Дипломдық ЖҰмыс 5B070100 -«Биотехнология мамандығы»
жүктеу/скачать 3,33 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Амплификация
| Сурет 12 Өскен Микобактериялар
2.4 ДАҚЫЛДЫҚ МАТЕРИАЛДАН МИКОБАКТЕРИЯЛАРДЫҢ ТҮРЛЕРІН АНЫҚТАУ ҮШІН МОЛЕКУЛЯРЛЫҚ-ГЕНЕТИКАЛЫҚ ЗЕРТТЕУ ДНҚ-ны оқшаулау Тесттің бастапқы материалы тығыз ортада (Левенштайн-Йенсен, Миддлбрук) және сұйықтықта (мысалы, BACTEFORT, MB-check) өсетін бактериялар болуы мүмкін. Тест пациенттердің тікелей материалынан микобактерияларды анықтау үшін жарамсыз. Жұмыс алаңы күшейтілген ДНҚ-дан таза болуы керек. Шешуші сәт-жасушалардың толық лизисін қамтамасыз ету және вегетативті бактерияларды инактивациялау үшін үлгілерді 20 минут ішінде 95°C-қа дейін қыздыру. Бактериялардан күшейтілген ДНҚ алуға мүмкіндік беретін ДНҚ оқшаулаудың кез-келген әдісін қолдануға болады. Келесі қысқа хаттама күшейту үшін қолайлы ДНҚ алуға мүмкіндік береді: а. тығыз ортада өскен бактериялармен жұмыс істеу кезінде бактерияларды циклмен алып, шамамен 300 мкл суда тоқтата тұрыңыз (су молекулалық биологиялық зерттеулерге жарамды болуы керек). б. сұйық ортада өскен бактериялармен жұмыс істеу кезінде жұмысқа 1 мл алынады, бактериялар 10000g кезінде 15 минут ішінде II сыныпты ламинарлық бокста аэрозоль өткізбейтін роторы бар стандартты үстел центрифугасында Центрифугалау кезінде тұндырылады. Супернатантты ағызып, бактерияларды вортексте 100-300 мкл суда қалпына келтіреміз. Бактерияларды инкубациялау 1а және 1B су ваннасында 20 минут 95°C температурада (сурет 13). Сурет 13 Үлгіні су моншасында өңдеу Үлгіні ультрадыбыстық ваннада 15 минут ішінде өңдейміз.Сынаманы барынша жоғары жылдамдықпен 5 мин Центрифугалау және ПТР үшін 5 мкл супернатантты пайдалану. Егер ұзақ сақтау қажет болса, онда ДНҚ ерітіндісін жаңа түтікке ауыстыру керек. Амплификация ДНҚ-дан таза бөлмеде күшейту қоспасын (әрқайсысы 45 мкл) дайындау. ДНҚ үлгілерін пробиркаларға бөлек енгізу (сурет 14). Сурет 14 Амплификациялау барысы жүктеу/скачать 3,33 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|