Ақуыздар. Ақуызды тазалау әдістері Хамидов Султанбек
Ақуызды тазалау әдістері Белокты фракциондау және тазалау
жүктеу/скачать 39,5 Kb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Ақуызды тазалау әдістері Белокты фракциондау және тазалау
Ақуызды тазалау әдістері Белокты фракциондау және тазалауСефадексті колонкадағы Гель-хроматография (схема). Крестері бар үлкен ашық кружкалар-сефадекс дәндері; шағын қара және қызыл кружкалар мен үшбұрыштар-әртүрлі молекулалық массасы бар белоктар; а - жұмыстың басындағы колонка; Б, В, Г - уақыттың әр түрлі кезеңдеріндегі колонка. Элюция графигінде ақуыз компоненттерінің бөлінуі анық көрінеді. Ақуызды тазалау әдістері Белокты фракциондау және тазалауЭлектрофорез. Нобель сыйлығының лауреаты А. Тизелиус әзірлеген еркін электрофорез әдісі рН және ерітіндінің иондық күшінің белгілі мәндері кезінде белок зарядының шамасымен анықталатын электр өрісіндегі белоктардың қозғалыс жылдамдығының (қозғалысының) айырмашылықтарына негізделген. Соңғы уақытта әртүрлі тасымалдаушыларда, атап айтқанда қатты демеуші ортада: крахмал және полиакриламид гельдерінде, целлюлозада белоктардың аймақтық электрофорез әдістері кеңінен таралған. Олардың еркін электрофорез әдісімен салыстырғанда артықшылықтары диффузия мен конвекция нәтижесінде белок-еріткіштің шектерін шайып кетуден тұрады, шекараның орналасуын анықтау үшін күрделі аппаратураны ретке келтіру қажет емес, ал талдау үшін ақуыздың аз мөлшері қажет (бұл әдістер мен тиісті аппаратуралар Биохимия бойынша практикалық нұсқаулықтарда егжей-тегжейлі қаралады). Ақуызды тазалау әдістері Белокты фракциондау және тазалауАқуыздарды фракциялаудың ең көп таралған әдістерінің бірі (гомогендікті бағалау әдісі сияқты) полиакриламидті гельдегі диск-электрофорез (ағылшын тілінен discontinuous – үзік, перемежающийся) болып табылады. Гель-электрофорездің жоғары рұқсат ету қабілетін атап өткен жөн. Егер ақуыздарды электрофорезде адамның қанын қағазда 6 фракция ашылса, онда электролизде крахмалдық гелде – 10, ал полиакрил-амидтік гелде – 18 түрлі ақуыз фракциясына дейін ашылады. Ақуызды тазалау әдістері Белокты фракциондау және тазалауГельдерде электрофорез кезінде ақуыздарды анықтау үшін оларды мынадай бояғыштардың бірімен өңдейді: бромфенол көк, амидо қара 10В, қышқыл көк 83, кумасси Гауһар Көк R-250 және т.б. бояудың қарқындылығы және тиісінше әрбір ақуыз фракциясының салыстырмалы құрамын денситометрде тікелей сканерлеу арқылы анықтайды. Соңғы жылдары гель концентрациясының градиенті бар ақуыздарды электрофорездеу әдістерін қолдана бастады, бұл рұқсат ету қабілетін едәуір арттырады, әсіресе молекулалық салмағы 50000– 100000 асатын ақуыздарды фракциялау кезінде. жүктеу/скачать 39,5 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|