С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров



Pdf көрінісі
бет311/375
Дата31.12.2021
өлшемі2,61 Mb.
#21760
1   ...   307   308   309   310   311   312   313   314   ...   375
Байланысты:
Farmatsevticheskaia biotekhnologiia Moiseev-DV 2020


Глава  20.  ТЕХНОЛОГИЯ  ПОЛУЧЕНИЯ  И  СТАНДАРТИЗАЦИЯ 
ТРОМБОЛИТИКОВ И АНТИКОАГУЛЯНТОВ  
 
247 
 
течение 60 мин.  
Применение 
рекомбинантной 
проурокиназы 
сопровождается 
реканализацией  сосуда,  но  вызывает  геморрагические  осложнения. 
Рекомбинантную 
проурокиназу 
применяют 
интраартериально, 
в 
сопровождении низких доз внутривенно вводимого гепарина. 
Тромболитики  III–V  поколений  пока  проходят  доклинические  и 
клинические испытания. 
 
 
20.2 Получение и стандартизация тромболитиков 
 
Получение t-PA (тканевого активатора плазминогена). Содержание 
данного  вещества  варьирует  в  широких  диапазонах  в  различных  тканях. 
Вещество, полученное из матки человека, имеет молекулярную массу (ММ) 
69000  и  состоит  из  двух  разных  по  размеру  полипептидных  цепей,  а 
полученное из сосудов человека – ММ 60000 и состоит из двух одинаковых 
по  размеру  цепей.  Могут  существовать  и  одноцепочечные  формы. 
Активирует  превращение  плазминогена  в  плазмин  (протеолитический 
фермент), который вызывает лизис тромба. 
Источник  получения  mt-PA  (меланомный  активатор)  –  клетки 
меланомы человека. ММ такого полипептида составляет 72000. Могут быть 
получены одно- и двуцепочечные формы. Клетки меланомы культивируют 
на  среде  Игла  с  добавками  натрия  гидрокарбоната,  L-глютамина  и 
инактивированной  нагреванием  телячьей  сыворотки.  Культивируют  в 
монослое.  Очистку  проводят  аффинной  хроматографией.  Сорбенты: 
конканавалин А, п-аминобензамидин, имидинодиуксусная кислота, борная 
кислота, лизин (5 сорбентов). 
Имеется  рекомбинантная  технология  получения  (rt-PA  – 
рекомбинантный активатор). Используют рекомбинантные штаммы E. coli
Saccharomyces cerevisiae. Ген t-PA локализован в 8-й хромосоме человека. 
Индуцируют синтез t-PA культурой меланомы, выделяют мРНК, на основе 
которой  получают  кДНК.  кДНК  лигируют  с  плазмидой  рBR322. 
Полученную рекомбинантную ДНК трансформируют в E. coli и определяют 
полученные трансформанты. 
Культивирование  рекомбинантного  штамма  E. coli осуществляют  в 
стандартных  условиях  (L-бульон,  30ºС,  рН=7,0–7,2,  перемешивание, 
аэрация). 
Биомассу 
отделяют 
от 
культуральной 
жидкости 
центрифугированием,  затем  ресуспензируют  в  буферном  растворе  и 



Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   307   308   309   310   311   312   313   314   ...   375




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет