Микробиология

113 
Гемолизинді титрлеу схемасы.
Биофабрикадан шығарылған 
гемолизиннің (1:1 қатынасында глицеринмен консервіленген) негізгі 
сҧйылтымын дайындау ҥшін, 0,2 мл гемолизинді 9,8 мл физиологиялық 
ерітіндіде араластырады (1:100). Осы сҧйылтымның 1 мл-ін 9 мл 
физиологиялық ерітіндімен араластырып (1:1000) негізгі ерітіндіні 
дайындап алады. Негізгі ерітіндіден келесі 1:1500, 1:2000, 1:3000, 
1:4000, 
1:5000, 
1:6000, 
1:7000, 
1:8000 
қатынастарындағы 
сҧйылтымдарды әзірлегеннен соң, гемолизинді 2-кестеде кӛрсетілген 
схема бойынша титрлейді.
2-кесте. Гемолизинді титрлеу схемасы 
Компоненттер 
Гемолизин сҧйылтымдары 
1:1000 1:1500 1:2000 1:3000 1:4000 1:5000 1:6000 1:7000 
Гемолизин, мл 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
Физиологиялық ерітінді 
(антиген мен қан сарысуы 
орнына), мл 
1,0 
1,0 
1,0 
1,0 
1,0 
1,0 
1,0 
1,0 
1:20 сҧйылтымындағы 
комплемент, мл 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
2%-ды қой эритроциті, мл 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
0,5 
Су моншасында ҧстау (+37ºС, 10 минут) 
Титрлеу нәтижесін анықтау 
- 
- 
- 
- 
++ 
+++ ++++ ++++ 
Гемолизинді титрлеу кезінде келесі бақылаулар қойылуы қажет: 
эритроциттер бақылауы – спонтанды гемолиздің болмауы ҥшін (0,5 мл 
2%-ды қой эритроциті + 2 мл физиологиялық ерітінді); гемолизин 
бақылауы – эритройиттердің комплементсіз гемолизге ҧшырауы ҥшін 
(0,5 мл 1:1000 қатынасындағы гемолизин + 0,5 мл 2%-ды қой эритроциті 
+ 1,5 мл физиологиялық ерітінді); комплементтің бақылауы – 
гемолизиннің қатысуынсыз эритроциттердің гемолизге ҧшырауының 
болмауы ҥшін (0,5 мл 1:20 қатынасындағы комплемент + 0,5 мл 2%-ды 
қой эритроциті + 1,5 мл физиологиялық ерітінді); гемолитті жҥйенің 
бақылауы (0,5 мл 1:1000 гемолизин + 0,5 мл 2%-ды қой эритроциті + 0,5 
мл 1:20 комплемент + 1,5 мл физиологиялық ерітінді).
Титрлеудің 
нәтижесінде 
эритроциттерді 
(комплементтің 
қатысуымен) гемолизге ҧшырата алатын гемолизиннің ең минимальды 
мӛлшердегі титрін анықтап алғаннан кейін, негізгі зерттеу жҧмыстарына 
оның тӛрт еселенген концентрациясын қолданады. Мысалы, 
гемолизиннің ақырғы титрі 1:3000 болса, зерттеу жҧмысына 1:750 
қатынасындағы титрді пайдаланады. 1:1 қатынасында глицеринмен 
консервіленген гемолизинді 2:750 сҧйылтымында алады, яғни 0,2 
гемолизин және 74,8 мл физиологиялық ерітіндіні қҧрайды.

жүктеу/скачать 5,08 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: