С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров
жүктеу/скачать 2,61 Mb. Pdf көрінісі
|
Глава 9.КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ИЗОЛИРОВАННЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ 103 9.3 Питательные среды для культивирования клеток животных Клетки после извлечения их из ткани или организма помещают в культуральную среду, которая должна обеспечивать все внешние условия, которые клетки имели in vivo. Среда обеспечивает выживание клеток, их пролиферацию и дифференциацию. Питательная среда представляет собой раствор определенного состава, к которому добавляются компоненты биологического происхождения. Ключевым компонентом может являться сыворотка животных, например, эмбриональная бычья (телячья) сыворотка. Без такой добавки наибольшая часть культивируемых клеток не будет воспроизводить собственную ДНК и, следовательно, не будет пролиферировать. Также к таким добавкам относят: белки, незаменимые аминокислоты, незаменимые жирные кислоты, витамины, источники углерода (глюкоза 5,5 ммоль/л), предшественники простагландинов. Добавляют макроэлементы (натрия, калия и кальция хлориды), микроэлементы (ионы железа, меди, кобальта, цинка, селена). Жидкие питательные среды, как правило, готовят на основе солевых растворов Эрла и Хенкса. Основные требования к питательным средам: стерильность; определенное осмотическое давление; определенный рН (регулируют путем добавления буферных растворов). Осмотическое давление выражают в осмотической концентрации – концентрации всех растворенных частиц. Может выражаться как осмолярность (осмоль на литр раствора) и как осмоляльность (осмоль на килограмм растворителя). Осмоль – единица осмотической концентрации, равная осмолярности, получаемой при растворении в одном литре растворителя одного моля неэлектролита. Соответственно, раствор неэлектролита с концентрацией 1 моль/л имеет осмолярность 1 осмоль/л. Осмолярность (Osm) электролита зависит от его концентрации, коэффициента диссоциациии числа ионов, на которые он диссоциирует: Osm=n×Ф×С ; где Φ – коэффициент диссоциации, принимает значения от 0 (для неэлектролита) до 1 (полная диссоциация), n– количество ионов, на которые диссоциирует молекула (например, для NaCl n=2, для H 2 SO 4 n=3), |