Үндінің «Sperm Processor Pvt. Ltd» компаниясының сайты
Спермийлердегі ядролық ақзат мөлшерін анықтау техникасы. Көлемі 100 мкл шәует үлгісіне көлемі 400 мкл физиологиялық ерітінді қосамыз және центрфугагада жылдамдығы 2000g 2-3 мин айналдырамыз. Бұқа шәуетін келесі есепппен сұйылтамыз: 1 мл шәуетте 40-60 млн спермийлер болатындай дәрежеде. Сосын тұнба үстіндегі сұйықтықты алып тастаймыз, сонан соң микропипетка көмегімен тұнбадан 5 мкл сұйықтықты заттық шыныға тамзамыз, жұғынджы дайындаймывз осылай және оны 5-7 мин ішінде ауада кептіреміз. Сосын заттық шыныларды горизонталдық жағдайда қойып, оларға 1 мл бекемдеуші ерітіндіні қосамыз, осы кезде жағынды толықтай бекемдеуші ерітіндінің астында қалуы тиіс, ұзақтығы 5 мин. Осы 5 мин уақыт өткен соң, бекемдеуші ерітіндіні төгіп тастаймыз, да стакандағы дисдилденген суға вертикалды жағдайда жуып бекемдеуші ерітіндіден жуып аламыз.
Осыдан соң, жағындыны ауада 5 мин кептіреміз, сосын 5 мин ішінде 1 мл №1 бояумен бояаймыз, сонан соң №1 бояуды жуып тастаймыз. Бояу №1 бояған кезде жағындыны толықтау жауып тұруы қажет, сосын бояу №1 төгіп тастап, сттаканчиктегі дистилденген суда вертикалды жағдайда жуамыз және ауада кептіреміз. Сосын тура осы процедураны екінші бояумен қайталаймыз, бояуды ұстау уақытысы 2 мин. . Осылай дайындалған жағындыны микроскопппен иммерсиялықұ май тамызған зерттейміз, ұлғайду деңгейі 100x. Көру алаңдарында басы боялған спермийлер санын анықтаймыз, егер олар қызғыл түске боялса (розовый цвет), онда олардың құрамында протамин бар екенін көрсетеді, ал спермийлердің басы қаныққан көк түске боялса (темно-синий цвет) онда ол спермийлерде құрамында гистон бар. Барлығы бірнеше көру алаңында 200 спермийлер санаймыз және формула бойынша құрамында протаминдер бар спермийлердің үлесін пайызбен анықтадық, олар пісіп жетілген спермийлер, және құрамында гистондар бар спермийлер, жетілмеген спермийлер.
Бұқа шәуетіндегі спермийлер құрамындағы протамин және гистон мөлшерін «AnilineBlue» бояуы арқылы бояп анықтау, қызғылт түске боялған спермийлер (пісіп жетілгендер), ұлғайту мөлшері 100x
