Фармацевтическая

296
Оборудование для ВЭТСХ (Camag, Швейцария) 
Этап
: нанесение пробы на тонкослойную или высокоэффективную 
тонкослойную пластину (рис. 254–256). 
Рис. 254.
Аппликатор для ручного нанесения проб Nanomat 4 
и капиллярный распылитель (диспенсер) 
Рис. 255.
Автосемплер-аппликатор 
для полуавтоматического нанесения проб
Linomat 5 
при помощи азота или сжатого воздуха 
Рис. 256.
Автосемплер-аппликатор 
для автоматического нанесения проб 
Automatic TLC Sampler 4 (ATS 4) 
296

297
Этап
: элюирование (рис. 257–262). 
Рис. 257.
Камеры для сатурации (предварительного насыщения) тонкослойных 
и высокоэффективных тонкослойных пластин парами элюента 
Рис. 258.
Горизонтальная камера для сатурации (предварительного насыщения) 
тонкослойных и высокоэффективных тонкослойных пластин парами элюента 
для всех типов элюентов (растворителей) и тонкослойных, и высокоэффективных 
тонкослойных пластин размерами 10×10 и 10×20 см 
Рис. 259.
Подставка SmartAlert для мониторинга тонкослойной и высокоэффективной 
тонкослойной пластины для горизонтальных камер с целью сатурации 
297

298
Рис. 260.
Резатель тонкослойных и высокоэффективных тонкослойных пластин 
со стеклянной подложкой 
Рис. 261.
Камера для автоматического изократического элюирования Camag 
Automatic developing chamber 2 — ADC-2 с модулем контроля влажности 
Рис. 262.
Камера для автоматического градиентного элюирования Camag 
Automated Multiple Development-2 — AMD-2 
298

299
Этап
: дериватизация (рис. 263
–
268). 
Рис. 263.
Дериватизатор Camag для автоматического нанесения пробы на пластины
Рис. 264.
Стеклокерамическая нагревательная панель Camag TLC Plate Heater 3 
Рис. 265.
Устройство для иммерсии Camag Chromatogram immersion device 3 
299

300
Рис. 266.
Распылитель Camag TLC Sprayer 
Рис. 267.
Ручной распылитель с резиновой грушей Camag (бюджетный вариант) 
Рис. 268.
Камера Camag TLC spray cabinet 2 для удаления тумана реагента 
300

301
Этап
: оценка, детектирование и количественное определение. Доку-
ментирование процедуры (рис. 269–274). 
Рис. 269.
Ультрафиолетовая лампа Camag UV Lamp 4 
Рис. 270.
Ультрафиолетовая камера Camag UV Cabinet 4 
Рис. 271.
Документирование и оценка с помощью комплекса Camag TLC Visualizer 2 
Рис. 272.
Люминесцентная камера Camag BioLuminizer 2 
301

302
Рис. 273.
Количественная оценка сканером Camag TLC Scanner 4 
Рис. 274.
Интегратор с масс-спектрометром Camag TLC-MS Interface 2 
Документирование процедуры (рис. 275). 
Рис. 275.
Программа Camag visioCATS 
Типы комплектаций комплексов Camag 
1. Базовый комплект Basic kit для целей тонкослойной хроматографии 
(рис. 276). 
302

303
Рис. 276.
Базовая комплектация Basic kit 
2. Средняя комплектация Advanced system для небольшого количества 
проб и количественного определения (рис. 277). 
Рис. 277.
Средняя комплектация Advanced system для небольшого количества проб 
с возможностью количественной оценки 
3. Средняя комплектация Advanced system для большого количества проб, 
высокой производительности и количественного определения (рис. 278). 
Рис. 278.
Средняя комплектация Advanced system для большого количества проб 
с возможностью количественной оценки 
4. Средняя комплектация Advanced system для количественного анализа с 
небольшим количеством проб (рис. 279). 
Рис. 279.
Средняя комплектация Advanced system для количественного анализа 
с небольшим количеством проб 
303

304
5. Базовая комплектация Basic herbal system для фитохимического анали-
за растительных объектов (рис. 280). 
Рис. 280.
Базовая комплектация Basic herbal system для фитохимического анализа 
6. Средняя комплектация Advanced herbal system для большого количест-
ва проб, высокой производительности и количественного определения (рис. 
281). 
Рис. 281.
Средняя комплектация Advanced herbal system для лабораторий 
с высокой производительностью с возможностью количественного определения 
3.1.2. СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА 
ПРИ РАБОТЕ НА КОМПЛЕКСЕ 
ПО ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ 
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ 
Разработчики
: B. Meier, A. Spriano (Цюрихский университет естествен-
ных наук). Перевод с английского языка выполнен доцентом, к. м. н. 
А. Е. Сухановым. 
Цель
: данные стандартные операционные процедуры (СОП) описывают 
руководство по анализу методом ВЭТСХ. 
Определения
: ВЭТСХ выполняется на стеклянных пластинах размером 
20×10 см, покрытых силикагелем-60 F254. Для цели ВЭТСХ используются со-
ответствующие приборы и компьютерные программы, необходимые для нане-
сения образцов, получения хроматограмм, дериватизации или окрашивания ис-
комых веществ, количественного определения и документирования результатов 
исследований. 
Примечание
: если в вашем комплекте приборов по ВЭТСХ отсутствуют 
автоматические проявочные камеры, то вы можете использовать высокоэффек-
тивные тонкослойные пластины размером 10×10 см для ручного использования 
со следующими параметрами применения (длина трека 8 мм, количество тре-
ков 7, расстояние от нижнего края пластины 15 мм, расстояние между пятнами 
304

305
минимум 11 мм при использовании метанола в качестве растворителя (элюен-
та). В задний лоток двойной проявочной камеры помещается достаточное ко-
личество фильтровальной бумаги и наливают 10 мл элюента — метанола. 
В передний лоток двойной проявочной камеры наливают достаточное количе-
ство элюента, чтобы уровень его достигал 5 мм. 
Примечание
: при проведении исследования в лаборатории контролиро-
вать температуру и относительную влажность воздуха. 
1. Подготовка высокоэффективных тонкослойных пластин. 
1.1. Получить пластины размером 20×10 см, покрытые силикагелем-60 
F254. Зафиксировать номер партии пластин. 
1.2. Осмотр каждой по отдельности пластин под лучами ультрафиолето-
вого облучателя при длине волны 254 нм на предмет наличия повреждений в 
слое. Если какие-либо повреждения обнаружены, пластину необходимо унич-
тожить. 
1.3. Мягким химическим карандашом сделать идентифицирующую над-
пись с указанием даты исследования, персональных данных исследователя в 
правом верхнем углу. Например, ER-23/02/10-001. 
1.4. По правому краю пластины отметить расстояние в 70 мм кверху от 
нижнего края пластины. Примечание: левша может сделать соответствующую 
отметку с левого края пластины. 
2. Подготовка двойной проявочной камеры (только для ручного исполь-
зования). 
2.1. Получить двойную проявочную камеру для пластин размером 
20×10 см. 
2.2. Установить позади двойной проявочной камеры слой фильтроваль-
ной бумаги соответствующего размера. 
2.3. Налить 20 мл хроматографического проявителя (элюента) поверх 
фильтровальной бумаги в задний лоток двойной проявочной камеры. 
В передний лоток двойной проявочной камеры прилить достаточное количест-
во хроматографического проявителя (элюента) до уровня в 5 мм. 
2.4. Закрыть крышку двойной проявочной камеры на 20 мин для насыще-
ния. 
3. Пример использования. 
3.1. Выбрать следующие параметры для хроматографирования: 
— длина трека — 8 мм; 
— количество треков — 15; 
— первая позиция (пятно) — на 20 мм от края пластины; 
— расстояние между пятнами — 8 мм; 
— расстояние между дорожками выбирается автоматически (минимум 
11 мм); 
— растворитель (элюент) по умолчанию — метанол. 
3.2. Не учитывать при анализе любые нехарактерные пятна. 
По данным сайта https://www.pharmaguideline.com предложена СОП на 
высокоэффективную тонкослойную хроматографию (второй вариант) по ка-
либровке комплекса по ВЭТСХ. 
305

306
1. Цель: проверка производительности комплекса по ВЭТСХ. 
2. Область применения: эта процедура применима для калибровки ком-
плекса ВЭТСХ. 
3. Ответственность: выполнение — технический помощник, проверка — 
руководитель или менеджер проекта. 
4. Отчётность: заведующий отделом. 
5. Процедура. 
5.1. Проверить работоспособность комплекса по показателям: «ли-
нейность пятен» и «воспроизводимость пятен». 
5.2. Подготовить подвижную фазу в соответствии с методом, приве-
дённым ниже. 
5.3. Подготовить решение, как указано ниже. 
5.4. Использовать высокоэффективные пластины размером 10×10 см 
(Kieselgel 60 F254) или подобную пластину. 
5.5. Для линейности определения. 
5.5.1. Наносят 2, 4, 6, 8 и 10 мкл стандартного раствора на пла-
стину ВЭЖХ с помощью аппликатора. 
5.5.2. Опускают пластину в подвижную фазу. 
5.5.3. Высушить пластину. 
5.5.4. Сканировать пластину в денситометрическом режиме. 
5.5.5. Проверка линейности и коэффициента корреляции. 
5.5.6. Заполнить данные и внести в таблицу, приведённую ниже. 
5.6. Воспроизводимость пятен. 
5.6.1. Наности 10 мкл стандартного раствора на пластину 5 раз 
подряд. 
5.6.2. Опустить пластину в подвижную фазу. 
5.6.3. Высушивание пластины. 
5.6.4. Сканирование пластины в денситометрическом режиме. 
5.6.5. Рассчитать значения стандартных отклонений для пяти пя-
тен. Отклонение не должно превышать 3%. 
5.6.6. Зафиксировать данные. 
Результат проверки. 
Название метода: высокоэффективная тонкослойная хроматография. 
Параметры метода: размер пластины 10×10 см, линия старта 15 мм от 
нижнего края пластины, длина трека 6 мм, расстояние между пятнами 8 мм, 
скорость продвижения подвижной фазы 15 с/мл, объёмы вводимых проб: 2, 4, 
6, 8, 10 мл. Состав подвижной фазы: метанол : этилацетат : толуол : аммония 
гидроксид (5:8:4:0,4). 
Линейность. 
Коэффициент корреляции. 
Проверка производительности выполнена. 
Проверено. 
Срок выполнения следующей проверки производительности (табл. 47). 
Результат проверки. 
Название метода: высокоэффективная тонкослойная хроматография. 
306

307
Выполнено. 
Номер модели. 
Идентификационный номер. 
Таблица
 47 
Проверка воспроизводимости системы ВЭТСХ 
Номер трека 
Вводимый объём, мкл 
Область, площадь 
1 
10 
2 
10 
3 
10 
4 
10 
5 
10 
Проверка производительности выполнена. 
Проверено. 
Срок выполнения следующей проверки производительности. 
3.1.3. ИДЕНТИФИКАЦИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ 
МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ТОНКОСЛОЙНОЙ 
ХРОМАТОГРАФИИ 
Пример 119.
Данный метод пригоден для скрининга и количественного 
определения следующих фосфолипидов: лизофосфатидной кислоты (LPA), ли-
зофосфатидилхолина (LPC), лизофосфатидилэтаноламина (LPE), лизофосфати-
дилинозитола (LPI), фосфатидной кислоты (PA), фосфатидилхолина (PC), фос-
фатидилэтаноламина (PE) и фосфатидилинозитола (PI) (рис. 282). 
Рис. 282. 

жүктеу/скачать 66,35 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: