Дипломдық ЖҰмыс 5B070100 -«Биотехнология мамандығы»
жүктеу/скачать 3,33 Mb.
|
Сайфудин Аружан БТ-43 Диплом.
Кесте 11
Мақсат: Левенштейн-Йенсен және сұйық (BACTEFORT MGIT 960) СМТ алынған MBT мәдениеттері зерттелді. Туберкулез микобактерияларын анықтау үшін ПТР әдісімен 46 зерттеу жүргізілді. BACTEFORT MGIT 960 көмегімен зерттеу жүргізгеннен кейін алынған 19сынама; Тығыз қоректік ортаға себілгеннен кейін 27 сынама алынды; Дәрілік сезімталдықты анықтау үшін 30 пациенттен Левенштейн-Йенсен және сұйық (BACTEFORT MGIT 960) СМТ алынған дақылдар алынды. Зерттеудің келесі әдістері қолданылды: - ДНҚ-STRIP-технологиялар және Mycobacterium tuberculosis кешенін және оның ТҚП-ға тұрақтылығын молекулярлық-генетикалық сәйкестендіруді жүргізу. - МБТ штаммдарының туберкулезге қарсы препараттарға дәрілік сезімталдығын анықтау үшін абсолюттік концентрация әдісі. Ортаның автоматтандырылған жүйелерін (BACTEFORT MGIT 960) және ПТР пайдалана отырып, негізгі қатардағы препараттарға ТМБ дәрілік сезімталдығын анықтау зерттеу әдісі. - Xpert MTB/RIF гендік-молекулалық технологиясы нақты уақыт режимінде ПТР өткізетін толық автоматтандырылған жүйе, оның барысында 2 сағат ішінде рифампицинге төзімділікпен байланысты rpob кодонындағы MTB кешенінің ДНҚ және ген мутациясы бір мезгілде анықталады. GeneXpert жүйесіне компьютер, штрих-кодты оқу сканері және зерттеу жүргізуге арналған реагенті бар бір реттік картридждер кіреді ( Сурет 4). Сурет 4 Xpert MTB/RIF гендік-молекулалық технологиясы Зертханада 3 сатылы дайындықтан кейін үлгі MTB/RIF картриджіне енгізіледі және GeneXpert аппаратына орналастырылады. Жүйеде тестілеу басталғаннан бастап GeneXpert автоматты түрде келесі қадамдарды жүргізеді, соның ішінде нуклеин қышқылдарын күшейту, реттілік объектісін анықтау және нәтижені түсіндіру (сурет 5). Сурет 5 MTB/RIF картриджі Бұл шолудың мақсаты – Xpert ® MTB/RIF (Xpert) өкпеден тыс туберкулезді және дәріге төзімділікті диагностикалау үшін қаншалықты дәл екенін анықтау. Туберкулезбен ауыратын науқастардың нақты тамақтануын бағалау халықтың тамақтануын эпидемиологиялық зерттеу үшін ұсынылған тамақ тұтыну жиілігін талдау әдісімен жүргізілді . Бұл әдіс сауалнамаға дейінгі соңғы 30 күн ішінде тұтынылатын тамақ өнімдері мен ыдыс - аяқтардың мөлшерін сипаттайтын сұрақтарды қамтитын стандартты сауалнаманы қолдануды қамтиды. 2.3 ҚАҚЫРЫҚТЫ АЛДЫН АЛА ӨҢДЕУ Үш алмастырылған натрий фосфорқышқылының 10% ерітіндісімен қақырықты өңдеу.Үш алмастырылған натрий фосфорийі (Na3PO4) ілеспе флораны жақсы басады, тіпті +4°C температурада 2-3 күндік материалды сақтау микобактерияларды зақымдамайды және олардың қоректік ортада өсу қабілетіне аз әсер етеді. Үш алмастырылған натрий фосфорының 10% ерітіндісімен материалды өңдеу келесідей жүзеге асырылады: 1) Стерильді флакондағы зерттелетін материалды 10% тең көлемде үш алмастырылған натрий фосфатына құйып, 10 минутқа сілкіткішке, содан кейін 18-20 сағатқа - 37°C температурада термостатқа салады, осыдан кейін материалды 3000G кезінде 15 минут бойы центрифугалайды. Көрсетілген режимде материалдағы микобактериялардың 95% жауын-шашын болады. 2) Тұнба үстіндегі сұйықтықты алады, тұнбаны NaCl изотоникалық ерітіндісінің 10-15 мл немесе дистилденген су жуады. 3) Супернатант алынып, 0,8-1,0 мл көлеміндегі тұнба параллель жағынды дайындаумен қоректік ортаға себіледі (сурет 6). Сурет 6 Қоректік ортаға себілген супернатант. N-ацетил-L-цистеин және натрий гидроксиді (NALC-NaOH) көмегімен өңдеу (сурет 7). Сурет 7 Қақырық жинау барысы. Қақырықты тез сұйылту үшін пайдаланылатын N-ацетил-L-цистеин (NALC) муколитикалық препаратын қолдану сынамамен араластыру кезінде деконтаминирлеуші заттың (NaOH) концентрациясын соңғы 1% концентрациясына дейін төмендетуге мүмкіндік береді. Бұл әдіс микобактериялардың егілуін арттырады, бірақ көп уақыт пен ақшаны қажет етеді. Ерітіндідегі Ацетилцистеин тез белсенділігін жоғалтады, сондықтан ерітінді күнделікті дайындалуы керек. Натрий цитраты сынамада болуы мүмкін және N-ацетил-L-цистеиннің әсерін инактивациялайтын ауыр металл иондарын байланыстыру үшін литикалық қоспаға енгізілген. NaCl-NaOH материалын өңдеу келесідей жүзеге асырылады: 10 мл немесе одан аз диагностикалық материалға nalc-NаOH ерітіндісінің тең көлемі қосылады, үлгіні араластыру үшін 10-20 секунд шайқалады, содан кейін бөлме температурасында 15 минутқа қалдырылады. Егер тиімдірек деконтаминация қажет болса, NaOH концентрациясын 5-6% - ға дейін, деконтаминациялайтын ерітіндімен үлгінің экспозиция уақытын көбейтпей арттыруға болады.15 минуттық экспозициядан кейін сынаманың көлемі 50 мл-ге дейін дистилденген сумен жеткізіледі, араластырылады және 3000G кезінде 15 минут бойы центрифугаланады. Тұнба бірден жұғынды дайындау арқылы қоректік ортаға себіледі (сурет 8). Сурет 8 Жұғындыны қоректік ортаға себу 2.4 BACTEFORT MGIT 960 АВТОМАТТАНДЫРЫЛҒАН ЖҮЙЕСІНЕ АРНАЛҒАН ПРОБИРКАЛАР МЕН ЕГУ ҮЛГІЛЕРІН ДАЙЫНДАУ MGIT 960 пробиркасында модификацияланған 7Н9 сорпа негізі бар.Шамамен алынған формула 1000 мл тазартылған суға келесі компоненттерден тұрады: - модификацияланған мидлбрук сорпасының негізі 7H9-5,9 г - казеин пептоны-1 ,25 г. Формула функционалды талаптарға байланысты қоспаларды енгізу мүмкіндігімен түзетіледі. Түтіктің түбінде силиконға орналастырылған флуоресцентті сенсор бар. Түтік толтыру кезінде 10% СО2 жуылады, содан кейін полипропилен бұрандалы қақпақпен жабылады. Қақпақты ортаға қандай да бір заттарды енгізу қажет болған жағдайда ғана ашу керек. BACTEFORT MGIT 960 жүйесі үшін MGIT өсу қоспасы (MGIT Growth Supplement) қарастырылған. Қоспаны MGIT пробиркасына сынама егілгенге дейін қосу қажет. 1 000 мл тазартылған суға MGIT өсу қоспасының құрамына мыналар кіреді: - бұқа альбумині 50,0 г - декстроза 20,0 г - каталаза 0,03 г - олеин қышқылы 0,1 г - полиоксиэтилен стеараты 1,1 г Контаминация қаупін төмендету үшін panta антибиотиктерінің қоспасы пайдаланылады, ол байыту қоспасымен бірге сынамаларды инокуляциялағанға дейін MGIT пробиркасына енгізіледі. Әрбір MGIT PANTA құтысында (MGIT 960 үшін) дайындау сәтінде келесі концентрациясы бар Бактерияға қарсы препараттардың лиофилизацияланған қоспасы бар: - полимиксин B 6,000 бірл. - амфотерицин b 600 мг - налидикс қышқылы 2,400 мг - триметоприм 600 мг - азлоциллин 600 мг Контаминация қаупін төмендету үшін panta антибиотиктерінің қоспасы пайдаланылады, ол байыту қоспасымен бірге сынамаларды инокуляциялағанға дейін MGIT пробиркасына енгізіледі. Әрбір MGIT PANTA құтысында (MGIT 960 үшін) дайындау сәтінде келесі концентрациясы бар Бактерияға қарсы препараттардың лиофилизацияланған қоспасы бар: полимиксин B 6,000 бірлік амфотерицин b 600 мг налидикс қышқылы 2,400 мг триметоприм 600 мг азлоциллин 600 мг MGIT пробиркаларын дайындау және үлгіні себу процедурасы.Pantarhit лиофилизацияланған қоспасын өсіру (сурет 9). Сурет 9 MGIT пробиркалары 15 мл MGIT Growth Supplement байыту қоспасында PANTA (бөгде флораның өсуін басуға арналған антибиотиктермен қоспа) ерітіп, оны panta құтысына қосады. 15 минутқа қалдырамыз. Материалды себу алдында әрбір MGIT пробиркасына 0,8 мл алынған ерітіндіні қостық. Барлық манипуляцияларды II - сыныпты қорғаныс ламинарлық бокста .жүргізу MGIT пробиркасына себу.Жұмыстың барлық кезеңдері тек II класты Ламинарлы бокста орындалуы керек (сурет 10). жүктеу/скачать 3,33 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||