"фараби əлемі" атты халықаралық ғылыми конференция материалдары
КЛОНИРОВАНИЕ кДНК ГЕНА ПОЛИ(АДФ-РИБОЗА) ПОЛИМЕРАЗЫ 2
жүктеу/скачать 2,79 Mb. Pdf көрінісі
|
| КЛОНИРОВАНИЕ кДНК ГЕНА ПОЛИ(АДФ-РИБОЗА) ПОЛИМЕРАЗЫ 2
ARABIDOPSIS THALIANA В E. CОLI И ХАРАКТЕРИСТИКА АВТО-ПОЛИ(АДФ- РИБОЗИЛ)ИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА Қуанбай Ə.Қ., Алияскарова У.С., Рахматуллаева Г.Т., Тайпақова С.М. НИИ проблем биологии и биотехнологии Казахский Национальный университет имени аль-Фараби kuanbai.aigerim93@gmail.com Поли(АДФ-рибоза) полимераза (PARP) катализирует синтез полимеров АДФ-рибозы ковалентно-прикрепленные к акцепторным белкам. При этом донором остатков АДФ-рибозы выступает НАД + . PARP белки могут оказывать значительное влияние на различные клеточные процессы, такие как транскрипция, деление клеток, репарация ДНК и целостность теломеров. Геном Arabidopsis thaliana, широко используемого модельного растительного организма, кодирует по меньшей мере три предполагаемых PARP фермента: АtPARP1, AtPARP2 и AtPARP3. Высокая степень консервативности на уровне аминокислотной последовательности между ферментами арабидопсиса и млекопитающих позволяет предположить, что в растениях PARP выполняет аналогичные функции как в животных системах. В отличие от млекопитающих, значительно мало известно о поли-АДФ-рибозилировании в растениях. Практически не известно о акцепторных белках поли-ADP-рибозы и белках, взаимодействующих с ADP-рибозой. В растениях не обнаружены PARилированные белки, кроме гистонов и PARP. Идентификация новых акцепторных белков поможет понять регуляторную функцию PARилирования в развитии растений и стрессовых реакциях. Нами был выделен кДНК ген atparp2 с применением реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции. Осуществлена функциональная экспрессия atPARP2 гистидиновым концом в E. cоli и очищена никель аффинной хроматографией до гомогенного состояния. С помощью MALDI-TОF масс-спектрометрии установлено принадлежность рекомбинантного белка к семейству поли(АДФ-рибоза)-полимераз. Выявлен, что продуктом экспрессии гена является глобулярный белок массой 72,2 кДа, состоящий из 637 аминокислот (pI5,92). С применением очищенных рекомбинантных белков atPARP2 были получены поликлональные антитела анти- atPARP2. Автомодифицирующию активность atPARP2 определяли с использованием олигонуклеотидного дуплекса, содержащий разрыв цепи для активации процесса поли-АДФ- рибозилирования в присутствии НАД. В результате анализа продуктов реакции методом Вестерн- блоттинга с анти-PAR антителами мы показали что аtPARP2 в присутствии активирующей ДНК может катализировать реакцию авто-поли-АДФ-рибозилирования путем многократного переноса ADP-рибозных групп из NAD+ на себя. В присутствие ингибитора PARP 3-AB АДФ-рибозилирование аtPARP2 значительно блокируется. Необходимо отметить, хроматографически очищенный аtPARP2 частично АДФ- рибозилирован как в присутствии, так и в отсутствии активирующей ДНК и 3-AB, так как распознается анти-PAR антителами. 158 Можно предположить, что очищенные аtPARP2 авто-АДФ-рибозилированы до хроматографической очистки, т.е. во время экспрессии в E. cоli. Научный руководитель: д.б.н., профессор, академик НАН РК Бисенбаев А.К. жүктеу/скачать 2,79 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|