антаго-
нистической активности у всех исследуемых 
изолятов  МКБ  по  отношению  к  пяти  тест-
культурам (табл. 1). Исключение составляют 
изоляты лактобацилл 9.1 и 9.2 по отношению 
к тест-штамму C. albicans.
115
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ВОПРОСЫ  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

Таблица 1. 
Антагонистическая активность изолятов лактобацилл
Одним из важных факторов,  обуславлива-
ющих антагонистичускую активность лакто-
бацилл в отношении других видов микроор-
ганизмов, является их активное кислотообра-
зование. Поэтому нами проведено определе-
ние  кислотообразующей  активности  данных 
МКБ. 
В результате изучения кислотообразования 
изолятов  лактобактерий  выявлено,  что  все 
они имеют высокую кислотообразующую ак-
тивность с 100-270 ºТ. Кроме того, у исследу-
емых изолятов МКБ не отмечена лизоцимная 
активность.
Установлено, что молочнокислые бактерии 
способны к созданию биопленки, выстилаю-
щей  слизистую  оболочку  желудочно-кишеч-
ного тракта, тем самым, обеспечивая ее коло-
низацию, реализующуюся через адгезию. По-
этому, в следующей серии опытов проводили 
изучение адгезивной активности отобранных 
изолятов (табл. 2). Все изоляты лактобацилл 
обладали  средней  степенью  адгезивности,  а 
изоляты  11,  9.1,  5.4  и  15  показали  высокую 
адгезивность  по  отношению  к  клеткам  эри-
троцитов.
Таблица 2. 
Адгезивная активность 
различных изолятов лактобацилл
Таким  образом,  все  отобранные  изоляты 
лактобацилл,  за  исключением  9.1  и  9.2,  об-
ладали  как  высокой  антагонистической  ак-
тивностью  по  отношению  к  тест-штаммам.  
Культуры  МКБ  с  высокой  кислотообразую-
щей  активностью  обладали  также  высокой 
протеолитической  активностью,  но  не  пока-
зали  лизоцимной  активности.  Все  изоляты 
лактобацилл имели среднюю степень адгезии 
(2-4  клетки,  прикрепившиеся  к  одному  эри-
троциту), а изоляты 11, 9.1, 5.4 и 15 показали 
высокую степень адгезивности.
В результате изучения биологических осо-
бенностей  изолятов  лактобацилл,  наиболее 
активные культуры были взяты на депониро-
вание  в  качестве  культур,  обладающих  про-
биотическими  свойствами.    С  целью  прове-
дения  депонирования  отобранных  изолятов 
лактобацилл  дополнительно  проведено  ча-
стичное секвенирование гена 16S rDNA, для 
подтверждения  их  родовой  и  видовой  при-
надлежности.
ЛИТЕРАТУРА
1.  Marteau P., de Vrese M., Cellier C., and Schrezenmeir J. Protection from gastrointestinal dis-
eases with the use of probiotics //Am. J. Clin. Nutr. - 2001. - 73(2 Suppl.): 430S-436S
2.  Hur H.J., Lee K.W., Kim H.Y., Chung D.K., and Lee H.J. In vitro immunopotentiating activities 
of cellular fractions of lactic acid bacteria isolated from kimchi and bifi dobacteria // J. Microbiol 
Biotech. - 2006. - 16: 661-666
3.  Bengmark S. Ecological control of the gastrointestinal tract. The role of probiotic fl ora // Gut. 
- 1998. - 42:2–7
116
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ТƏЖІРИБЕЛІК   МЕДИЦИНА  МƏСЕЛЕЛЕРІ

4.  Sarker  S.A.,  Sultana  S.,  Fuchs  G.J., Alam  N.H., Azim T.,  Brussow  H.,  and  Hammarstrom  L. 
Lactobacillus paracasei strain ST11  has no effect on rotavirus but ameliorates the outcome  of 
nonrotavirus diarrhea in children from Bangladesh //Pediatrics. - 2005. - 116:e221–e228
5.  Smit G., Smit B.A., and Engels W.J. Flavour formation by lactic acid bacteria and biochemical 
fl avour profi ling of cheese products //FEMS Microbiol. Rev. - 2005. - 29:591–610
6.  Tannock G.W. A special fondness for lactobacilli //Appl. Environ. Microbiol. - 2004. - 70:3189–
3194 
7.  Lievin V., Pfeiffer I., Hudault S., Rochat F., Brassart D., Neeser J.R., and Servin A.L. Bifi dobac-
terium strains from resident infant human gastrointestinal microfl ora exert antimicrobial activity 
// Gut. -2000. - 47:646–652
8.  Salvana E.M., and Frank M. Lactobacillus endocarditis: case report and review of cases reported 
since 1992 //J. Infect. - 2006. - 53:e5–e10
9.  Tannock G.W. Identifi cation of Lactobacilli and Bifi dobacteria // Current Issues Molec. Biol. – 
1999. - 1(1): 53-64
10.  Практикум по микробиологии /Под ред. А.И. Нетрусова. – М.: Академия, 2005. –119 с.
©Коллектив авторов, 2012
УДК 579.083.13
А.К. Туякова, С.С. Ануарбекова, М.С. Уразова, Ж.Р. Хасенбекова,
К.Х. Алмагамбетов
РГП «Республиканская коллекция микроорганизмов КН МОН РК». Астана
СОЗЫЛМАЛЫ ПАРАДОНТИТТIҢ ҮЛГIСIНДЕГI ПРОБИОТИКАЛЫҚ 
СТРИПТАРДЫҢ ТИIМДIЛIГIНIҢ МИКРОБИОЛОГИЯЛЫҚ БАҒАСЫ
А.К. Туякова, С.С. Ануарбекова, М.С. Уразова, Ж.Р. Хасенбекова,К.Х. Алмагамбетов
Жұмыс  барысында    лабораториялық  жануарларға  созылмалы  жəне  өткiр  парадон-
тит  үлгiлерiнде  пробиотикалық  стриптермен  емдеудегі  тиiмдiлiктiң  микробиологиялық 
зерттеулерiнiң нəтижелерi келтiрiлген. Микробиологиялық көрсеткiштерiнiң нормаға дейiнгі 
маңызды төмендетілуі экспериментальдi расталғаны байқалады.
MICROBIOLOGICAL ESTIMATION OF EFFICIENCY 
OF PROBIOTIC STRIPS ON MODEL CHRONIC PARODONTITIS
A. Tujakova, S.Anuarbekova,M. Urazova, Zh.Khasenbekova,K. Almagambetov
In  work  results  of  microbiological  researches  of  effi ciency  of  treatment  by probiotic  strips  on 
models  chronic  and  sharp  parodontitis  on  laboratory  animals  are  resulted.  Essential  decrease  in 
microbiological indicators to norm that is confi rmed experimentally is observed.
117
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ВОПРОСЫ  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

П
олость рта является одной из уникаль-
ных  экологических  систем,  обеспечи-
вающей  жизнедеятельность  многих  микро-
организмов.  В  настоящее  время  работами 
многих  авторов  убедительно  доказана  роль 
микрофлоры рта в этиологии и патогенезе ка-
риеса зубов, заболеваний пародонта [1, 2-6]. 
Поэтому знания микробиологии ротовой по-
лости для врача стоматолога имеют в настоя-
щее время актуальное теоретическое и прак-
тическое значение.
Для  лечения  воспалительных  и  воспали-
тельно-деструктивных поражений пародонта 
предложено  большое  количество  методов. 
Агрессивность  микробной  среды  в  полости 
рта постоянно побуждает к  совершенствова-
нию средств защиты от нее, а также поиску и 
разработке новых антибактериальных препа-
ратов.  Среди  их  множества,  существующего 
в  настоящее  время,  предпочтение  отдается 
бактериальным  препаратам,  действующим 
началом которых являются штаммы предста-
вителей  нормальной  микрофлоры  с  высоки-
ми антагонистическими, ферментативными и 
иммуностимулирующими свойствами [8-12].
ЦЕЛЬ
Оценка  микробиологической  эффектив-
ности  применения  в  стоматологии  нового 
биопрепарата  «Стрипы  пародонтальные» 
состав  которых  включает  клеточную  мас-
су  лактобацилл  Lactobacillus  casei  subsp. 
pseudoplantarum,  Lactobacillus  casei  subsp. 
casei,  Lactobacillus  helveticus,  Lactobacillus 
fermentum,  иммобилизованных  на  желати-
новый  матрикс,  на  моделях  хронического  и 
острого  пародонтита,  воспроизведенных  на 
лабораторных животных.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Модель  хронического  пародонтита  вос-
производили  на  белых  беспородных  (ран-
домбредных)  крысах  обоего  пола  массой 
160-220  г  с  помощью  малобелковой  диеты. 
Суточный  рацион  составлял:  1,95  г  казеина, 
3,25  г  крахмала,  5,0  г  овсяной  крупы,  7,0  г 
ржаного  хлеба,  3,35  г  подсолнечного  масла, 
0,2  г  фильтровальной  бумаги,  0,8  г  солевой 
смеси. Всего 22,55 г на каждую крысу. В те-
чение  трех  месяцев  сформировалась  модель 
хронического  пародонтита  средней  степени 
тяжести. В качестве плацебо использовались 
стрипы  без  консорциума  микроорганизмов 
и  препарат  сравнения  –  рекомендуемый  для 
профилактики  и  лечения  воспалительных 
заболеваний  полости  рта  –  гель  «Метрогил-
Дента». В табл.  1 представлены группы экс-
периментальных крыс.
Таблица 1. 
Группы экспериментальных крыс
Модель  острого  генерализованного  паро-
донтита  была  воспроизведена  на  кроликах 
путем  нанесения  химического  ожога.  Сли-
зистая оболочка рта и десен травмировалась 
путем нанесения 2-3 капель концентрирован-
ной  серной  кислоты.  В  течение  одних-двух 
суток  сформировались  эрозия  и  язвы  с  вос-
палением.
Для  эксперимента  использовали  обоепо-
лых кроликов шиншилла массой 2 500-3 000 
г в количестве 25. Животные были разделены 
на  5  групп  по  5  кроликов  в  каждой:  группа 
интактных  животных  (здоровые);  группа  не 
леченных с моделью пародонтита (контроль-
ная); группа леченных препаратом сравнения 
(Солкосерил-гель);  группа  леченных  стри-
пами  без  внесения  консорциума  (плацебо); 
группа леченных стрипами на основе проби-
отического консорциума.
Длительность  лечения,  как  и  в  случае  с 
хроническим пародонтитом у крыс, состави-
ла 14 дней. 
Материал 
для 
микробиологического 
анализа  отбирался  стерильным  ватным 
тампоном  с  участка  десны,  прилегающего  к 
нижним  резцам.  После  нанесения  химиче-
ского ожога,  материалом  для  микробиологи-
ческого  анализа  служило  гнойное  содержи-
мое  образованных  вследствие  ожога  десне-
вых карманов.
 
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В  результате  эксперимента  во  всех  груп-
пах  животных  наблюдалось  улучшение 
микробиологической  картины  (табл.  2).  Но 
лучшие  показатели  были  зафиксированы 
в  группах  получающих  в  качестве  лечения 
пародонтальные  стрипы,  содержащие  про-
биотический консорциум. Так титр дрожжей 
118
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ТƏЖІРИБЕЛІК   МЕДИЦИНА  МƏСЕЛЕЛЕРІ

снизился  с  3х10
5 
до  4х10
2
  КОЕ/мл,  при  этом 
изначально они наблюдались в образцах всех 
животных  (12),  а  по  окончании  эксперимен-
та  лишь  у  единичных  экземпляров  (2).  Так-
же  снизился  титр  и  процент  встречаемости 
стрептококков  в  образцах  с  2х10
7 
до  3х10
2 
КОЕ/мл. Положительная динамика была так-
же отмечена в группе анаэробных бактерий, к 
концу эксперимента процент их встречаемо-
сти снизился с 90 % до 10 %, а титр с 3,4х10
8 
до 1,3х10
2 
КОЕ /мл. Лишь титр и процент вы-
севаемости  бацилл  после  проведения  экспе-
римента  не  изменился,  в  некоторых  случаях 
даже повысился, что, по-видимому, связано с 
питанием животных, основу которого состав-
ляют необработанные злаки.
Таблица 2. 
Количественный состав микроорганизмов ротовой полости крыс 
до и после лечения пародонтальными стрипами и препаратом Метрогил-Дента
Группы экспериментальных крыс
1 группа
2 группа
 3 группа
4 группа
5 группа 
Стрептококки
3×10
4
/80%
10
2
-10
3
/70%
10
4
-10
5
/100%
10
4
-10
5
/80%
2×10
7
/100%
Стафилококки
1,8х10
3
/40%
2,3х10
2
/30%
10
4
-10
5
/60%
2,1х10
3
/30%
10
6
-10
7
/60%
Энтеробактерии
2х10
4
/40%
2,2х10
3
/80%
1,2х10
5
/100%
10
2
/20%
4х10
8
/90%
Дрожжи
4×10
2
/10%
-
10
3
/20%
10
2
/20%
3×10
5
/60%
Бациллы
10
3
/80%
1,1х10
3
/60%
10
4
/70%
10
3
/50%
1,1х10
4
/60%
Лактобациллы
4х10
2
/70%
2,3х10
2
/90%
-
-
-
Бактероиды
2,2х10
2
/20%
1х10
3
/10%
3х10
3
/30%
2,5х10
3
/20%
 4х10
6
/90%
Фузобактерии
2х10
2
/10%
1,3х10
3
/20%
4,3х10
5
/30%
3,1х10
3
/30%
3,4х10
8
/90%
Нейссерии
2,1х10
2
/10%
2,3х10
2
20%
2,2х10
3
/30%
1,3×10
2
/30%
3,6х10
7
/80%
На  рисунке  изображен  график    микроб-
ных показателей эффективности применения 
стрипов  с  содержанием  консорциума  лакто-
бацилл  в  сравнении  с  препаратом  «Метро-
гил-Дента» (контроль).
Лактобациллы,  как  индикаторы  здоровья 
ротовой  полости,  выделялись  лишь  в  груп-
пах,  где  в  составе  стрипов  присутствовал 
пробиотический консорциум. В контрольной 
группе, плацебо и группе, получающий пре-
парат метрогил-дента лактобациллы не были 
выделены.
Рис.
Микробный  показатель  эффективности 
использования консорциума
Доминирующим  звеном  микробиоценоза 
ротовой  полости  у  кроликов  с  острым  па-
родонтитом  оказались  представители  рода 
Streptococcus  и  Staphylococcus,  они  наибо-
лее  часто  выделялись  из  обильного  гной-
ного  содержимого  десневых  карманов.  Их 
титр  доходил  до  8х10
9
  КОЕ/мл.  Энтеробак-
терии  были выделены с титром 5х10
5
  КОЕ  /
мл.  Кроме  того,  в  микробном  составе  при-
сутствовали  бациллы  4х10
6
  КОЕ/мл.  После 
лечения  наилучшие  результаты  проявились 
в группах, принимающих в качестве лечения 
препарат солкосерил и пробиотические стри-
пы. Титр  кокков снизился в данных группах 
до  4х10
2
  КОЕ/мл,  титр  энтеробактерии  сни-
зился на 2 порядка и составил 3х10
3
 КОЕ/мл. 
Титр бацилл не изменился. В других группах 
количественные  показатели  данных  микро-
организмов после лечения изменились незна-
чительно. 
Из этого следует, что применение пародон-
тальных пробиотических стрипов в качестве 
лечебного средства положительно сказывает-
ся на микрофлоре ротовой полости кроликов 
с острым пародонтитом.
Таким образом, из проведенных микробио-
логических исследований следует, что с при-
менением в качестве лечения стрипов, содер-
жащих  консорциум  лактобацилл,  значитель-
но отражается на микрофлоре ротовой поло-
сти  лабораторных  животных.  Наблюдалось 
снижение  высеваемости  патогенных  микро-
организмов в ходе эксперимента и, напротив, 
увеличение титра лактобацилл. Следователь-
но, применение данных стрипов играет поло-
жительную  роль  в  микробиоценозе  ротовой 
полости крыс и кроликов. 
119
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ВОПРОСЫ  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

ЛИТЕРАТУРА
1 Грудянов А.И., Дмитриева Н.А. и др. Применение пробиотиков в комплексном лечении вос-
палительных заболеваний пародонта. - М.:Мед. информ. агентство. - 2006. – 112 с.
2 Боровский Е.В. Биология полости рта / Е.В. Боровский, В.К. Леонтьев. – М.:Мед. книга, Н. 
Новгород:НГМА, 2001. – 304 с.
3 Левицкий А.П. Пребиотики и проблема дисбактериоза. - Харьков:ЭДЭНА, 2008. – 100 с.
4 Socransky S.S., Haffajee A.D., Cugini M.A. et al. Microbial complexes in subgingival plaque // J. 
Clin. Periodontol. – 1998. – № 2. – P. 134–144
5 Ishikawa I., Nakashima K., Koseki T. et al. Induction of the immune response to periodontopathic 
bacteria and its role in the pathogenesis of periodontitis // J. Periodontol. – 2000. –  14.- P. 79-111
6 Plombas M., Gobert B., De March A.K. et al. Isotypic antibody response to plaque anaerobes in 
periodontal disease // J. Periodontol. – 2002. – V. 73, № 12. – P. 1507-1511
7 Баженов Л.Г., Бондаренко В.М., Лыкова Е.А., Огай Д.К. Изучение антагонистического дей-
ствия лактобацилл на Helicobacter pylori  // Журн. микробиол. - 1997. - № 3. - С. 89-91
8 Rolfe R.D. The role of probiotic cultures in the control of gastrointestinal health // J. Nutrition. - 
2000. – V. 130, № 2. – Р. 396-402 
9 Кайшев В.Г. Пищевая промышленность: итоги 2001 года // Пищевая пром. – 2002. - № 5. – 
С. 4.
10  Феклисова  Л.В.  Современные  пробиотики:  новый  взгляд  на  проблему  //  Газета  «Мед. 
вестн.». - 2003. -  9.- С. 4-5
11 Collins M.D., Gibson G.R. Probiotics, prebiotics, and sinbiotics: approaches for modulating the 
microbial ecology  //Am. J. Clin. Nutr. – 1999. – 69.- Р. 1052-1057
12 Хамагаева И.С., Кузнецова А.Б. Пробиотики как основа функционального питания // Учен. 
записки: Сб. науч. стат. ЗИП Сиб. УПК. № 5.  – Чита, 2004.-С. 393-399
© К.К.Ниязбекова,  2012
К.К.Ниязбекова 
АО «Медицинский университет Астана»
СОЗЫЛМАЛЫ ИММОБИЛИЗАЦИЯЛЫҚ СТРЕССТІ БАСЫНАН 
ӨТКЕРГЕН ЕГЕУҚҰЙРЫҚТАРДЫҢ ШАРТТЫ РЕФЛЕКСТІК ҚЫЗМЕТІНІҢ 
БҰЗЫЛЫСТАРЫН ЖҮЙКЕ ТІНІ ФЕТАЛЬДІ ЖАСУШАЛАРЫМЕН ЕМДЕУ
Қ.Қ.Ниязбекова 
Сонымен,  созылмалы  иммобилизациялық  стресс  егеуқұйрықтардың  шартты  рефлекстік 
қызметінің  бұзылыстарын  туындатады.  Бұл  егеуқұйрықтардың  бағытталған  лабиринттегі 
мінез-құлқының 
дағдылануы 
қалыптасуының 
қиындауымен 
байқалады. 
Жүйке 
тіндерінің  фетальді  жасушаларының  қоспасын  қолдану  егеуқұйрықтардың  созылмалы 
иммобилизациялық  стрессті  басынан  өткергеннен  кейін  ОЖЖ-нің  қызметтік  жағдайын 
жақсартады. 
120
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ТƏЖІРИБЕЛІК   МЕДИЦИНА  МƏСЕЛЕЛЕРІ

CORRECTION  OF  CONDITIONED  REFLEX  DISORDERS
 BY  FETHAL  CELLS  FROM  NERVOUS TISSUE  AT RATS 
AFTER CHRONIC  IMMOBILIZATION  STRESS
K.Niyazbekova 
Thus, chronic immobilization stress promotes to the conditioned refl ex activity disorders, which 
manifested by diffi culty of habits elaboration of directed labirynth behavior. Using of nervous tissue 
fethal  cells  suspension  improve  the  functional  condition  of  central  nervous  system  at  rats  after 
chronic immobilization stress.
П
роцессы  урбанизации,  ускорение  тем-
пов  развития  технологий  приводят  к 
расширению спектра стрессоров, с которыми 
ежедневно  приходится  сталкиваться  каждо-
му  человеку.  Под  воздействием  стрессоров 
происходит  истощение  ресурсов,  а  также 
срыв механизмов адаптации на психическом 
и  физиологическом  уровнях,  приводящий 
к  развитию  патологии  различных  органов  и 
систем [1]. В частности, в современном мире 
наиболее широко распространенным являет-
ся  стресс,  обусловленный  действием  факто-
ров  хронической  иммобилизации.  Длитель-
ная  иммобилизация  приводит  к  снижению 
механизмов  физиологической  регенерации, 
повышению  чувствительности  организма 
к  острой  гипоксии  и  развитию  поведенче-
ских  расстройств  тревожно-депрессивного 
характера  [2].  В  свою  очередь,  нарушения 
поведенческой  реактивности  могут  лежать 
в  основе  выраженной  социальной  и  трудо-
вой  дезадаптации  большого  числа  лиц,  еже-
дневно  подверженных  действию  стрессоров 
иммобилизационной  природы.  Указанные 
обстоятельства  диктуют  необходимость  раз-
работки  методов  коррекции  постстрессор-
ных  нарушений  функции  ЦНС  [3].  Учиты-
вая, что в последние десятилетия в медицине 
нашли широкое применение методы феталь-
но-клеточной  терапии  [4],  то  целью  нашего 
исследования  было  изучение  возможности 
использования  фетальных  клеток  нервной 
ткани (ФКНТ) для коррекции нарушении ус-
ловнорефлекторной деятельности животных, 
перенесших  хронический  иммобилизацион-
ный стресс (ХИС).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследования были проведены на 27 белых 
беспородных  крысах-самках,  которые  были 
разделены на 3 группы: I–интактные крысы-
самки  (n=9);  II–крысы-самки,  перенесшие 
хронический  иммобилизационный  стресс 
(n=10),  служившие  контролем;  III–крысы-
самки,  перенесшие  хронический  иммобили-
зационный  стресс  с  применением  терапии 
фетальными  клетками  нервной  ткани  (n=8). 
Условнорефлекторные  показатели,  характе-
ризующие  лабиринтное  поведение  изучали 
по методу Ковалева В.Г. (1990). Для этого ис-
пользовали радиальный лабиринт, состоящий 
из центральной платформы диаметром 25 см, 
с 8 радиальными лучами (длина 42 см, шири-
на 9 см, высота бортов – 5,5 см). Платформа 
была приподнята на высоту 70 см над полом. 
В конце каждого рукава помещали кубик хле-
ба со стороной 0,5см. Перед процедурой об-
учения крыс на протяжении 3 дней в течение 
5  минут  адаптировали  к  экспериментальной 
установке.  После  этого  осуществляли  пи-
щевую  депривацию,  которая  заключалось 
в  однократном,  в  течение  суток,  кормлении 
малой  порцией  пищи.  Исследование  прово-
дилось  на  протяжении  10  дней,  регистри-
ровалось  общее  время  реакции  (ОВ),  время 
заходов  в  первые  4  отсека  в  течение  5  мин 
(В1), время посещения оставшихся 4 отсеков 
в течение 5 минут после темновой адаптации 
продолжительностью 5 минут (В2) и количе-
ство  ошибок  при  освоении  коридоров  уста-
новки.  Если  крыса  не  выполняла  реакцию  в 
первую  половину  теста  (В1),  то  дальнейшее 
тестирование  прекращали  и  считали  не  вы-
полненной и В2. Возобновляли исследование 
условного пищевого рефлекса на следующий 
день  [5].  Кроме  того,  фиксировали  количе-
ство (%) крыс, полностью выполняющих за-
дачу по освоению всех коридоров лабиринта 
за каждый день обучения.  
Для  моделирования  хронического  иммо-
билизационного 
стресса 
использовались 
пластиковые  конструкции  объемом  250мл, 
на поверхности которых имелось множество 
отверстии  для  свободной  вентиляции  возду-
ха.  После  помещения  крысу  в  пластиковую 
конструкцию,  цилиндр  плотно  закрывался 
крышкой с отверстием для хвоста.  Обездви-
живание  крыс  осуществлялось  на  протяже-
нии 5 суток по 6 часов в одно и то же время 
[6]. Результаты исследований представлены в 
таблице.
В  качестве  экспериментальной  терапии  в 
опытах  апробировался  метод  лечения  с  ис-
пользованием  фетальных  клеток  нервной 
ткани. Приготовление взвеси фетальных кле-
ток  нервной  ткани  (ФКНТ)  проводилось  по 
известной  методике,  принятой  на  кафедре 
патологической  физиологии  им  В.Г.  Корпа-
чева  АО  «Медицинский  университет  Аста-
121
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ВОПРОСЫ  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

на».  Взвесь  ФКНТ  вводили  однократно  по 
завершению  моделирования  ХИС.  Препарат 
вводили  в  одно  и  то  же  время,  соответство-
вавшее 15
00
 часам дня, расчет вводимой дозы, 
равной  1  кусочку  объемом  1мм
3
  на  25г  жи-
вотного.
Статистическая обработка полученных ре-
зультатов  производилась  методами  вариаци-
онного анализа с использованием t-критерия 
Стьюдента  в  электронных  таблицах  «Micro-
soft Excel»
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Изучение  результатов  показало,  что  у  са-
мок  I  группы  формирование  лабиринтного 
поведения  происходило  следующим  обра-
зом:  обучение  навыку  на  выбор  побежек  в 
направлении  4  рукавов  установки  в  первой 
половине теста (В1) произошло в течение 5-6 
дней, то позволило продолжить эксперимент 
во второй половине теста. Так, в первый день 
наблюдения время реакции в первой полови-
не теста (В1) было равным - 3,70+0,55мин, во 
второй половине теста - 3,87+0,72мин (В2), а 
общее время реакции соответствовало значе-
ниям  5,84+0,64мин.  В  этот  день  количество 
крыс,  выполнявших    реакцию  составляло 
22%.  На  вторые  сутки  исследования  количе-
ство  животных,  успешно  освоивших  кори-
доры  экспериментальной  установки  увели-
чилось до 33,3%. Животные ранее не справ-
лявшиеся с задачей в последующие дни ста-
ли  активно  выполнять  реакцию.  К  шестому 
днюзначения В1равнялись  2,47+1,28мин, В2 
–  3,45+0,05мин,  а  ОВ  –  4,95+0,05мин,  коли-
чество  животных  полностью  выполняющих 
реакцию в этот день составило 90-100%.
При  анализе  результатов  было  установле-
но, что в II группе крысы-самки, перенесшие 
ХИС  приобрели  пищедобывательный  навык 
за  10  дней  исследования.  Процесс  обучения 
у животных изданный группы был сопряжен 
с признаками нарушений условнорефлектор-
ной  деятельности.  В  частности,  это  прояви-
лось  затруднением  выработки  реакции  сво-
бодного выбора побежек в рукава лабиринта 
с пищевым подкреплением во второй полови-
не  теста  после  5–минутного  периода  темно-
вой адаптации (в  течение  5  минут  животное 
не  заходило  в  оставшиеся  подкрепляемые 
рукава лабиринта). Обращало на себя внима-
ние то, что в I день исследования только 30% 
контрольных крыс-самок справились с осво-
ением  всех  коридоров  лабиринта,  тогда  как 
70% животных не смогли выполнить данную 
задачу.
Группа
Время наблюдения (сутки)
В1
I
II
III
В2
ОВ
III
122
2012, №1(69) Астана медициналық журналы  
ТƏЖІРИБЕЛІК   МЕДИЦИНА  МƏСЕЛЕЛЕРІ

Во  время  исследования  отмечалась  сле-
дующая  динамика  формирования  условного 
рефлекса  у  крыс-самок  контрольной  груп-
пы  (II).  В  первый  день  наблюдения  время 
реакции  в  первую  половину  теста  (В1)  со-
ставило  1,49+0,55мин,  во  второй  (В2)  по-
ловине  –  3,93+0,55мин,  а  общее  время  ре-
акции  (ОВ)  было  равным  –  5,42+0,58мин. 
В  последующие  дни  у  самок  контрольной 
группы отмечалось изменение структуры ус-
ловного  рефлекса  в  радиальном  лабиринте. 
При  этом  регистрировалось  невыполнение 
реакции за счет первой половины теста. Так, 
на  третий  день  показатель  (В1)  был  равным 
3,65+0,43мин, а во второй половине (В2) те-
ста лишь – 2,17+0,72мин. На пятый день В1 
был  -  4,44+0,39мин,  В2  –  1,0+0,71мин,  ОВ 
–  5,44+0,31мин.  Полученные  данные  свиде-
тельствуют о том, что самки не справляются 
с задачей поиска пищи в течение 5 минут вы-
полнения первой половины теста. 
Применение  ФКНТ  у  животных  III  груп-
пы,  перенесших  ХИС,  способствовало  уско-
рению  процесса  выработки  условно-пище-
добывательного  рефлекса  в  радиальном  ла-
биринте. Срок обучения у животных данный 
(III) группы сократился до 5 дней. В первый 
день  исследования  при  условии применения 
фетальных  клеток  нервной  ткани  количе-
ство  животных,  успешно  демонстрирующих 
навыки  направленного  лабиринтного  пове-
дения,  составляло  37,5+17,1%  и  достовер-
но  не  отличалось  от  контрольной  группы 
(30,0+14,5%,  р>0,05).  Существенные  раз-
личия  по  сравнению с  контрольной  группой 
определились  только  на  второй  день  наблю-
дения,  когда  62,5%  самок  опытной  группы 
оказались  способными  активно  справляться 
с освоением коридоров лабиринта (0%-в кон-
троле,  р<0,01).  На  пятый  день  проведения 
опытов  уже  100%  крыс-самок,  перенесших 
ХИС и применение ФКНТ обучились услов-
ному пищедобывательному рефлексу в ради-
альном  лабиринте,  тогда  как  в  контрольной 
группе  таких  животных  оказалось  лишь  на 
уровне  50,0%  (р<0,01).  В  последующем  об-
учившиеся  самки  из  опытной  группы  были 
выведены  из  эксперимента.  В  то  же  время 

жүктеу/скачать 4,34 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: