1999 ж. Шыға издается бастады с 1999 г

18 
 
4 
Шуйский 
район, 
Ески-
Шуйский 
сельский 
округ, 
с. 
Бельбасар 
43º  
 
73º  
 
С. 
Бельбасар, 
200 га,  
1 скмг 
43º  
 
73º  
 
 
197
3 
 
1 
 
В 
1968 
1973 
1974 
1977 
КРС-1 
МРС-1 
МРС-1 
КРС-1 
Пало-1 
Пало-1 
Пало-1 
Пало-1 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
7 
8 
9 
10 
11 
12 
13 
5 
Шуйский 
район, 
Коккайнарс
кий 
сельский 
округ, 
с. 
Естемесова 
43º  
 
73º  
 
С.Естемес
ова,  20  га, 
1 скмг 
43º 
 
73º 
 
- 
- 
- 
1977 
ЛОШ-
4 
Пало-4 
 
Итого 
СНП-5 
 
 
Очагов-9 
S
=1080 га,  
9 скмг 
 
 
5 
всп 
9 
В-9  15 
КРС-5 
 
МРС- 
30 
ЛОШ-
4 
КРС- 
Пало 5 
Пало 
МРС-
30 
ЛОШ 
пало-4 
 
Примечания:  СНП  –  стационарно  неблагополучный  пункт;  СКМГ-  скотомогильник;  S  – 
площадь очага СЯ; КРС – крупный рогатый скот; МРС – мелкий рогатый скот; СВИН – 
свиньи; В – выздоровело; с.ш. – северная широта; в.д. – восточная долгота. 
Из данных таблицы 2 следует, что в зоне газопровода «Кордай-Шу»имеются 5 СНП 
по  СЯ,  9  очагов  с  общей  площадью  1080  га,  9  скотомогильников.  Последний  случай 
заболевания  людей  сибирской  язвой  отмечен  в  1970  году,  исход  -  выздоровление. 
Последний случай заболевания животных отмечен в 1982 году, когда заболела и пала от 
СЯ одна голова КРС. Всего за все время наблюдения в данных пунктах зарегистрировано 
7 случаев заболевания сибирской язвой (1-люди, 6-животные).  
Выводы  1.  Жамбылская  область  является  зоной  с  высоким  риском  возникновения 
вспышек  сибирской  язвы.  Самыми  неблагополучными  по  СЯ  являются  в  порядке 
убывания: Кордайский, Жуалинский, Меркенский, им. Т. Рыскулова и Шуйский районы. 
2  Общую  эпидемическую  и  эпизоотическую  ситуацию  по  сибирской  язве  на 
территории газопровода «Кордай – Шу» можно считать умеренно опасной. Стационарно 
неблагополучные  пункты  и  очаги  сибирской  язвы  по  маршруту  данного  газопровода 
имеются  в  с.  Георгиевка  и  с.  Касык-Кордайского  района,  с.  Енбекши  -  района  им.  Т. 
Рыскулова, с. Бельбасар и с. Естемисова - Шуйского района. 
 
Литературa 
 
1. 
Кадастр  стационарно-неблагополучных  по  сибирской  язве  пунктов  Республики 
Казахстан. – Алмата. - 2003.   
2. 
Лухнова  Л.Ю.,  Пазылов  Е.К.,  Утебаева  С.М.,  Мейерханов  Т.М.,  Бердыкулы  А. 
Проблемы профилактики сибирской язвы в Казахстане // Вестник сельскохозяйственной 
науки Казахстана «Бастау».– 2004. – №2.  – С. 57-60.  
3. 
Утепбергенова Г. А., Дмитровский А. М., Досанов А. Д. и др. Сибирская язва в 
Южном Казахстане за период 1996 – 2006 г.г. // Медицина. –  2007. -№5. – С. 47 – 49. 
4. 
Черкасский Б. Л. Преобразование природы и здоровье человека. М., 1981.  

19 
 
5. 
Малмыгин И. Земля болеет человеком. Журнал «Диалог», 2000, № 9. 
6. 
Кухалашвили Т. Очаги сибирской язвы в Грузии. Тбилиси, 2007. 
 
Айтжанов Б.Д., Шакенов Б.Н., Иванов Н.П., Заманбеков Н.А.,  
Отарбаев Б.К., Бакиева Ф.А. 
 
ЖАМБЫЛ  ОБЛЫСЫНЫҢ ГАЗ ҚҰБЫРЛАРЫ ӨТЕТІН АЙМАҚТАРДАРДЫҢ 
ТОПАЛАҢНАН ЭПИЗООТОЛОГИЯЛЫҚ-ЭПИДЕМИОЛОГИЯЛЫҚ ҚАУІПСІЗДІГІ 
 
Жамбыл облысы Топалаңның шығу қауіпі жоғары аймаққа жатады. Қордай, Жуалы, 
Меркі, Рысқұлов, Шу аудандары аса қолайсыз болып табылады.  
«Қордай-Шу»  газқұбыры  орналасқан  аймақ  топалаңнан  жалпы  эпидемиялық  және 
эпизоотиялық жағдайы тұрақты қауіпті болып есептеледі. Қордай ауданының Георгиевка 
және  Қасық  ауылдары,  Еңбекші  ауданының  Рысқұлов  және  Белбасар  ауылдары,  Шу 
ауданының  Естемісов  ауылындағы  газқұбыры  өтетін  аймақтар  топалаңнан  тұрақты  сау 
емес пункттеріне жатады. 
Кілт  сөздер:  топалаң,  эпизоотиялық  жағдай,  "Қордай-Шу"  жерасты  газ  құбыры, 
топалаңға қарсы санитариялық шаралар, эпидемиологиялық мониторинг. 
 
B.D. Aitzhanov, B.N. Shakenov, N.P. Ivanov, N.A. Zamanbekov,  
B.K. Otarbaev, F.A. Bakieva 
 
EPIZOOTIC AND EPIDEMIC SITUATION ON ANTHRAX ON AREAS OF THE BUILT 
GAS PIPELINE HIGHWAYS OF ZHAMBYL AREA 
 
Zhambyl habitat is at high risk of outbreaks of particularly dangerous infection disease - 
anthrax . Thus, a large-scale construction work, in which there is a significant amount of soil 
excavation is necessary to carry out epidemiological and epizootic monitoring, carry out 
appropriate sanitary and preventive measures against this diseases . The results of epizootic and 
epidemiological research on anthrax Zhambyl territories adjacent to the pipeline being built 
underground " Kordai - Shu ." 
Keywords: anthrax, epizootic situation, underground pipeline "Kordai - Shu" sanitary 
measures against anthrax, epidemiological monitoring. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

20 
 
УДК: 619:616.921.5; 636.91 
 
И.К. Акжунусова, К.К. Табынов, Н.Н. Асанжанова,  
Ш.Ж. Рыскельдинова, Ж.К. Кыдырбаев, Б.М. Хайруллин  
 
РГП «Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности» КН 
МОН РК  п.г.т. Гвардейский, Жамбылская область 
 
ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСОВ ГРИППА А И В ДЛЯ 
ПРИГОТОВЛЕНИЯ ТРЕХВАЛЕНТНОЙ СПЛИТ – ВАКЦИНЫ ПРОТИВ  
СЕЗОННОГО ГРИППА 
 
Аннотация  
В  данной  статье  представлены  результаты  исследований  по  определению  
оптимальных  параметров  культивирования  рекомбинантных  штаммов  A/NYMC  X-217 
(H3N
2)  и  B/NYMC  BX-49  вируса  гриппа  в  куриных  эмбрионах.  Установлено,  что 
максимальное  накопление  вирусов  отмечается  при  следующих 
условиях 
культивирования: возраст куриных эмбрионов - 9-11 суток при заражении в аллантоисную 
полость, заражающая доза вируса – 1000-10000 ЭИД
50, 
температура и продолжительность 
инкубации  –  (34  ±  0,5)  ºС  и  48  часов,  соответственно.  При  соблюдении  указанных 
параметров 
культивирования 
можно 
стабильно 
получать 
высокоактивный 
вируссодержащий  материал  с  инфекционной  и  гемагглютинирующей  активностью,  а 
также  содержанием  гемагглютинина  не  менее  7,0  lg  ЭИД
50
/см
3
,  1:256  и  7,0  мкг/мл, 
соответственно, 
что 
вполне 
пригодно 
для 
приготовления 
трехвалентной 
инактивированной сплит-вакцины против сезонного гриппа. 
Ключевые слова: грипп, сплит-вакцина, культивирования, куриный эмбрион 
 
Введение 
В  течение  весьма  длительного  времени  грипп  остается  серьезной  проблемой  для 
здоровья людей, вызывая ежегодные эпидемии, во время которых заболевает до 10% всего 
населения планеты, а во время возникающих время от времени гриппозных пандемий это 
число  может  возрастать  в  4-6  раз.  Кроме  того,  практически  все  эпидемии  гриппа 
сопровождаются  увеличением  смертности  [1].  Гриппозные  эпидемии  наносят 
экономический ущерб, исчисляемый в миллиардах долларах США.  
Основной  стратегией  борьбы  против  гриппа  является  вакцинация.  В  настоящее 
время  в  мировой  практике  вакцинопрофилактики  применяются  три  типа 
инактивированных  вакцин: цельновирионные вакцины, расщепленные (сплит) вакцины и 
субъединичные  вакцины.  ИЗ  этих  трех  видов  гриппозных  вакцин,  цельновирионная 
вакцина  содержит  весь  набор  антигенов  актуальных  штаммов  вирусов  гриппа, 
иммуногенность  их  высокая,  но  из-за  большого  количества  антигенов  в  их  составе  эти 
вакцины самые реактогенные и процент возникновения нежелательных реакций после их 
введения  максимальный.  Поэтому  эти  вакцины  имеют  возрастные  ограничения  к 
использованию. Субъединичная вакцина содержит только поверхностные антигены (НА и 
NА)  вирусов  гриппа,  что  обеспечивает  хорошую  иммуногенность  и  минимум 
нежелательных  реакций  на  ее  введение  (аллергия  к  компонентам  вакцины,  например,  к 
белку  куриных  яиц)  [2].  Сплит-вакцины  характеризуются  значительно  меньшим  риском 
побочных  реакций,  предположительно  в  связи  с  разрушением  пространственной 
структуры  вируса.  Преимущество  сплит-вакцин  в  том,  что  они  содержат  как  наружные, 
так  и  внутренние  антигены  вируса  гриппа,  при  этом  они  избавлены  от  самого  главного 
недостатка  цельновирионных  вакцин  –  наличия  токсинов.  Сплит-вакцины  можно 

21 
 
применять детям с 6-месячного возраста, они рекомендованы для предотвращения гриппа 
у  беременных  женщин.  По  сути  дела,  сплит-вакцины  представляют  собой  «золотую 
середину» в профилактике гриппа, поскольку по уровню побочных реакций аналогичны 
субъединичным  вакцинам,  а  по  иммунологической  эффективности  –  цельновирионным. 
Профилактическая  эффективность  вакцин  этого  класса  колеблется  в  интервале  от  75  до 
96%.  Сплит  и  субъединичные  вакцины  можно  использовать  для  вакцинации  лиц  с 
иммунными  дефектами,  беременных  и  кормящих  женщин;  допускается  их  введение  на 
фоне иммуносупрессивной терапии [3]. 
Состав вакцин ежегодно меняется для того, чтобы обеспечить максимальную защиту 
от  "дикого"  вируса.  В  зависимости  от  прогнозов  ВОЗ  о  том,  какой  тип  вируса  будет 
циркулировать  в  следующем  сезоне,  в  вакцину  включают  разные  антигены.  Обычно  в 
состав  современных  вакцин  включают  3  вида  вирусных  антигенов  –  два  вида  типа  А  и 
один вид типа В. 
До  настоящего  времени  исследования,  нацеленные  на  разработку  сезонной 
трехвалентной гриппозной вакцины для здравоохранения, в Казахстане не проводились, и 
поэтому  существует  реальная  угроза  биологической  безопасности  страны  в  случае 
пандемии  гриппа.  В  НИИПББ  для  решения  данной  проблемы,  ведутся  работы  по 
созданию  трехвалентной  сплит-вакцины  против  сезонного  гриппа.  Отработка  условий 
культивирования вакцинных вирусов с целью их накопления является важным шагом на 
пути  разработки  вирусных  вакцин.  Как  известно  куриные  эмбрионы  (КЭ)  в  настоящее 
время  являются  основным  субстратом  для  культивирования  гриппозных  вирусов. 
Доказана  высокая  эффективность  использования  КЭ  по  сравнению  с  различными 
культурами  клеток  (MDCK,  Vero,  HeLa,  ФЭК),  позволяющих  получить  высокоактивное 
вирусное  сырье,  пригодное  для    производства  инактивированных  вакцин  с  избежанием 
дорогостоящей процедуры концентрирования [4]. Наилучшим образом адаптированные к 
этой  системе  штаммы  ВГП  дают  в  КЭ  достаточно  высокие  титры  (около  10
4
-10
5
 
гемагглютинирующих  единиц  на  1  эмбрион).  Кроме  того,  эмбрион,  изолированный  от 
внешней  среды  не  требует  создания  специальных  стерильных  условий,  что  также 
повышает ценность их использования. 
В  отношении  параметров  культивирования  вирусов  гриппа  (ВГ)  в  зависимости  от 
штаммовой принадлежности и степени их адаптированности к биологической системе в 
литературе  приводятся  разноречивые  данные.  В  большинстве  своем,  штаммы  ВГ 
культивируются на КЭ в возрасте 10-13 суток, инфицируются в аллантоисную полость в 
дозах  100-10000  ЭИД
50 
и  инкубируются  при  температурах  34-38  ºС.  Как  видно, 
регламенты  культивирования  штаммов  ВГ  в  КЭ  колеблется  в  достаточно  широких 
пределах, что вынуждает многих производителей противогриппозных вакцин, определять 
параметры  культивирования  новых  вакцинных  штаммов  вирусов  гриппа  с  целью 
приготовления надежных и высокоэффективных вакцин [ 5, 6 ]. 
В  этой  связи  целью  настоящих  исследований  являлось  определение  оптимальных 
параметров  культивирование  рекомбинантных  штаммов  A/NYMC  X-217 (H3N2)  и 
B/NYMC  BX-
49  для  получения  высокоактивного  вируссодержащего  материала  (ВСМ), 
необходимого  для  разработки  технологии  изготовления  сезонной  трехвалентной 
инактивированной сплит-вакцины против сезонного гриппа. 
Материалы и методы 
Вирусы  гриппа  и  куриные  эмбрионы.  Для  оптимизации  культуральных  свойств 
вирусов  гриппа  А  и  В  использованы  следующие  штаммы  вируса  гриппа  (согласно 
рекомендации ВОЗ); 
- 
рекомбинантный штамм NYMC X-217 (NIBSC code: 12/100), полученный в NIBSC 
(Великобритания) методом обратной генетики из штаммов A/Victoria/361/2011 (H3N2) и 
А/PR/8/34 (H1N1), соотношение генов 6:2;  

22 
 
- 
рекомбинантный штамм NYMC BX-49 (NIBSC code: 11/244), полученный в NIBSC 
(Великобритания)  методом  обратной  генетики  из  штаммов  B/Texas/06/2011  (линия 
Ямагата)  и  BX-38-1P-1  (B/Lee/40-подобный  высокоурожаемый  реассортантный 
/Panama/45/90  PA 
и  NS  гены),  соотношение  генов  1:1:6,  пассажный  уровень  7, 
гемагглютинирующая активность 1:512; 
 - 
развивающиеся  куриные  эмбрионы  (РКЭ)  из  АО  «Алель  Агро»  (Алматинская 
область, Казахстан). 
Оптимизация  параметров  культивирования  вирусов.  С  целью  определения  дозы 
заражения  рекомбинантных  штаммов  A/NYMC  X-217 (H3N2)  и  B/NYMC  BX  (ВГ) 
инфицирование проводили в аллантоисную полость КЭ в дозах от 1 до 1000000 и от 1 до 
100000 ЭИД
50
, соответственно.
.
 
Для  определения  оптимального  возраста,  температуры  и  сроков  инкубирования 
инфицированных  КЭ  заражали  9,  10,  11,  12,  13  -  суточные  КЭ  в  дозе  1000  ЭИД
50 
и 
инкубировали при температурах (32 ± 0,5) ºС, (34 ± 0,5) ºС, (36 ± 0,5) ºС, (38 ± 0,5) ºС  в 
течение 24, 48, 72, 96 часов. Уровень накопления вируса оценивали путем титрования в 
КЭ,  постановкой  реакции  гемагглютинации  (РГА)  и  одиночной  радиальной 
иммунодиффузии (ОРИД).  
Определение  инфекционной  активности  вирусов.  Инфекционную  активность 
определяли  титрованием  вируса  в  КЭ  по  общепринятому  методу  [7].  С  этой  целью 
готовили  десятикратные  разведения  вирусной  суспензии  на  физиологическом  буферном 
растворе (ФБР) от 10
-1
 
до 10
-10
. Каждым разведением вирусного материала заражали по 4 
КЭ в аллантоисную полость по 0,2 мл. Культивирование КЭ проводили при температуре 
34 ± 0,5 ºС, относительной влажности воздуха 55 ± 5%, в течение 2 сут. Наличие вируса в 
КЭ после охлаждения определяли капельным методом в РГА. Титр вируса вычисляли по 
методу L. Reed и H. Muench и выражали в log
10
 
ЭИД
50
/мл
 
согласно [8]. 
Определение  гемагглютинирующей  активности  вирусов.  Гемагглютинирующую 
активность вирусов определяли по общепринятой методике в РГА с использованием 1 % 
взвеси эритроцитов петуха [7]. 
Определение  концентрации  гемагглютинина  в  ОРИД.  Определение  концентрации 
гемагглютинина  в  ВСМ  проводили    методом  одиночной  радиальной  иммунодиффузии 
(ОРИД) в соответствии с [9]. 
Статистическая 
обработка. 
Определяли 
среднеарифметические 
значения 
исследуемых  параметров,  а  также  их  стандартную  ошибку.  Достоверность  различий 
между показателями определяли с использованием статистической программы GraphPad 
Prism 6 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA). Значение Р < 0,05 считали значимым. 
Результаты и обсуждения 
Доза  инфицирования  КЭ.  Для  определения  оптимальных  параметров 
культивирования  рекомбинантных  штаммов  A/NYMC  X-217 (H3N2)  и  B/NYMC  BX-49 
вируса гриппа в КЭ проведены исследования по изучению уровня накопления вируса при 
различных  дозах  инфицирования.  При  этом  использовали  для  штамма  A/NYMC  X-217 
(H3N2) 
от  1  до  1000000  ЭИД
50 
и  для  штамма  B/NYMC  BX-49  от  1  до  100000  ЭИД
50.
 
Результаты проведенных исследований представлены на рисунке 1. 
 
 

23 
 
 
Рисунок 1 – Уровень накопления штаммов A/NYMC X-217 (H3N2) и В/NYMC BX-
49 вируса в КЭ в зависимости от инфицирующей дозы. 
 
Из данных рисунка 1 видно, что штаммы A/NYMC X-217 (H3N2) и В/NYMC BX-49 
со  всеми  испытанными  дозами  способны  накапливаться  в  КЭ  в  достаточно  высоких 
титрах.  Максимальные  значения  инфекционной  и  гемагглютинирующей  активности 
вируса  были  получены  при  использовании  дозы  для  штамма  A/NYMC  X-217 (H3N2)  в 
пределах от 1000 до 10000 ЭИД
50 
и В/NYMC BX-49 от 1000 до 10000 ЭИД
50 
 
при этом 
установлено  зависимость  уровня  накопления  вируса  от  дозы  заражения.
 
С  увеличением 
дозы  вируса  от  1  до  10000  ЭИД
50 
(
Р  <  0,05)  в  КЭ  отмечается  рост  титров  как 
инфекционной  и  гемагглютинирующей  активности,  так  и  количественного  содержания 
гемагглютинина.  В  дальнейшем  с  увеличением  дозы  заражения  не  наблюдалось  роста 
инфекционной,  гемагглютинирующей  активности  или  содержания  гемагглютинина.  Так 
же  установлена  очень  высокая  степень  корреляции  между  значениями  титров  вируса 
гриппа штаммов A/NYMC X-217 (H3N2) и В/NYMC BX-49 по РГА и ОРИД, коэффициент 
корреляции  r = 0,9 и r = 0,8, соответственно.  
На  основании  вышеизложенного,  с  учетом  наивысшего  значения  инфекционной, 
гемагглютинирующей активности и содержания гемагглютинина в качестве оптимальной 
дозы заражения КЭ для штаммов A/NYMC X-217 (H3N2) и В/NYMC BX-49 принята доза 
в  интервале  1000-10000  ЭИД
50
,  так  как  дальнейшее  увеличение  дозы  заражения  не 
приводило  к  статистически  достоверному  (Р  >  0,05)  увеличению  активности  вируса. 
Полученные нами результаты согласуются с данными ряда авторов [10, 11, 12]. 
Температура инкубации вирусов. В следующих сериях опытов определяли уровень 
накопления  штаммов  A/NYMC  X-217 (H3N2)  и  B/NYMC  BX-49  вируса  гриппа  в 
зависимости  от  температуры  инкубирования  инфицированных  КЭ.  В  опытах 
использовали  10  сут  КЭ,  которым  вводили  по  0,2  мл  вируссодержащего  материала  из 
каждого  штамма  A/NYMC  X-217 (H3N2)  и  B/NYMC  BX-49  вируса  гриппа  в  дозе  1000 

24 
 
ЭИД
50. 
Дальнейшее  культивирование  вирусов  проводили  по  методике,  указанной  в 
разделе «Материалы и методы».
 
Инфицированные КЭ инкубировали при температурах 32, 
34,  36,  38  ºС  и  относительной  влажности  воздуха  (60  ±  5)  %  в  течение  48  час.  После 
инкубирование 
проводили 
сбор 
АЖ 
для 
определения 
инфекционной, 
гемагглютинирующей активности и содержание ГА. 
Результаты проведенных исследований представлены на рисунке 2. 
 
 
 
Рисунок 2 – Уровень накопления штаммов A/NYMC X-217 (H3N2) и В/NYMC BX-
49 вируса в КЭ в зависимости от  температуры инкубирования.  
  
Данные  рисунка  2  свидетельствуют  о  высоком  уровне  репродукции  штаммов 
A/NYMC  X-217 (H3N
2) вируса гриппа вне зависимости от температуры инкубирования. 
Статистический  анализ  показал  достоверность  результатов  (Р  <  0,05),  максимальное 
накопление вируса происходит при температуре 34 °С и ориентируясь на экономичность и 
технологичность  производственного  процесса,  в  качестве  оптимальной  температуры 
инкубирования для штаммов A/NYMC X-217 (H3N2) и В/NYMC BX-49 вируса гриппа в 
КЭ  выбрана  температура  (34  ±  0,5)  °С.  Корреляционный  анализ  показал  что,  средний 
коэффициент корреляции (r=0,6) отмечен между значениями титров РГА и ОРИД вируса 
гриппа штамма A/NYMC X-217 (H3N2) и очень высокий коэффициент корреляции (r=0,9) 
штамма В/NYMC BX-49. Исследуемые штаммы ВГ обладали высокой репродуктивностью 
в КЭ при температуре культивирования (34 ± 0,5) ºС, что согласуются с литературными 
данными [13,14].  

25 
 
Возраст КЭ для инфицирования. По данным, представленным в литературе [5, 6], и 
результатам  собственных  исследований  на  репродукцию  вируса  гриппа  (ВГ),  в 
определенной  степени  влияет  возраст  РКЭ.  С  целью  определения  уровня  накопления 
вируса в зависимости от возраста КЭ нами проведены следующие серии исследований. С 
этой  целью  инфицировали  КЭ  9,  10,  11,  12,  13  сут  возраста  в  дозе  1000  ЭИД
50
.
 
После 
инкубирования  в  течение  48  час  при  температуре  (34  ±  0,5)  °С  проводили  сбор  АЖ  и 
инфекционную  активность  вируса  определяли  методом  титрования  в  КЭ, 
гемагглютинирующую  активность  вируса  определяли  в  реакции  гемагглютинации  и 
содержание  гемагглютинина  определяли  по  методу  ОРИД.  Результаты  проведенных 
исследований приведены в рисунке 3.  
 
 
Рисунок 3 – Уровень накопления штаммов A/NYMC X-217 (H3N2) и В/NYMC BX- 
49 вируса гриппа в РКЭ в зависимости от возраста КЭ. 
 
Из данных рисунка 3 следует, что уровень репродукции двух штаммов A/NYMC X-
217 (H3N
2) и В/NYMC BX-49 вируса гриппа вне зависимости от возраста КЭ находится 
на  высоком  уровне:  инфекционная  активность  от  (7,20  ±  0,14)  до  (9,16  ±  0,12)  lg 
ЭИД
50
/см
3
; гемагглютинирующая от 1:322 ± 86,42 до 1:1290 ± 345,45; содержание ГА от 
(7,53  ±  0,9)  до  (11,43  ±  0,49)  мкг/мл;  достоверность  результатов  (Р  <  0,05).  При  этом 
репродукция вируса в 12-13 сут КЭ приводит к снижению объема ВАЖ и к ухудшению ее 
качества. Показано очень слабая корреляция (r=0,2) между значениями титров ВГ по РГА 
и  ОРИД  штамма  A/NYMC  X-217 (H3N2)  и  слабая  отрицательная  корреляция  (r=-0,5) 
между гемагглютинирующей активности и содержанием гемагглютинина. Таким образом, 
по  результатам  проведенных  исследований  для  выращивания  штаммов  A/NYMC  X-217 
(H3N
2)  и  В/NYMC  BX-49  рекомендуются  КЭ  9-11-сут  возраста,  что  согласуется  с 
литературными данными [10, 15, 16, 17]. 
Срок культивирования вирусов в КЭ. Заключительным этапом в исследованиях по 
оптимизации условий культивирования штаммов A/NYMC X-217 (H3N2) и B/NYMC BX-
49  вируса  гриппа  было  определение  оптимального  срока  культивирования  вируса  в  КЭ. 

26 
 
Для этой цели КЭ 10-сут возраста инфицировали вирусами гриппа в дозе 1000 ЭИД
50
 
и 
инкубировали при температуре (34 ± 0,5) °С. Через 24, 48, 72 и 96 часов инфицированные 
эмбрионы охлаждали при 4 ± 1 °С в течение 12 – 14 час и собирали АЖ для определения 
инфекционной, гемагглютинирующей активности и содержание ГА накопленного вируса. 
Результаты исследований представлены в рисунке 4 
 
 
 
Рисунок 4  – Уровень накопления штаммов A/NYMC X-217 (H3N2) и В/NYMC BX-
49 вируса в РКЭ в зависимости от срока культивирования. 
  
Из данных рисунка 4 видно, что при инфицировании 10-сут КЭ штаммами  A/NYMC 
X-217 (H3N
2) и В/NYMC BX- 49 наивысшее накопление вирусов отмечается на 48-96 ч 
инкубирования. Установлена средняя степень корреляции (r=0,7) для штамма A/NYMC X-
217 (H3N
2)  и  слабая  степень  корреляции  (r=0,3)  для  штамма  В/NYMC  BX  -  49  между 
значениями  титров  ВГ  по  РГА  и  ОРИД.  В  целях  сокращения  продолжительности 
технологического  процесса  в  качестве  оптимального  срока  был  выбран  режим  с  48  ч 
инкубации.  На  основе  проведенного  сравнительного  анализа  полученных  результатов  с 
данными научной литературы можно сделать вывод, что срок инкубирования 48 является 
оптимальной для вируса гриппа [10, 16]. 
Представленные  результаты  показывают,  что  при  оптимизации  параметров 
культивирования  рекомбинантных  штаммов  A/NYMC  X-217 (H3N2)  и  В/NYMC  BX-49 
вируса гриппа в КЭ достигнуты высокие показатели активности, которые не имели между 
собой  значимой  разницы.  Наиболее  значимым  преимуществом  нашей  работы  является 
определение накопления гемагглютинина в ОРИД в качестве дополнительного критерия 
оценки.  ОРИД  позволяет  характеризовать  качество  инактивированной  гриппозной 
вакцины  (ИГВ)  по  концентрации  ГА  (в  мкг/мл)  в  вакцинном  препарате.  В  то  же  время 
ОРИД  обладает  большой  точностью  и  воспроизводимостью,  меньшей  зависимостью 
результатов от условий постановки эксперимента, что позволяет охарактеризовать строго 

27 
 
количественно  все  компоненты  поливалентных  гриппозных  вакцин.  Последнее 
обстоятельство  чрезвычайно  важно  для  практики  производства  и  контроля  ИГВ  и  их 
дальнейшего  совершенствования  [18].  Таким  образом,  было  показано,  что  содержание 
гемагглютинина, определенная методом ОРИД, находится в пределах от 7,0 мкг/мл, что 
укладывается в допустимые ВОЗ пределы. 
Таким  образом,  в  результате  проведенных  исследований  получены  необходимые 
данные  по  оптимальным  параметрам  культивирования  рекомбинантных  штаммов 
A/NYMC  X-217 (H3N
2)  и  В/NYMC  BX-  49.  Следует  отметить,  что  параметры  другого 
рекомбинантного  штамма  NIBRG  -  121хр  (Н1N1),  входящего  в  состав  трехвалентной 
вакцины против сезонного гриппа, были установлены в наших ранних исследованиях [12]. 

жүктеу/скачать 5,87 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: