Таблица 17. Контроли реакции торможения гемагглютинации
Учет результатов производят после повторной инкубации в термостате в
течение 30 или 45 мин при комнатной температуре. При правильной
постановке опыта в контроле сыворотки и эритроцитов должна образоваться
"пуговка" - нет агглютинирующего эритроциты фактора; в контроле антигена
образуется "зонтик" - вирус вызвал агглютинацию эритроцитов.
В опыте, если сыворотка гомологична изучаемому вирусу, образуется
"пуговка" - сыворотка нейтрализовала вирус. Титр сыворотки - это ее
максимальное разведение, в котором происходит задержка гемагглютинации.
Реакция непрямой гемагглютинации
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) основана на том,
что эритроциты, если на их поверхности адсорбировать растворимый антиген,
приобретают
способность агглютинироваться при взаимодействии с
антителами к адсорбированному антигену. Схема РНГА представлена на рис.
34. РНГА широко применяют при диагностике ряда инфекций.
Рис. 34. Схема реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). А - получение
эритроцитарного диагностикума: Б - РПГА: 1 - эритроцит: 2 - изучаемый
антиген; 3 - эритроцитарный диагностикум; 4 - антитело к изучаемому
антигену: 5 - агглютинат
Постановка реакции. Испытуемую сыворотку прогревают 30 мин при 56° С,
разводят последовательно в соотношении 1:10 - 1:1280 и разливают по 0,25 мл
в пробирки или лунки, куда затем добавляют по 2 капли эритроцитарного
диагностикума (эритроциты с адсорбированным на них антигеном).
Контроли: взвесь эритроцитарного диагностикума с заведомо иммунной
сывороткой; взвесь диагностикума с
нормальной сывороткой; взвесь
нормальных эритроцитов с испытуемой сывороткой. В первом контроле
должна произойти агглютинация, во втором и третьем ее не должно быть.
При помощи РИГА можно определять неизвестный антиген, если на
эритроциты адсорбировать заведомо известные антитела.
Реакцию гемагглютинации можно ставить в объеме 0,025 мл (микрометод),
пользуясь микротитратором Такачи.
Контрольные вопросы
1. О
чем свидетельствует положительный результат РГА между
эритроцитами и исследуемым на наличие вируса материалом?
2. Произойдет ли агглютинация эритроцитов, если к ним добавить вирус и
соответствующую ему сыворотку? Как называется реакция, выявляющая этот
феномен?
Задание
Учтите и зарегистрируйте результат РИГА.
Реакция преципитации
В реакции преципитации происходит выпадение в осадок специфического
иммунного комплекса, состоящего из растворимого антигена (лизата,
экстракта, гаптена) и специфического антитела в присутствии электролитов.
Образующееся в результате этой реакции мутное кольцо или осадок
называют преципитатом. От реакции агглютинации эта реакция в основном
отличается размером частиц антигена.
Реакцию преципитации обычно применяют для определения антигена при
диагностике ряда инфекций (сибирская язва, менингит и др.); в
судебной
медицине - для определения видовой принадлежности крови, спермы и др.; в
санитарно-гигиенических исследованиях - при установлении фальсификации
продуктов; с ее помощью определяют филогенетическое родство животных и
растений. Для реакции необходимы:
1. Антитела (преципитины) - иммунная сыворотка с высоким титром
антител (не ниже 1:100000). Титр преципитирующей сыворотки
устанавливают по наибольшему разведению антигена, с которым она дает
реакцию. Сыворотку обычно применяют неразведенной или в разведении 1:5 -
1:10.
2.
Антиген
-
растворенные
вещества
белковой
или
липоиднополисахаридной природы (полные антигены и гаптены).
3. Изотонический раствор.
Основные
методы проведения реакции преципитации: реакция
кольцепреципитации и реакция преципитации в агаре (геле).
Внимание! Все компоненты, участвующие в реакции преципитации,
должны быть совершенно прозрачными.
Достарыңызбен бөлісу: