Кумарины и хромоны. Дубильные вещества. Особенности химической структуры, классификация, физико-химические свойства, пути использования
жүктеу/скачать 0,72 Mb.
|
Лекция 3
| Выделение кумаринов из растительного сырья. Для выделения из растительного сырья кумаринов разного строения и свойств применяются органические растворители: этиловый спирт, метиловый спирт, хлороформ, метиленхлорид, диэтиловый эфир, петролейный эфир. Агликоны из смеси возможно отделить с помощью неполярных растворителей (хлороформ, бензол, различные эфиры).
Наиболее исчерпывающая экстракция кумаринов как свободных, так и гликозидов достигается этиловым спиртом. Получаемый после отгонки спирта густой экстракт последовательно обрабатывается хлороформом, этиловым эфиром и др. В некоторых случаях растительный материал предварительно обрабатывают петролейным эфиром. А затем обрабатывают хлороформом, этиловым, метиловым спиртом. Часто сырье предварительно очищают от липофильных веществ эфиром, а затем кумарины экстрагируют хлороформом. Кумарины как малополярные ненасыщенные соединения хорошо сорбируются гидрофильными сорбентами. Поэтому алюминия оксид, силикагель, реже полиамид и сефадексы также используется для очистки и разделения смеси кумаринов на отдельные компоненты. С целью отделения кумаринов от сопутствующих веществ часто сконцентрированный экстракт из растительного сырья обрабатывают 0,5 %-ным водным раствором КОН для удаления кислых и фенольных компонентов. Затем экстракт обрабатывается 5 %-ным водно-спиртовым раствором КОН в течение 1/2—1 ч. При этом кумарины образуют соли кумариновых кислот. Одновременно происходят и другие реакции: гидролиз жиров и других сложных эфиров. Индифферентные составные части экстракта (стерины, спирты, углеводороды и др.) удаляются обработкой этиловым эфиром щелочного раствора, разбавленного предварительно 6-8 кратным количеством воды. Водно-щелочной раствор подкисляется разбавленной НСl. При этом освобождаются органические кислоты, а присутствующие кумариновые кислоты переходят с отщеплением элементов воды в кумарины. Смесь кислот и кумаринов извлекается этиловым эфиром, многократно повторяя. Кислые составные части из лактонной фракции можно удалить добавлением по каплям 0,5 %-ной водной щелочи в раствор. Кислые составные части переходят в щелочной раствор, в то время как нейтральные кумарины как более устойчивые по отношению к щелочному раствору остаются в этиловом эфире. При описанном методе выделения кумаринов трудно избежать некоторого расщепления кумаринов. Поэтому как для очистки кумаринов от сопутствующих веществ, так и для выделения индивидуальных соединений широко используются хроматографические методы. В качестве сорбента при хроматографировании кумаринов используются оксид алюминия и силикагель. Кумарины хорошо элюируются с хроматографической колонки смесью петролейного эфира с хлороформом, бензолом, смесью бензола с этилацетатом, смесью бензола с метиловым спиртом (в различных соотношениях) и др. Эфирные масла, стероиды, глицериды, и тритерпены обычно появляются в первых фракциях, затем следуют кумарины. Кумарины на хроматографической колонке и в элюатах обнаруживаются по флуоресценции в УФ свете. Методы бумажной и тонкослойной хроматографии позволяют быстро устанавливать однородность элюата, полученного методом колоночной хроматографии, обнаружив даже незначительные количества примесей. Качественные реакции на кумарины.. Для обнаружения кумаринов в растительном сырье используют их лактонные свойства: способность флуоресцировать при УФ-свете, давать окрашенные растворы с диазосоединениями, микросублимацию. В качестве реагентов в реакции азосочетания обычно применяют диазоти- рованные сульфаниловую кислоту, n-нитроанилин и сульфаниламид. Продукты взаимодействия кумаринов с этими реактивами имеют устойчивую окраску. В зависимости от строения производного кумарина и диазореагента, может изменяться от оранжевой до красно-коричневой. Однако эта реакция не специфична для кумаринов, поскольку в нее вступают и другие фенольные соединения. Хроматографический анализ кумаринов. Для анализа кумаринов широко используется метод тонкослойной хроматографии. Хроматография проводится в тонком слое оксида алюминия или силикагеля. Хорошее разделение кумаринов в тонком слое было достигнуто при применении следующих систем растворителей: этилацет — бензол (1 : 2); хлороформ — петролейный эфир (1 : 2). Обычно в качестве подвижной фазы ис- пользуют гексан, диэтиловый эфир или хлороформ в комбинации с более полярным растворителем, что позволяет разделить кумарины в смеси. Стандартными системами для разделания агликонов является органическая фаза смеси толуола с эфиром (1:1), насыщенная 10 %-ным раствором уксусной кислоты, для гликозидов — этилацетат—кислота муравьиная—кислота уксусная ледяная—вода (100:11:11:26). Ввиду плохой растворимости кумаринов в водных и лучшей в неполярных фазах разделение их осуществляется путем распределительной хроматографии на импрегнированной бумаге. В качестве подвижной фазы используют бензин, петролейный эфир (температура кипения 60—100 °С), смесь петролейный эфир — бензол — метиловый спирт (5:4:1), в качестве неподвижной фазы — 20 %-ный водный раствор этиленгликоля или пропиленгликоля, 10 %-ный формамид в метиловом спирте. Как правило, неподвижной фазой предварительно пропитывается хроматографическая бумага. Хроматографирование осуществляется нисходящим способом в течении 1,5—2 ч. Хроматограммы после высушивания просматривают в УФ свете. Кумарин в зависимости от структуры имеют голубую, синюю, фиолетовую, зеленую флуоресценцию. Флуоресцирующие пятна кумаринов отмечают и хроматограммы обрабатывают щелочью. После этого их высушивают в сушильном шкафу при температруе 120 ° и вновь просматривают под УФ лампой. Как правило, флуоресценция усиливается. Затем хроматограмму обрабатывают диазотированным сульфаниламидом, от действиия которого кумарины в зависимости от структуры окрашиваются в оранжевый, красно-оранжевый, фиолетовый цвета. В некоторых случаях после просматривания хроматограммы в УФ свете обрабатывают реактивом Драгендорфа или иодом. Кумарины проявляются в виде пятен, окрашенных в коричневый цвет. Проявление кумаринов на хроматограммах проводится точно так же, как в случае проявления бумажных хроматограмм. Количественное определение кумаринов. Для количественного определения кумаринов в лекарственном растительном сырье единого метода не существует. Разработаны титриметрический, гравиметрический, полярографический, спектрофотометрический, хромато-спектрофотометрический, флуорометрический методы. При количественном определении кумаринов учитывается то или иное специфическое свойство кумарина. Способность лактонного кольца кумарина к обратимому размыканию и замыканию в зависимости от рН среды используется в гравиметрическом методе определения кумаринов в растительном сырье. Специфическое отношение кумаринов к щелочи лежит в основе метода нейтрализации (обратное титрование), которое применяется как для определения суммы кумаринов, так и для индивидуальных компонентов. Способность кумаринов давать устойчивые красно-оранжевые и темно-красные растворы с диазотированным сульфаниламидом в щелочной среде используется в колориметрических методах количественного определения суммы кумаринов и индивидуальных компонентов. Флуоресценция при УФ-свете в видимой области лежит в основе флуориметрических методов количественного определения кумаринов. Для количественного определения кумаринов применяются спектрофотометрические методы. В этом методе учитывается изменение оптической плотности растворов кумаринов при длине волны максимума. Количественное определение кумаринов проводят также полярографическим методом. Многообразие методов количественного определения в сырье позволяет провести правильный выбор метод для анализа растительного сырья, учитывая структуру кумаринов. жүктеу/скачать 0,72 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|