Контрольные вопросы
1. Что произойдет с эритроцитами, если вместо
изотонического раствора
натрия хлорида применить дистиллированную воду? Что лежит в основе этого
феномена?
2. Какая реакция произойдет при взаимодействии эритроцитов с
гомологичной иммунной сывороткой в отсутствии комплемента?
Задание
Поставьте реакцию гемолиза. Зафиксируйте и зарисуйте результат.
Реакция связывания комплемента
Реакция связывания комплемента (РСК) основана на том, что
специфический комплекс антиген - антитело
всегда адсорбирует на себе
(связывает) комплемент.
Эту реакцию широко применяют при идентификации антигенов и в
серодиагностике инфекций, особенно заболеваний,
вызванных спирохетами
(реакция Вассермана), риккетсиями и вирусами.
РСК - сложная серологическая реакция. В ней участвуют комплемент и две
системы антиген - антитело. По существу, это две серологические реакции.
Первая система - основная состоит из антигена и антитела (один известный,
другой нет). К ней добавляют определенное количество комплемента. При
соответствии антигена и антитела этой системы они соединятся и свяжут
комплемент. Образовавшийся комплекс мелкодисперсный и не виден.
Об образовании этого комплекса узнают с помощью второй системы
гемолитической или индикаторной. В нее входят эритроциты барана (антиген)
и соответствующая им гемолитическая сыворотка (антитело), т. е. готовый
иммунный комплекс. В этой системе лизис
эритроцитов может произойти
только в присутствии комплемента. Если комплемент связан первой системой
(при соответствии в ней антигена и антитела), то во второй системе гемолиза
не будет - так как нет свободного комплемента. Отсутствие гемолиза
(содержимое пробирки мутное или на дне ее осадок эритроцитов)
регистрируют как положительный результат РСК (рис. 35).
Рис. 35. Схема реакции связывания комплемента (РСК). I - положительный
результат (нет гемолиза); II - отрицательный результат (гемолиз)
Если в
первой системе антиген не соответствует антителу, то иммунный
комплекс не образуется и комплемент останется свободным. Оставшийся
свободным, комплемент
участвует во второй системе, вызывая гемолиз, -
результат РСК отрицательный (содержимое пробирок прозрачно - "лаковая
кровь").
Компоненты реакции связывания комплемента:
1. Антиген - обычно лизат, экстракт, гаптен;
взвесь микроорганизмов Основная
2. Антитело - сыворотка больного система
3. Комплемент - сыворотка морских свинок
4. Антиген - эритроциты барана Гемолити-
5. Антитело - гемолизин к эритроцитам барана ческая
6. Изотонический раствор
система
Ввиду того что в РСК участвует большое количество сложных компонентов,
они должны быть предварительно оттитрованы и взяты в реакцию в точных
количествах и в равных объемах: по 0,5 или 0,25, реже по 0,2 мл.
Соответственно весь опыт проводят в объемах 2,5, 1,25 или 1,0 мл (большие
объемы дают более точный результат). Титрование компонентов реакции
проводят в том же объеме, в каком ставят опыт, заменяя недостающие
ингредиенты изотоническим раствором.
Подготовка ингредиентов
1.
Достарыңызбен бөлісу: