С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров

Часть 2. Частные вопросы биотехнологии. Клеточная биотехнология 
 
 
140
 
 
За  3–10  дней  до  инокуляции  гибридом  мышам  внутрибрюшинно 
вводят  0,5  мл  вазелинового  масла  для  индукции  роста  гибридом  в 
асцитной  среде.  10
7
  клеток  гибридом  ICO-90  внутрибрюшинно  вводят. 
Через 7–8 дней собирают асцитную жидкость. Центрифугируют ее при 4ºС 
в  течение  20  мин  при  2500g.  В  надосадочной  жидкости  содержатся 
моноклональные  антитела  в  наибольшей  концентрации.  Эту  жидкость 
хранят при – 50ºС. 
8. Выделение и очистка моноклональных антител 
Выделяют  путем  аффинной  хроматографии  на  А-сефарозе. 
Асцитную  или  культуральную  жидкость  диализуют  против  фосфатного 
буфера с рН 8,0 при 4ºС в течение 12–16 ч. Диализат наносят на колонку, 
уравновешенную  этим  же  буфером  и  промывают  до  отсутствия  белка. 
Моноклональные  антитела,  связавшиеся  с  сорбентом,  элюируют 
цитратным  буфером  с  рН  3,0.  Полученный  элюат  концентрируют 
ультрафильтрацией. 
Количественное  определение  моноклональных  антител  проводят 
подходящим  иммунохимическим  методом.  Контролируются  также 
остаточные и посторонние белки методом ВЭЖХ. 
 
 

жүктеу/скачать 2,61 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: