Методы стерилизации при проведении работ с культурой изолированных клеток и тканей растений
Р а б о т а 8. Вычленение и культивирование
жүктеу/скачать 250,5 Kb.
|
Р а б о т а 8. Вычленение и культивированиеапикальных меристем картофеляМатериалы и оборудование: клубни картофеля, бинокулярная лупа, скальпели, препаровальные иглы, лезвия, зажатые в держатели, пробирки со стерильной средой. Объяснение. Культура изолированных апикальных меристем используется для получения свободного от вирусов посадочного материала. Метод основан на том, что апикальная меристема, представляющая собой конус активно делящихся клеток высотой 0,1мм (100мкм) и шириной 0,25 мм, обычно свободна от вирусов. Поскольку меристему бывает трудно вычленить без повреждения, часто ее отделяют с 1-2 листовыми примордиями (апексы размером 100 – 250 мкм). Для повышения эффективности оздоровления картофеля применяют сочетание метода верхушечной меристемы с термо- и химиотерапией. Тепловая обработка вызывает инактивацию вирусов, химические вещества ингибируют их развитие. Выращенные из апикальных меристем безвирусные растения могут быть размножены и высажены в теплицы для получения безвирусных клубней. Для ускоренного размножения оздоровленного материала используются также микроклубни, образовавшиеся на безвирусных растениях in vitro. Ход работы. Клубни картофеля хранят при температуре 4 – 6оС, затем проращивают в темноте в течение 30 – 45 дней при 20 – 22оС. Работы по вычленению проводят в простерилизованном с помощью бактерицидных ламп ламинар-боксе. Рабочее место (стол, бинокулярная лупа) и штативы с пробирками протирают спиртом. Инструменты (пинцеты, скальпели, иглы) стерилизуют перед каждым вычленением, погружая в спирт, с последующим обжиганием. Ростки картофеля опустить в химический стакан и залить на 3 – 5 мин 5%-ным раствором гипохлорита кальция или натрия. Затем не менее 3 раз промыть их стерильной водой, поместить в стерильную чашку Петри и добавить несколько капель автоклавированной воды для предупреждения подсыхания. Перед вычленением с помощью препаровальной иглы под бинокулярным микроскопом с верхушки ростка удалить покровные листочки, последовательно обнажая меристему с примордиальными листочками. Меристему размером 100 – 250 мкм отделить тонкой иглой, зажатой в цанговый держатель. Вычленить можно как верхушечную, так и боковые меристемы. Каждую операцию проводят отдельным простерилизованным инструментом. Меристему на острие иглы перенести на поверхность питательной среды в пробирку. Пробирку закрыть пробкой над пламенем горелки и поставить в штатив. Штатив с пробирками поместить в культуральную комнату. В качестве питательной среды используют модифицированную питательную среду МС, заранее приготовленную и простерилизованную в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 20 мин. Через 2,3,4 недели последовательно пронаблюдать за развитием из меристем побега. Т а б л и ц а 6. Модифицированная питательная среда Мурасиге-Скуга (МС) жүктеу/скачать 250,5 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|