Разделяющий, 12%
|
Концентрирующий, 4%
|
акриламид/бис-
аккриламид (30%Т,
2,67 % С stock)
|
4 мл
|
0,67 мл
|
деионизованная
вода
|
3,35 мл
|
3,05 мл
|
1,5М Трис HCl pH 8,8
|
2,5 мл
|
-
|
0,5М Трис HCl pH 6,8
|
-
|
1,25
|
10% SDS
|
100 мкл
|
50 мкл
|
10% ПСА.
|
100 мкл
|
50 мкл
|
TEMEД
|
10 мкл
|
10 мкл
|
Электрофорез проводили в вертикальном приборе при напряжении 200 В, постоянной силе тока 50 мА. Перед нанесением образцы белков нагревали 2 – 3 мин в кипящей водяной бане и быстро центрифугировали при 14000 об./мин в течение 5 мин.
Для приготовления электрофорезного геля готовили стоковые растворы.
2.8. Метод трансформации растений «биолистик»
Наиболее активно применяемым методом прямого переноса генов является способ генетической трансформации растений с использованием установки «short gun» (дробовик), называемый био(бал)листической трансформацией. Он нашёл самое широкое применение именно для трансформации злаковых. Суть метода заключается в том, что на микрочастицы-носители из химически инертного металла (золото, вольфрам, платина или лёд), размером 0,6-1,2 мкм, осаждается ДНК, а затем они с помощью порохового заряда, сжатого гелия или электрического поля разгоняются до высоких скоростей (1000 м/сек) и поток частиц кратковременно направляют на поверхность клеток. Некоторые из них проникают внутрь клеток и попадают в ядро, где могут включиться в хромосомы растения.
Достарыңызбен бөлісу: |
