Методы стерилизации при проведении работ с культурой изолированных клеток и тканей растений
Р а б о т а 6. Пассирование каллусной ткани
жүктеу/скачать 250,5 Kb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Р а б о т а 7. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ИЗОЛИРОВАННЫХ ЗАРОДЫШЕЙ (ЭМБРИОКУЛЬТУРА) ОЗИМОЙ РЖИ Материалы и оборудование
- Объяснение.
- Ход работы.
| Р а б о т а 6. Пассирование каллусной ткани
на свежую питательную среду Материалы и оборудование: культура каллусной ткани, чашки Петри со стерильной агаризованной средой, стерильные пинцеты, стерильные скальпели, спиртовая горелка, спички, стерильные чашки Петри, 96%-ный спирт. Объяснение. Кривая роста каллусной ткани носит S-образный характер. Она состоит из следующих фаз: начальной лаг-фазы, фазы логарифмического роста, во время которой идет активное деление клеток, фазы замедленного роста, стационарной фазы и фазы деградации. Для того чтобы сохранить способность к делению и дальнейшему росту, кусочек каллусной ткани переносят на свежую питательную среду. Этот прием поддержания клеточных делений носит название пассирования каллусных тканей. Пассировать каллусную ткань можно неограниченное число раз. Однако при многократном его повторении возможно "привыкание", которое выражается в приобретении автономности по отношению к экзогенным гормонам и утрате или значительному ослаблению способности каллусных клеток к регенерации целого растения. Ход работы. Перенести, соблюдая строгую стерильность, каллус в стерильную чашку Петри. Отделить некротизированные участки и кусочки старой агаризованной среды. Затем каллусную ткань разделить на равные части и асептически перенести в чашки Петри со стерильной питательной средой. Чашки Петри поместить в термостат с температурой 25оС и влажностью 60% на 3–4 недели. В конце этого срока пронаблюдать и зарисовать каллусную ткань. Р а б о т а 7. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ИЗОЛИРОВАННЫХ ЗАРОДЫШЕЙ (ЭМБРИОКУЛЬТУРА) ОЗИМОЙ РЖИ Материалы и оборудование: набухшие зерновки озимой ржи (замачиваются в воде в течение 24 ч до проведения работ), проавтоклавированные пробирки с питательной средой Мурасиге-Скуга, стерильные бумажные "матрасики", хлорамин, дистиллированная вода, стерильный стаканчик, скальпель, пинцеты. Объяснение. Эмбриокультура представляет собой культуру изолированных зиготических зародышей и имеет ряд достоинств: получение клонов растений-перекрестноопылителей с эффект системой самонесовместимости. В дальнейшем часть растений клона можно хранить при низкой температуре (0+2оС), а часть испытывать на общую комбинационную способность с перспективой создания синтетических популяций; преодоление постгамной (после оплодотворения) несовместимости, проявляющейся как несовместимость зародыша и эндосперма при отдаленной гибридизации; устранение влияния эндосперма на проявление генетических потенций зародыша. Ход работы. Приготовить на магнитной мешалке 3%-ный раствор хлорамина. В раствор поместить набухшие зерновки ржи. Время стерилизации - 30 минут при постоянном перемешивании. Последующие манипуляции проводить в условиях ламинар-бокса. Семена промыть 3 раза в автоклавированной дистиллированной воде в стерильном стаканчике. На стерильных "матрасиках", придерживая зерновку, вычленяют зародыш, надавливая скальпелем в зоне щитка. После этого зародыш необходимо поместить в пробирку с питательной средой. Пробирки с эксплантами поместить в культуральную комнату. Через 7, 14, 21 день отметить количество регенерировавших зародышей. жүктеу/скачать 250,5 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|