Высшее образование
жүктеу/скачать 5 Mb.
|
| А — двойная спираль ДНК; Б — присоединение к двойной спирали белка rec BCD с последующим его перемещением; В — возникновение разрыва в сайте узнавания; Г — образование одноцепочечного участка «ус»
+ В процессе общей генетической рекомбинации центральная роль отводится комплементарным взаимодействиям нуклеотид- ных последовательностей. Кроме того, этот процесс требует участия особого белка гесА с Mr, равной 38 кДа. Белок гесА прочно связывается в виде крупных кластеров с одиночными цепями ДНК, одновременно удерживая и двойную спираль. За счет двух сайтов данный белок имеет еще один участок — для связывания и гидролиза АТР, т.е. он представляет собой ДНК-зависимую АТРазу. Благодаря особенностям белка гесА осуществляются од-L Обмен между цепями Высвобождение одной из цепей Разрыв ноцепочечный обмен между двумя двойными спиралями (рис. 5. с удалением некоторого количества нуклеотидов и локальный ре синтез ДНК. Разрыв в одной из цепей ДНК высвобождает эту цепь, и он внедряется во вторую спираль, образуя короткий спаренный учас ток. После начального обмена tomi логичные нуклеотидные последовг тельности двух взаимодействующв спиралей устанавливаются в строго соответствии одна с другой, в связс с чем происходит расширение обл? сти спаривания и быстрый обме между спиралями. Для этого процеа, разные организмы используют нес динаковые механизмы, большинств из которых включает в качестве прс межуточного этапа обмен с перекр. щиванием цепей между двумя сш ралями ДНК (рис. 5.7). Структура, образующаяся при оР мене с перекрещиванием цепей, сС держит две перекрещенные и две н перекрещенные цепи. Она способ? : существовать в различных изомернР
Разрыв цепи и обмен Разрыв цепи и обмен ♦ Сшивание разорванных цепей Равноценные структуры Рис. 5.7. Схема образования структуры с перекрещиванием цепей между двумя спиралями ДНК формах. Изомеризация меняет пол| жение двух пар цепей: две ранее п! рекрещивающиеся цепи становяТ( неперекрещивающимися и наобор<1 Для того чтобы восстановили^ две отдельные спирали ДНК и flj самым прекратился процесс спар вания, в каждой из двух перекрещён ных цепей должен произойти разр! (рис. 5.8) . AT Г Ц AATT ЦАГТЦ ТАЦГ ТТААГТЦАГ АТГЦ-ААТТ-ЦАГТЦ ТАЦГ-ТТАА-ГТЦАГ -АТГЦААТТ ЦТГАГАТЦЦА ТАЦГ ТАЦГ ТТААГАЦТЦТ АГГТАТГЦ ТАЦГЦЦЦ Г Г ГЦА T Г .ААТТ^ЦАТГТАТГГТГГЦТТТЦТГТАА ГТАЦАТАЦЦАЦЦГАААГАЦАТТЦТАГ'^ Один из важных этапов конструирования молекулы ДНК дотирование (или сшивание) генов с помощью фермента ДНК лигазы. Сшивание фрагментов ДНК, содержащих нужные гень осуществляют двумя основными методами: а) по «липким» кой* нам; б) с помощью искусственно достроенных «липких» концов Сшивание генов (фрагментов) ДНК по «липким» концам, т.1 взаимнокомплементарным участкам, длиной из 4—6 пар нукле< тидов, достаточно легко осуществляется ферментом ДНК-лиг^ зой с образованием ковалентной фосфодиэфирной связи меж!| соседними нуклеотидами: |