Методические указания по написанию доклада Методические указания по текущей и промежуточной аттестации


Лабораторная работа № 2 Определение продуктов ПОЛ



бет9/12
Дата16.10.2023
өлшемі177,5 Kb.
#116004
түріМетодические указания
1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   12
Байланысты:
1 RP 103113 MU 3

6.2 Лабораторная работа № 2 Определение продуктов ПОЛ


В липидных системах в результате процессов ПОЛ образуется МДА, взаимодействие которого с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК) приводит к образованию хромогена с максимумом поглощения в красной области видимого спектра при длине волны 532 нм.
Реактивы:
1) 30 %-ная трихлоруксусная кислота (ТХУ);
2) 0,1 М этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА);
3) 1 %-ная тиобарбитуровая кислота;
4) 0,05 н раствор NaOH;
5) Физиологический раствор.
Ход определения:
К 0,2 мл образца добавляли 0,8 мл физиологического раствора и 0,5 мл ТХУ. Перемешивали, оставляли стоять на льду 2 часа. Затем центрифугировали 15 мин. при 3000 об/мин. 1 мл супернатанта переносили в другую пробирку, добавляли 0,075 мл 0,1 М ЭДТА и 1 %-ного ТБК, растворенной в 0,05 Н растворе NaOH. Содержимое перемешивали и ставили в кипящую водяную баню на 15 минут. Затем пробирки охлаждали при комнатной температуре и измеряли поглощение при длинах волн 532нм, а затем при 600 нм.
Расчет МДА производят по формуле:




D532 – D600

С =

---------------------- x×f,




E

где C – концентрация МДА, мкмоль/л плазмы (эритроцитов),
D532 – оптическая плотность при длине волны 532 нм;
D600 – оптическая плотность при длине волны 600 нм;
E – коэффициент экстинции 1,56x105М-1см-1;
f – коэффициент разведения. (f=9,94).
Результаты записать в тетрадь.


6.3 Лабораторная работа № 3. Влияние температуры на активность α-амилазы слюны. Определение оптимума pH для действия α-амилазы слюны
Опыт № 1 Влияние температуры на активность фермента α-амилазы слюны
Ход работы: В 4 пробирки отмерить по 4 мл 0,5 % раствора крахмала и по 1 мл слюны, разведенной в 10 раз. Пробирку 1 поместить в кипящую баню, 2 пробирку в ледяную баню, пробирку 3 –в термостат при температуре 38°С, пробирку 4 оставить при комнатной температуре. Через 10 минут содержимое каждой пробирки разделить на 2 части и провести пробу Фелинга, а с другой частью –пробу Люголя.
Реакция Люголя. Реакция обнаруживает крахмал. К содержимому пробирки добавить 1 каплю раствора Люголя. Появление синего окрашивания свидетельствует о наличии крахмала.
Реакция Фелинга. К содержимому пробирки добавить примерно половину объема реактива Фелинга. Верхний слой жидкости нагреть на пламени спиртовки. Появление желтого окрашивания, переходящего в кирпично-красное, указывает на наличие редуцирующих углеводов.
Результат оформляют в виде таблицы, объясняют причины разной активности a-амилазы в зависимости от температуры.

№ проб

Температура °С

Реакция с реактивом Люголя

Проба Фелинга

Выводы

1













2













3













4













Опыт № 2 Влияние значения реакции среды на активность фермента амилазы


Реактивы: Раствор амилазы (слюна), раствор крахмала 1%, раствор йода (раствор Люголя), фосфатная буферная смесь (pH от 5,4 до 8,0)
Ход работы: В восемь пронумерованных пробирок приливают по 2 мл фосфатной буферной смеси с различным значением рН от 5,4 до 8,0. Жидкость в каждой пробирке перемешивают и в каждую добавляют по 1 мл 1 % раствора крахмала и по 0,5 мл раствора слюны. Пробирки оставляют стоять на столе на 10 мин. После этого из каждой пробирки 1 каплю смешивают с 1 каплей йода на предметном стекле и сравнивают между собой окраски из каждой пробирки. Когда содержимое пятой пробирки будет давать с йодом красно-бурую окраску, через 1-2 мин во все пробирки добавляют по 2-3 капли раствора йода, начиная с первой, и содержимое хорошо взбалтывают. Сравнивают между собой окраску всех пробирок и по полученной окраске судят о степени расщепления крахмала, а, следовательно, об активности фермента в зависимости от значения рН среды.
Результаты опыта и выводы записывают в таблицу.

Значение рН пробы

5,4

5,8

6,2

6,6

6,8

7,0

7,4

8,0

Окраска с йодом





























Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   12




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет