Как видно по данным таблицы 3 у бесплодных телок и коров-первотелок матка
находится в тазовой полости, не большое ее смещение на 1,6- 2,0 см в зависимости от
возраста все же происходит.
При исследовании беременных животных в зависимости от возраста перемещение
матки с тазовой полости в первые 30-60 дней происходит на 0,9-1,6 см (таблица 4).
271
Таблица 4 -
Результаты исследования топографии половых органов беременных
животных в зависимости от возраста
Данные таблицы 4 показывают, что имеется положительная корреляция между
увеличением срока беременности и возрастом, так на 71-80, 80-90 дни после осеменения
или беременности у коров до 3 летнего возраста в сравнении с животными более 5 лет и
старше происходит перемещение матки в тазовой полости в сторону брюшной полости на
3,8-5,1 см. Эти изменения, хоть и не большие связанные с возрастом особенно у
бесплодных животных нужно учитывать при разработке диагностического набора.
Заключение
У беременных животных (n=24) на 30-40 дни после осеменения матка находится в
тазовой полости от наружных половых органов на расстоянии 30,5±0,7 см , рога матки
располагаются на конце лонного сращения или несколько опускаются в брюшную
полость. На 41-60 дни после осеменения матка из середины тазовой полости
перемещается ко входу в таз на 32±0,5см, рога матки и яичники опущены в брюшную
полость, вследствии чего увеличивается расстояние до наружних половых органов (до
вульвы). На 61-70; 71-80 дни после искусственного осеменения матка сместилась от
места ее расположения на 7,8 - 12,4 см (33,7±05-38,3±0,5 см), в сравнении с топографией
матки бесплодных животных. При проведении замеров на 81-90 дни после осеменения
перемещение матки в брюшную полость у беременных животных (n=24) произошло на
14,1 см (40±0,5см)
Литература
1. Богданов И. И., Богданова М.А., Фомин А. Н., Хлынов Д. Н. Разработка тест-
полосок для экспресс-диагностики беременности и бесплодия коров//Материалы IV
Международной научно-практической конференции /Ульяновск ГСХА им. П.А. Сто-
лыпина, 2012. т. I - С. 168-171
2. Джакупов И.Т., Карабаева Ж.З., Кузербаева А.Т., Жарылгасынов С.С. Некоторые
результаты ранней диагностики беременности и бесплодия у коров и их практическое
значение//Материалы международной научно-практической конференции, посвященной
45-летию ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии «Проблемы и пути развития
ветеринарии высокотехнологичного животноводства»г. Воронеж, 2015.- С.153-156.
3. Братанов К. Теория и практика воспроизведения животных / К. Братанов, X.
Бальбеж, 3. Вежник и др. М.: Колос, 1984. - 272 с.
4. Семиволос, A.M. Радиоэлектронные способы коррекции сократительной функции
матки и диагностики беременности у коров / A.M. Семиволос: Автореф. дис. . докт. вет.
наук. — Воронеж, 1999. — 46 с.
5. Руденко, В.В. Разработка моделей и алгоритмов автоматизированной диагностики
ранних сроков беременности животных // Автореф. дис. . канд. вет. наук. Курск, 2000. - 18
с
6. Дюльгер Г. П., И.В. Огородникова, П.А. ЁлкиН Ультразвуковая диагностика
ранних сроков беременности и бесплодия у коров // Ветеринар. 2003.-№3.-С. 14-17.
Возраст
Беременные животные, дней
Бесплодные
животные
31-40 41-50 51-60 61-70 71-80 81-90
до 3 лет 29,7±1,4 31,8±2,7 33,04±0,5 31,24±1,07 35,2±1,3 39,6±0,7
27,1±0.8
3 - 4 года 30,3±1,1 32,8±1,2 33,3±0,8 34±1,3 38,08±1,01 40±0,9
Свыше
5 лет
27,7±1,2 33,4±0,6
33,9
34,75±2,1 40,3±2,4
43,4
272
7.
Богданова М.А. Разработка технологии изготовления и применения
иммунологического теста для диагностики беременности и бесплодия коров
Автореферат, Ульяновск , 2008 г. – с.21.
8.
Полянцев Н.И., Подберезный В.В. Ветеринарное акушерство и биотехника
репродукции животных. Учеб. пособие для высш. и сред. спец. учеб. заведений по
специальности "Ветеринария". - Ростов н/Д : Феникс, 2001. - 479 с.
УДК 616.98:615.2/3 (574)
Мамашева Р.Т., Бияшев К.Б., Ермагамбетова С.Е.
Казахский национальный аграрный университет
ПОДБОР ШТАММОВ PASTEURELLA ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ
ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ
Аннотация
Был произведен отбор штаммов пастерелл по морфологическим, тинкториальным,
биохимическим, а также вирулентным свойствам, в результате которого были отобраны
Pasteurella multocida 11 и Pasteurella multocida 28, как наиболее перспективные штаммы
для изготовления гипериммунной сыворотки.
Ключевые слова: подбор штамм, антитела, гипериммунная сыворотка, антиген,
изготовление.
Введение
Пастереллез – болезень многих видов сельскохозяйственных и диких животных и
птиц, характеризуется явлениями септицемии и восполительно-геморрагическими
процессами, иногда пастереллез протекает подостро и хронически или в виде вторичной
болезни, осложняя вирусные и бактериальные инфекции. Примером этого является гибель
касписких тюленей 2001, 2007, 2009, 2011 г., гибель сайгаков 2010 – 2011 г.г. в Западно-
Казахстанской области.
Все осложняется тем, что патогенные пастереллы длительное время сохраняются в
организме, а также создают своебразный стационарный эпизоотический очаг.
В настоящее время актуальным направлением является, разработка эффективных
методов лечения с использованием различных препаратов, в том числе гипериммунных
сывороток. Частичного решения этой проблемы можно добиться за счет правильного
выбора штамма пастерелл. Гипериммунные сыворотки содержат антитела, обладающие
строго специфическим действиям на бактериальные токсины, патогенные бактерии или
вирусы, против которых иммунизировали животных. Изготовление лечебно-
профилактических гипериммунных сывороток против пастереллеза представляет
сложный, длительный и многогранный технологический процесс. На получение
высокоактивных лечебно-профилактических и ди-агностических сывороток влияют:
качество применяемых антигенов, в частности их чистота, объем и концентрация;
неспецифические раздражители и адъюванты; индивидуальные особенности животных-
продуцентов, в частности их способность к иммунобиологической перестройке при
создании у них грундиммунитета, для чего необходим тщательный отбор животных-
продуцентов; метод и схемы гипериммунизации; содержание и кормление животных в
период их подготовки к эксплуатации.
С этой целью мы поставили задачу изучить наиболее характерные для этого
микроорганизма биологические, морфологические, тинкториальные, биохимические и
273
вирулентные свойства. По результатам исследования произвели отбор штаммов для
изготовление гипериммунной сыворотки.
Цель работы - подбор культур из эпизоотологических штаммов Pasttereulla и
изготовления гипериммунной сыворотки .
Материалы и методы исследований
Научную работу выполняли в условиях лаборатории противобактериозной
биотехнологии
Казахского
национального
аграрного
университета.
Объектом
исследований являются эпизоотетические штаммы пастерелл выделенные от больных и
павших животных в хозяйствах Алматинской области.
Для исследования в лабораторию направляли трупы мелких животных, от крупных
животных – сердце с перевязанными сосудами, селезенку, печень, почки, экссудат из
грудной полости и трубчатые кости. Кроме того, были взяты смывы из носовой, ротовой
полостей, конъюктивы животных с клиническими признаками пастереллеза.
Посевы из патологического материала делали в МПБ и на МПА или бульон
Хотингера, рН 7,2-7,4, с добавлением нормальной сыворотки крови лошадей. Посев в
пробирки с жидкими и твердыми питательными средами проводили пастеровской
пипеткой. Пробирки с посевами инкубировали при 37 Cº градусов в течение 18-24 часов.
Одновременно с посевами из каждого органа готовились мазки , фиксировали 10-15 мин
смесью равных объемов этилого спирта и эфира, окрашивали по Леффлеру или
Ромоновскому – Гимзе и микроскопировали. Идентификацию выделенных культур
проводили по ферментативным свойствам и подвижности.
Суточную агаровую культуру высевали в среды Гисса с глюкозой, маннитом,
сахарозой, маннозой, в ПМА, молоко, желатин, на кровяной сывороточной МПА или агар.
Биологическое исследование проводили для определения патогенности выделенной
культуры пастерелл и при необходимости с целью обнаружения возбудителя в
патологическом материале. Патогенность культур определяли на белых мышах массой
16-18 грамм.С этой целью двум белым мышам вводили подкожно по 2 см
3
18-24 часовой
бульонной культуры. Культуру считают патогенной, а биопробу положительной при
гибели через 24-72 ч хотя бы одного из зараженных животных и выделении от него
культуры пастерелл. Срок наблюдения за зараженными животными – 7 сут.
Результаты исследований и их обсуждение
За весь процесс бактериологической исследовательской работы были взяты 37 проб
материала, из которых 12 получены от крупно рогатого скота, 13 от лошадей, 9 мелкого
скота, 3 от птиц. В итоге было выделено 21 культура. Из них 4 по морфологическим,
физиолого-биохимическим, антигенным и патогенным свойствам были определены как
Str.Pneumonia, 7- P.multocida, 4 - Salmonella, 4- E.coli, 2- неидентифицированные
культуры.
Культурально-морфологические свойства культур пастерелл, выделенных от
различных видов животных, в основном сходны. В мазках, окрашенных по Граму
бактерии, имели вид мелких грамотрицательных биополярных эллипсовидных палочек,
располагающихся парно. Некоторые культуры имели палочковидную форму.
В мазках, окрашенных по Романовоскому-Гимза, обнаруживали биополярные
палочки с интенсивным окрашиванием полюсов, бактерии имеют заметную капсулу
(Рисунок 1).
274
Рисунок 1. Выделенные культуры пастерелл после окрашивании по методу
Романовскому – Гимза
При росте културы на жидких средах вызывает равномерные помутнение среды и
образует на поверхности пристеночные кольца. Результат посева на среду Гисса показал,
что пастереллы ферментируют с образованием кислоты без газа галактозу, глюкозу,
мальтозу и маннит, не расщепляют лактозу, образовывают индол и не выделяют
сероводород. При посеве на молоко пастереллы растут, не вызывая изменения. Не
разжижали желатин и не обладают гемолитическими свойствами (Таблица 1).
Таблица 1 - Биохимические свойства культур пастерелл, выделенных из
патологического материала
Тесты
Номера культуры пастерелл
6 9 11 21 28 29 26
Ксилоза - - - - - - -
Глюкоза + + + + + + +
Галактоза + + + + + + +
Мальтоза + ± ± ± ± ± ±
Лактоза - - - - - - -
Сахароза + + + + + + +
Маннит ± + ± ± + ± +
Сорбит +
± + ± + + +
Дульцит - - - - - - -
Индол + + + + + + +
H
2
S - - - - - - -
Гемолитические
свойтва
- - - - - - -
Восстановление
нитритов
+ + + + + + +
Каталаза + + + + + + +
Подвижность
- - - - - - -
Разжижение
желатина
- - - - - - -
Свертывание
молока
- - - - - - -
275
Патогенные свойства возбудителя определяли путем постановки биопробы на белых
мышах. Результаты иследования представлены в таблице 3.
Таблица 2 – Вирулентные свойства пастерелл, выделенных из патологического
материала.
Културы
пастерелл
Количество
лабораторных
животных
Доза
введение
(КОЕ)
Метод
введение
Результаты
Пало Выжило % падежа
Pastеurella
multocida 6
10
10
30
50
в/брюш. 8
9
10
2
1
-
80
90
100
Pastеurella
multocida 9
10
10
30
50
в/брюш. 5
7
10
5
3
-
50
70
100
Pastеurella
multocida 11
10
10
30
50
в/брюш. 7
10
10
3
-
-
70
100
100
Pastеurella
multocida 21
10
10
30
50
в/брюш. 8
5
9
2
5
1
80
50
90
Pastеurella
multocida 28
10
10
30
50
в/брюш. 8
10
10
2
-
-
80
100
100
Pastеurella
multocida 29
10
10
30
50
в/брюш. 5
6
9
5
4
1
50
50
90
Pastеurella
multocida 26
10
10
30
50
в/брюш. 7
5
9
3
5
1
70
50
90
Как видно из таблицы 2 на 3-4 сутки наблюдалась гибель белых мышей. При при
патологоанатомическом исследовании было обнаружено характерный для пастереллеза
признак – воспалительный очаг на месте инъекции, отечность, кровоизлияние на эпикарде
и паренхиматозных органах.
Выводы
В результате исследований из 21 культур, выделенных от животных и птиц, по
особенностям культуральных, морфологических, биохимических и биологических свойств
7 культур отнесли к виду Pasteurella multocida. Для изготовления гипериммунной
сыворотки рекомендованно использовать изоляты Pasteurella multocida 11 и Pasteurella
multocida 28, которые наиболее широко рспросранены среди сельскохозяйственных
животных, а также обладают стабильными биологическими свойствами.
Литература
1. Ермагамбетова С.Е. Комплексная иммунопрафилактика пастереллеза-Алматы,
2012г.
2. Авилов В.С. Антителообразование при иммунизации животных,-1981.
3. Суптницкий М.В. Анитела в инфекционных и эпидемических процесах,-
2013»Новости медицины и фармации.
276
4. Рустамов Ю.М. Антигенные, вирулентные и иммуноферментные свойства
P.multocida различных серологических вариантов. Дис. канд. н. Москва 1993.
5. Баянтасова С.М. Эффективность гипериммунной сыворотки против желудочно-
кишечных заболеваний телят и ягнят. Автореферат. Алматы, 2010 г.
Мамашева Р.Т., Бияшев К.Б., Ермагамбетова С.Е.
АНТИДЕНЕ ДАЙЫНДАУ МАҚСАТЫНДА РASTEREULLA ШТАМДАРЫН ТАҢДАУ
Морфологиялық, тинкториялдық, биохимиялық жəне зардаптылық қасиеттері
бойынша пастерелла штамдарын таңдап алу жұмыстарын жүргіздік. Нəтижесінде,
Pasteurella multocida и 11 Pasteurella multocida 28 штамдары антидене дайындауға қолайлы
болып табылды.
Кілт сөздер: штамдарды таңдау, антиденелер, гипериммунды қан сарысуы, антиген,
даярлау.
Mamasheva R.T., Biyashev K.B., Yermagambetova S.E.
SELECTION OF STRAINS PASTEURELLA FOR THE PRODUCTION
OF HYPERIMMUNE SERUM
Were investigated on strains of Pasteurella morphological, tinctorial, biological, and
virulent, properties. Resulting in the were results selected Pasteurella multocida 16 and
Pasteurella multocida 28 as the most promising strains for the production of hyperimmune
serum.
Key words: selection of strains, antibodies, antigen.
УДК 616.98.617.2/4
Санбаев Б.Ж., Ермагамбетова С.Е., Киркимбаева Ж.С.
Казахский национальныйаграрныйуниверситет
БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА КЛОСТРИДИЙ ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ ЖИВОТНЫХ В
ХОЗЯЙСТВАХ АЛМАТИНСКОЙ ОБЛАСТИ
Аннотация
В статье приведены данные о результатах исследования биологических свойств
клостридий, выделенных от животных. Определение биологических свойств,
культивирование клостридий, определение ферментативных свойств клостридий.
Ключевые слова: вирулентность, энтеротоксимия, патогенность, ферментативные
свойства, культивирование.
Введение
Животноводство - основная отрасль сельскохозяйственного производства,
обеспечивающая население столь необходимой продукцией как мясо и молоко.
Животноводство страдает от высокого отхода животных, в том числе от инфекционных
болезней. Экономический ущерб от болезней сельскохозяйственных животных является
огромным и достигает миллионов тенге по стране [1].
277
Животноводство в республике Казахстан несет существенный урон от дизентерии ягнят,
брадзота и энтеротоксемии, а также эмфизематозного карбункула поражающего крупный
рогатый скот. Не обходит стороной животных всех видов заболевания злокачественный
отек, некробациллез, столбняк, ботулизм [2].
Род Clostridium включает более 100 видов. В этот род объединены патогенные и
сапрофитные анаэробные спорообразующие палочковидные микроорганизмы, за
исключением нескольких сульфатредуцирующих пигментообразующих видов. Родовое
название дано на основании сходства этих микроорганизмов с веретеном (closter — лат.,
маленькое веретено), которое они приобретают в результате раздувания бактериальных
клеток крупными спорами, располагающимися в центре или ближе к одному концу[3].
Факторами патогенности клостридии являются инвазивность и токсигенность.
Инвазивность лидирует в локальных поражениях тканей и обусловлена действием
ферментов. Экзотоксины вызывают более широкие системные поражения организма и
служат основными факторами патогенности клостридии. У некоторых клостридии,
токсигенность которых невысока (С. chauvoei, С. septicum), факторами патогенности,
очевидно, являются жгутики, обеспечивающие подвижность, адгезию и гемагглюти-
нацию. У клостридии в целом не обнаружены факторы, вызывающие привыкание к
антибактериальным препаратам, о чем говорит опыт многолетнего использования
антибиотиков в терапии вызываемых ими болезней [4].
Цель- Изучить биологические свойства клостридий выделенных от животных в
хозяйствах Алматинской области
Материалы и методы исследований
Исследования проводились на кафедре «Биологической безопасности», в
лаборатории противобактериозной биотехнологии КазНАУ и в хозяствах Алматинской
области.
Объектом исследований были эпизоотические штаммы клостридий выделенные от
больных и павших животных в хозяйствах Алматинской области.
Отбор проб для бактериологического исследования: печень, селезенка, почки, кровь
из сердца, участок тонкого отдела кишечника с содержимым проводились согласно по
ГОСТ 26503-85 «Методы
лабораторной
диагностики
клостридиозов».
Для
идентикфикации микроорганимов были использованы следущие среды:Китта-Тароцци,
Вильсона-Блера; МПА, МПБ, МППА с добавлением 10% крови барана и 0,5% глюкозы
для создания анаэробиоза были использованы газогенераторные пакеты. Тинкториальные
свойства и морфология изолятов были изучены микроскопически при окраске по Граму, с
помощью микроскопа типа LOMO.
Результаты исследований и их обсуждение
Из патологического материала нами были выделены 19 культур С. perfringens. В
результате выявления типовой принадлежности, 19 выделенных культур С. perfringens в
реакции нейтрализации токсинов установлено, что 12 из них отнесены к типу А, две - к
типу С и одна - к типу Д. Четыре культуры С. perfringens не удалось типировать. В
дальнейшем проводили изучение биологических свойств 12 культур С. perfringens
отнесенных к типу А. Культурально-морфологические свойства С. perfringens тип А
изучали на среде КиттаТароцци и глюкозо-кровяном агаре. При культивировании на среде
Китта-Тароцци через 3-6 часов наблюдали обильное помутнение среды и сильное
газообразование. На глюкозо-кровяном агаре все культуры С. perfringens тип А
образовывали крупные гладкие, выпуклые колонии, окруженные одной или двумя зонами
непрозрачного гемолиза. Из культур, выросших на среде Китта-Тароцци и глюкозо-
кровяном агаре, делали мазки и окрашивали их по Граму. При микроскопировании в
мазках наблюдали крупные длинные и короткие грамположительные палочки с
закругленными концами, некоторые палочки имели овальные споры, расположенные
центрально или субтерминально.Основные биохимические свойства изучаемых культур
278
С. perfringens тип А оценивали по способности сбраживать углеводы, свертывать молоко,
разжижать желатин, образовывать индол.
Таблица -1 - Биохимические свойства культур С. perfringens тип А
№
С. Perfringens тип А биохимичесие свойства
1
Глюкоза
+
2
Лактоза
+
3
Сахароза
+
4
Раффиноза
+
5
Манит
-
6
Арабиноза
-
7
Рамноза
-
8
Индол
-
9
Молоко
+
10
Желатин
+
Как видно из таблицы 1, все изучаемые культуры С. perfringens тип А обладали
выраженными сахоролитическими свойствами и сбраживали с образованием кислоты и
газа глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, раффинозу, не ферментировали манит,
арабинозу, рамнозу и дульцит, а также свертывали и пептонизировали молоко,
расплавляли желатину и не образовывали индол.
Патогенные свойства культур С. perfringens тип А изучали на морских свинках
массой 300-350 г. Для этого суточную культуру, выращенную на среде Китта-Тароцци,
вводили подкожно в области брюшной стенки двум морским свинкам в дозе 1,0 мл. За
животными
устанавливали
наблюдение,
павших
вскрывали,
отмечали
патологоанатомическую картину и делали высевы на питательные среды. Все 24 морские
свинки, зараженные культурами С. perfringens тип А, погибали в течение 24-48 часов.
Патологоанатомическая картина в местах инъекции культуры С. perfringens тип А была
характерной: кожа отслоилась от мускулатуры газами. Мышцы были серого цвета
имеливид «вареного мяса». Кишечник был наполнен газами, кровеносные сосуды
инъецированы. В брюшной полости имелось незначительное количество транссудата.
Паренхиматозные органы без видимых изменений. В мазках из мышц пораженной
области,
окрашенных
по
Граму,
было
обнаружено
большое
количество
грамположительных толстых коротких палочек. При посевах на среду Китта-Тароцци и
глюкозо-кровяной агар наблюдали характерный для С. perfringens тип А рост. Таким
образом, при изучении биологических свойств 12 культур С. perfringens тип А,
выделенных из пораженных органов животных нами установлено, что все они обладали
протеолитическими, токсическими и патогенными свойствами и имеют определенное
значение в этиологии и патогенезе клостридиоза животных.
Достарыңызбен бөлісу: |