162
ПТР – өте сезімтал əдіс, өйткені зерттелетін үлгіге аз мөлшерде
кездейсоқ басқа реакциялық қоспадан бөтен ДНҚ түсіп кетсе, жалған
нəтиже алынады. Сондықтан барлық қолданылатын ерітінділер мен
ыдыстар таза, залалсыз болуы керек.
Артықшылықтарымен қоса, ПТР əдісінің кейбір кемшіліктері де
бар.
Tag-полимераза синтезін
in vitro да жүргізе отырып, бір кезеңде
1,1 × 10
-5
жиілікте комплементарлы емес нуклеотидті кірістіріп не-
месе қосып жіберуі мүмкін. Қатесі бар тізбектер экспоненциалды
тəуелділікпен көбейтiледі. Нəтижесінде, ПТР-дің 30 кезеңінен соң
көбейтiлген ДНҚ-да 0,25% қателік болады.
Əр
ДНҚ-полимераза ПТР-ді əртүрлі тиімділікпен жүргізіледі. Мыса-
лы, Т
4
фагының ДНҚ-pol көмегімен көбейту жүргізілгенде, көбейтiлген
ДНҚ-ның бөлік 250 н.ж.-тен артық болса, ол баяу синтезделеді. Ал Tag-
ДНҚ-pol мен Т
7
фагының ДНҚ-pol-сы ұзындығы 2000 н.ж. фрагментті
бұдан да жылдам синтездей алады.
ПТР-ді қолданып жұмыс жасай келе, бір пробиркада бірден бірнеше
əртүрлі генетикалық локусты көбейту идеясы туды. Бұл жағдайда
праймерлер саны бір жұп праймерден көп болады. Мұндай реакция
Достарыңызбен бөлісу: