Репликация днк: учебное пособие
Биохимические свойства белков
жүктеу/скачать 2,57 Mb. Pdf көрінісі
|
Спивак И.М. - Репликация ДНК учебное пособие - 2011
|
9.7. Биохимические свойства белков гомологической рекомбинации Наиболее важный белок Rad52 образует мультимерные (гексамерные) кольца, которые одновременно связывают концы и ведут отжиг. У человеческого Rad52 те же свойства. Rad52 связывается с Rad51, способствуя обмену нитей. Rad52 также связывается с RPA, необхо- димого для репликации ДНК. Интересно, что есть специальные мутации большой субъеди- ницы этого комплекса, которые подавляет и генную конверсию и отжиг нитей, но не влияют на репликацию. Rad51 и Rad52 белки взаимодействуют с множеством других белков Rad54, гетероди- мером Rad55\Rad57. Ни один из этих белков не участвует в негомологическом воссоедине- нии концов. Любые стандартные опыты по изучению RecA/Rad51 опосредованного обмена нитей ДНК связаны с введением двунитевого фрагмента ДНК к однонитевому ДНК кольцу, покры- тому белком Rad51. В различных комбинациях с другими белками Rad51 проводит обмен нитей in vitro. Разумеется, у двунитевой и однонитевой ДНК есть некоторая достаточная гомология. Схема подобного опыта представлена на рис. 41. Рис. 41. Схема реконструкции процесса рекомбинации in vitro In vitro, и человеческий и дрожжевой Rad51 образуют на однонитевой ДНК филамент, который может взаимодействовать с гомологической двунитевой ДНК. Этот филамент рас- тягивает двунитевую ДНК на 50 % – то есть как бы удлиняет ее, причем может быть орга- низовано два различных вытянутых состояния в зависимости от связывания с дезоксирибо- зой. Смена этих двух вытянутых состояний может, вероятно, быть двигателем обмена нитей, связанного с перемещениями Rad51 внутри филамента. И. М. Спивак. «Репликация ДНК: учебное пособие» 131 9.8. Наблюдение рекомбинации in vivo Образование фокусов Rad51 во время мейоза. Это, вероятно, места рекомбинации. Делеции Rad52, Rad55, Rad57 предотвращают их образование как при нормальном мейозе, так и после γ-облучения. Анализ температур-чувствительных мутантов ДНК-полимераз и факторов PCNA и RFC показывает, что они тоже необходимы для рекомбинации. Также оказалось, что для репарации DSBs совершенно необходима ДНК-полимераза-α-праймаза, то есть нормальный синтез ДНК на обеих нитях. Изучение рекомбинации безусловно будет продолжаться и принесет свои плоды (например, как останавливать опухолевые клетки, делящиеся без активации теломеразы). |