Фармацевтическая

382
разделения и анализа сложных смесей органических и неорганических веществ, 
экспрессность, эффективность и высокую чувствительность. Это серийный ме-
тод определения органических соединений многих классов, его широко исполь-
зуют при анализе смесей аминокислот, белков, лекарственных препаратов. 
ВЭЖХ находит применение и в неорганическом анализе для разделения ионов 
в зависимости от их размера. 
Хроматограммы можно количественно оценить либо непосредственно, 
либо с помощью некоторых видов калибровок. 
1.
Прямой метод, или нормализация.
 
Этот метод можно применять в 
тех случаях, когда все компоненты смеси элюируются из колонки. Детектор да-
ет линейные и воспроизводимые данные с одинаковой чувствительностью для 
всех компонентов. 
2.
Метод расчета поправочных коэффициентов для пламенно-иониза-
ционного детектора.
 
Приготавливают калибровочную смесь соединений из-
вестной массы, и после разделения измеряют площади, соответствующие от-
дельным компонентам. Далее рассчитывают отношения площадей и масс каж-
дого компонента, одно из отношений принимают за стандартное и все попра-
вочные коэффициенты приводят к этому значению. 
3.
Метод абсолютной калибровки.
 
В колонку вводят известное количе-
ство вещества и рассчитывают площади полученных хроматографических пи-
ков. По полученным данным строят калибровочную кривую зависимости пло-
щади пика от соответствующего количества вещества. 
4.
Метод внутреннего стандарта.
 
Приготавливают смеси, содержащие 
чистый анализируемый компонент и внутренний стандарт в различных соот-
ношениях, хроматографируют их, определяют площади полученных пиков и 
строят калибровочную кривую зависимости отношения площадей пиков от от-
ношения масс компонентов и стандарта. 
Современная высокоэффективная жидкостная хроматография высокого 
давления, скоростная жидкостная хроматография начала развиваться в начале 
1970-х гг. Разработка нового метода обусловливалась следующими обстоятель-
ствами: 
1) необходимостью анализа высококипящих (> 200
°
С) или неустойчивых 
соединений, которые не разделяются методом газовой хроматографии; 
2) необходимостью увеличения скорости разделения и повышения эф-
фективности метода колоночной жидкостной хроматографии. 
ВЭЖХ в настоящее время не только в значительной степени вытеснила 
классические физико-химические методы анализа, но и обогнала по темпам 
развития ГЖХ. Это обусловлено рядом присущих ей преимуществ: 
1) возможность исследования практически любых объектов без каких-
либо ограничений по их физико-химическим свойствам; 
2) большой диапазон молекулярных масс веществ, с которыми можно ра-
ботать (от нескольких единиц до десятков миллионов), что существенно шире, 
чем в ГЖХ; 
3) мягкость условий ВЭЖХ, когда разделение можно проводить при тем-
пературах, близких к комнатной, при отсутствии контакта с воздухом, делает ее 
372

383
особенно пригодной, а иногда единственным методом исследования лабильных 
соединений (биологически активных веществ и биополимеров); 
4) высокая эффективность разделения (которая составляет 200 000 теоре-
тических тарелок на 1 м) существенно превосходит таковую в ГХЖ; 
5) экспрессность анализа: обычно разделение сложной смеси в ВЭЖХ за-
нимает несколько минут; 
6) высокая чувствительность ВЭЖХ в ряде случаев превосходит чувстви-
тельность в ГЖХ, а высокоселективные детекторы позволяют определить мик-
роколичества веществ в сложных смесях; 
7) возможность автоматизации разделения и анализа сложных смесей ор-
ганических и неорганических веществ. В настоящее время в лабораториях 
имеются полностью автоматизированные хроматографы, которые дают воз-
можность не только автоматически дозировать и проводить хроматографиче-
ское разделение целой серии образцов, но и оценивать хроматограммы с помо-
щью предварительной градуировки. 
ВЭЖХ представляет хорошо оформленный инструментальный метод, ко-
торый широко применяют в различных областях науки и техники: биохимия, 
молекулярная биология, фитохимия, контроль загрязнения окружающей среды, 
а также в химической, нефтехимической, пищевой и фармацевтической про-
мышленности. 
ВЭЖХ — серийный метод определения органических соединений многих 
классов; его широко используют при анализе смесей аминокислот, белков, раз-
личных лекарственных средств с целью установления их подлинности, чистоты 
и количественного содержания. 
Высокоэффективная жидкостная хроматография выполняется под повы-
шенным давлением жидкости до 666,5 кПа (500 атм). 

жүктеу/скачать 66,35 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: