"фараби əлемі" атты халықаралық ғылыми конференция материалдары
ХАРАКТЕРИСТИКА АР - И NIR АКТИВНОСТИ В БЕСКЛЕТОЧНЫХ ЭКСТРАКТАХ ИЗ
жүктеу/скачать 2,79 Mb. Pdf көрінісі
|
| ХАРАКТЕРИСТИКА АР - И NIR АКТИВНОСТИ В БЕСКЛЕТОЧНЫХ ЭКСТРАКТАХ ИЗ
ДИКОГО И МУТАНТНЫХ ПО АП-ЭНДОНУКЛЕАЗАМ РАСТЕНИЙ ARABIDOPSIS THALIANA Қуанбай Ə.Қ., Алияскарова У.С., Рахматуллаева Г.Т., Тайпақова С.М. ДГП научно-исследовательский институт проблем биологии и биотехнологии КазНУ им. аль-Фараби, Алматы, Казахстан kuanbai.aigerim93@gmail.com Апуриновые/апиримидиновые (АР) эндонуклеазы являются ключевыми ферментами реализации двух пересекающихся путей репарации ДНК: ДНК-гликозилаза инициированной эксцизионной репарации оснований и инцизионной репарации нуклеотидов. В процессе BER, АР- эндонуклеазы специфически гидролизует фосфодиэфирную связь рядом с АР-сайтом и 3'- блокирующими группами, образующимися в ДНК после удаления окисленного основания ДНК- гликозилазой. Тогда как в NIR механизме АР-эндонуклеазы гидролизует фосфодиэфирную связь ДНК с 5'-конца от повреждения. Геном широко используемого модельного организма A.thaliana кодирует три предполагаемых гомологов главной человеческой АП-эндонуклеазы 1: Arp, Ape1L и Ape2. ARP– это главная АР-эндонуклеаза растений, которая удаляет абазивные сайты. Однако не известно, содержат ли АР-эндонуклеазы растений NIR активность. В работе использованы линии инсерционных мутантных растений арабидопсиса из коллекции Института Salk. Геномную ДНК и тотальную РНК от нескольких аrp-/- мутантов анализировали с помощью ПЦР и ОТ-ПЦР. В результате были выявлены четыре растения гомозиготные по мутантному гену аrp-/-. Вестерн-блот-анализ общего белка из листьев и корней 15-дневных проростков из растений дикого типа и arp –/– с использованием полученных нами кроличьих анти- ARP-поликлональных антител подтвердил отсутствие белка ARP у мутантных растений. Бесклеточные экстракты из Arabidopsis дикого типа эффективно расщепляли 30-мерный THF•T- дуплекс. Экстракты из arp-/- растений не показали или проявляли очень низкую АП-эндонуклеазную активность. Инкубация 30-мерного αdA•T-дуплекса с различными концентрациями бесклеточных экстрактов из Arabidopsis дикого типа привела к устойчивому расщеплению ДНК и получению 10- и 9-мерных продуктов расщепления. Увеличение количества WT экстрактов не привело к увеличению эффективности расщепления αdA•T дуплекса, наоборот привело к увеличению неспецифической деградации ДНК. Экстракты из arp-/- мутантов не проявляли NIR активность. Инкубация THF•T и αdA•T дуплексов с экстрактами из arp-/- мутантов вызывала генерацию малого количества 10- и 9- мерных продуктов расщепления, что может быть связано либо с неспецифической 3'→5' экзонуклеазной активностью или наличием белков Ape1L и Ape2. В совокупности эти результаты свидетельствуют о том, что ARP является основной AП- и NIR- эндонуклеазой в A.thaliana. Научный руководитель: д.б.н., профессор, Академик НАН РК Бисенбаев А.К. жүктеу/скачать 2,79 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|