О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология



Pdf көрінісі
бет112/305
Дата20.12.2022
өлшемі14,39 Mb.
#58441
түріУчебник
1   ...   108   109   110   111   112   113   114   115   ...   305
Байланысты:
8dccb36

Реакция гемолиза (табл. 19). Для реакции необходимы: 
1. Антиген - 3% взвесь отмытых эритроцитов барана из расчета 0,3 мл 
осадка эритроцитов и 9,7 мл изотонического раствора. 
2. Антитело - гемолитическая сыворотка (гемолизин) против эритроцитов 
барана; обычно готовят на производстве, лиофилизируют и на этикетке 
указывают титр. 
Титр гемолизина - то наибольшее разведение сыворотки, при котором 
происходит полный гемолиз 3% взвеси эритроцитов в присутствии 
комплемента. Для реакции гемолиза гемолизин берут в тройном титре, т. е. 
разводят в 3 раза меньше, чем до титра. Например, при титре сыворотки 1:1200, 
сыворотку разводят 1:400 (0,1 мл сыворотки
*
и 39,9 мл изотонического 
раствора). Избыток гемолизина необходим, так как часть его могут 
адсорбировать другие компоненты реакции. 
*
(
Меньше 0,1 мл сыворотки брать не следует - страдает точность измерения.



3. 
Комплемент разводят 1:10 (0,2 мл комплемента и 1,8 мл изотонического 
раствора). 
4. Изотонический раствор. 
 
Таблица 19. Схема реакции гемолиза 
Учет результатов. При правильно поставленной реакции в 1-й пробирке 
произойдет гемолиз - содержимое ее станет прозрачным. В контролях 
жидкость остается мутной: во 2-й пробирке для наступления гемолиза 
недостает комплемента, в 3-й - нет гемолизина, в 4-й - нет ни гемолизина, ни 
комплемента, в 5-й - антиген не соответствует антителу, 
В случае надобности гемолитическую сыворотку титруют по следующей 
схеме (табл. 20). 
Перед титрованием готовят исходное разведение сыворотки 1:100 (0,1 мл 
сыворотки и 9,9 мл изотонического раствора), из которого делают 
необходимые разведения, например: 
 
Из этих разведений вносят по 0,5 мл сыворотки в пробирки опыта 
титрования, как показано в табл. 20. 


 
Таблица 20. Схема титрования гемолитической сыворотки (гемолизина) 
В примере, приведенном в табл. 20, титр гемолитической сыворотки равен 
1:1200. 
При использовании свежей гемолитической сыворотки ее необходимо 
инактивировать, чтобы разрушить имеющийся в ней комплемент. Для этого ее 
прогревают 30 мин при 56° С на водяной бане или в инактиваторе с 
терморегулятором. Последний способ лучше: он исключает возможность 
перегрева сыворотки, т. е. ее денатурации. Денатурированные сыворотки 
непригодны для опыта. 


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   108   109   110   111   112   113   114   115   ...   305




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет