С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров
жүктеу/скачать 2,61 Mb. Pdf көрінісі
|
Глава 14. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК 161 является обязательным компонентом среды при индуцировании органогенеза. В состав питательных сред обязательно входят витамины, как стимуляторы роста культур. Чаще всего используют тиамин (B 1 ), пиридоксин (В 6 ) и никотиновую кислоту. Необходимость их внесения в среду объясняется тем, что они входят в состав ферментов, катализирующих реакции, важные для жизнедеятельности клетки. Витамины вносят в среду в концентрациях от 0,1 до 10 мг/л. Среди факторов, оказывающих положительное влияние на биосинтез вторичных веществ, можно выделить некоторых предшественников самих искомых соединений. Предполагают, что при продолжительном культивировании тканей в ограниченном объеме питательной среды происходит снижение способности клеток синтезировать органические вещества, а добавление в среду предшественников вторичных соединений повышает синтез биологически активных веществ. В качестве предшественников используют аминокислоты (глутамат, фенилаланин, лейцин, орнитин и др.). Однако не всегда каллусные ткани используют их. Возможно, имеет значение время внесения предшественника в питательную среду. Отсутствие желаемого эффекта от внесения в питательную среду предшественников можно объяснить разными причинами: либо клетки их не поглощают, а синтезируют сами, либо они распадаются в процессе приготовления и стерилизации среды или переходят в другие физиологически неактивные формы. Не исключено, что предшественники могут ингибировать рост культуры. Для выяснения роли предшественников необходимы более тщательные исследования с применением радиоактивных меток. Главным препятствием в этих работах является недостаточное знание путей биосинтеза многих продуктов вторичного метаболизма. Для приготовления твердых питательных сред используют агар-агар. Это полисахарид, получаемый из морских водорослей и изготавливаемый в виде пластин, зерен, порошка желтовато-белого, сероватого цвета. Агар- агар образует с водой гель, плавящийся при 100°С и застывающий при 45ºС. Агар-агар теряет способность образовывать гель в кислой среде. В составе агара были обнаружены витамины и другие факторы роста. Агар- агар добавляют в питательные среды в концентрации 0,5–1,0%. Важным параметром для успешного выращивания культур клеток является значение рН питательной среды. От величины рН зависит активность белков, устойчивость и степень усвоения компонентов среды |