О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология



Pdf көрінісі
бет110/305
Дата20.12.2022
өлшемі14,39 Mb.
#58441
түріУчебник
1   ...   106   107   108   109   110   111   112   113   ...   305
Байланысты:
8dccb36

Первая РГА относится к серологическим. В этой реакции эритроциты 
агглютинируются при взаимодействии с соответствующими антителами 
(гемагглютининами). Реакцию широко используют для определения групп 
крови. 
Вторая РГА не является серологической. В ней склеивание эритроцитов 
вызывают не антитела, а особые вещества, образуемые вирусами. Например, 
вирус гриппа агглютинирует эритроциты кур и морских свинок, вирус 
полиомиелита - эритроциты барана. Эта реакция позволяет судить о наличии 
того или иного вируса в исследуемом материале. 
Постановка реакции. Реакцию ставят в пробирках или на специальных 
пластинах с лунками. Исследуемый на наличие вируса материал разводят 
изотоническим раствором от 1:10 до 1:1280; 0,5 мл каждого разведения 
смешивают с равным объемом 1-2% взвеси эритроцитов. В контроле 0,5 мл 
эритроцитов смешивают с 0,5 мл изотонического раствора. Пробирки ставят в 
термостат на 30 мин, а пластины оставляют при комнатной температуре на 45 
мин. 
Учет результатов. При положительном результате реакции на дне пробирки 
или лунки выпадает осадок эритроцитов с фестончатыми краями ("зонтик"), 
покрывающий все дно лунки. При отрицательном результате эритроциты 
образуют плотный осадок с ровными краями ("пуговку"). Такой же осадок 
должен быть в контроле. Интенсивность реакции выражают знаками "плюс". 
Титром вируса является максимальное разведение материала, в котором 
происходит агглютинация. 
Реакция торможения гемагглютинации 
Это серологическая реакция, в которой специфические противовирусные 
антитела, взаимодействуя с вирусом (антигеном), нейтрализуют его и лишают 
способности агглютинировать эритроциты, т. е. тормозят реакцию 
гемагглютинации. 
Высокая 
специфичность 
реакции 
торможения 
гемагглютинации (РТГА) позволяет с ее помощью определить вид и даже тип 
вирусов, обнаруженных при постановке РГА. 
Постановка реакции. 0,25 мл противовирусной сыворотки в 
последовательных двукратных разведениях от 1:10 до 1:2560 смешивают с 
равным объемом материала, содержащего вирус, разведенного в 4 раза меньше 
титра, установленного в РГА. Смесь встряхивают и помещают в термостат на 
30 мин, после чего добавляют по 0,5 мл 1-2% взвеси эритроцитов. 
Реакцию сопровождают тремя контролями (табл. 17). 


 
Таблица 17. Контроли реакции торможения гемагглютинации 
Учет результатов производят после повторной инкубации в термостате в 
течение 30 или 45 мин при комнатной температуре. При правильной 
постановке опыта в контроле сыворотки и эритроцитов должна образоваться 
"пуговка" - нет агглютинирующего эритроциты фактора; в контроле антигена 
образуется "зонтик" - вирус вызвал агглютинацию эритроцитов. 
В опыте, если сыворотка гомологична изучаемому вирусу, образуется 
"пуговка" - сыворотка нейтрализовала вирус. Титр сыворотки - это ее 
максимальное разведение, в котором происходит задержка гемагглютинации. 
Реакция непрямой гемагглютинации 
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) основана на том, 
что эритроциты, если на их поверхности адсорбировать растворимый антиген, 
приобретают способность агглютинироваться при взаимодействии с 
антителами к адсорбированному антигену. Схема РНГА представлена на рис. 
34. РНГА широко применяют при диагностике ряда инфекций. 


 
Рис. 34. Схема реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). А - получение 
эритроцитарного диагностикума: Б - РПГА: 1 - эритроцит: 2 - изучаемый 
антиген; 3 - эритроцитарный диагностикум; 4 - антитело к изучаемому 
антигену: 5 - агглютинат 
Постановка реакции. Испытуемую сыворотку прогревают 30 мин при 56° С, 
разводят последовательно в соотношении 1:10 - 1:1280 и разливают по 0,25 мл 
в пробирки или лунки, куда затем добавляют по 2 капли эритроцитарного 
диагностикума (эритроциты с адсорбированным на них антигеном). 
Контроли: взвесь эритроцитарного диагностикума с заведомо иммунной 
сывороткой; взвесь диагностикума с нормальной сывороткой; взвесь 
нормальных эритроцитов с испытуемой сывороткой. В первом контроле 
должна произойти агглютинация, во втором и третьем ее не должно быть. 
При помощи РИГА можно определять неизвестный антиген, если на 
эритроциты адсорбировать заведомо известные антитела. 
Реакцию гемагглютинации можно ставить в объеме 0,025 мл (микрометод), 
пользуясь микротитратором Такачи. 
Контрольные вопросы 
1. О чем свидетельствует положительный результат РГА между 
эритроцитами и исследуемым на наличие вируса материалом? 
2. Произойдет ли агглютинация эритроцитов, если к ним добавить вирус и 
соответствующую ему сыворотку? Как называется реакция, выявляющая этот 
феномен? 
Задание 
Учтите и зарегистрируйте результат РИГА. 


Реакция преципитации 
В реакции преципитации происходит выпадение в осадок специфического 
иммунного комплекса, состоящего из растворимого антигена (лизата, 
экстракта, гаптена) и специфического антитела в присутствии электролитов. 
Образующееся в результате этой реакции мутное кольцо или осадок 
называют преципитатом. От реакции агглютинации эта реакция в основном 
отличается размером частиц антигена. 
Реакцию преципитации обычно применяют для определения антигена при 
диагностике ряда инфекций (сибирская язва, менингит и др.); в судебной 
медицине - для определения видовой принадлежности крови, спермы и др.; в 
санитарно-гигиенических исследованиях - при установлении фальсификации 
продуктов; с ее помощью определяют филогенетическое родство животных и 
растений. Для реакции необходимы: 
1. Антитела (преципитины) - иммунная сыворотка с высоким титром 
антител (не ниже 1:100000). Титр преципитирующей сыворотки 
устанавливают по наибольшему разведению антигена, с которым она дает 
реакцию. Сыворотку обычно применяют неразведенной или в разведении 1:5 - 
1:10. 
2. 
Антиген 

растворенные 
вещества 
белковой 
или 
липоиднополисахаридной природы (полные антигены и гаптены). 
3. Изотонический раствор. 
Основные методы проведения реакции преципитации: реакция 
кольцепреципитации и реакция преципитации в агаре (геле). 
Внимание! Все компоненты, участвующие в реакции преципитации, 
должны быть совершенно прозрачными. 


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   106   107   108   109   110   111   112   113   ...   305




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет