Методические указания по написанию доклада Методические указания по текущей и промежуточной аттестации
Лабораторная работа № 2 Определение продуктов ПОЛ
жүктеу/скачать 177,5 Kb.
|
1 RP 103113 MU 3
6.2 Лабораторная работа № 2 Определение продуктов ПОЛВ липидных системах в результате процессов ПОЛ образуется МДА, взаимодействие которого с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК) приводит к образованию хромогена с максимумом поглощения в красной области видимого спектра при длине волны 532 нм. Реактивы: 1) 30 %-ная трихлоруксусная кислота (ТХУ); 2) 0,1 М этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА); 3) 1 %-ная тиобарбитуровая кислота; 4) 0,05 н раствор NaOH; 5) Физиологический раствор. Ход определения: К 0,2 мл образца добавляли 0,8 мл физиологического раствора и 0,5 мл ТХУ. Перемешивали, оставляли стоять на льду 2 часа. Затем центрифугировали 15 мин. при 3000 об/мин. 1 мл супернатанта переносили в другую пробирку, добавляли 0,075 мл 0,1 М ЭДТА и 1 %-ного ТБК, растворенной в 0,05 Н растворе NaOH. Содержимое перемешивали и ставили в кипящую водяную баню на 15 минут. Затем пробирки охлаждали при комнатной температуре и измеряли поглощение при длинах волн 532нм, а затем при 600 нм. Расчет МДА производят по формуле:
где C – концентрация МДА, мкмоль/л плазмы (эритроцитов), D532 – оптическая плотность при длине волны 532 нм; D600 – оптическая плотность при длине волны 600 нм; E – коэффициент экстинции 1,56x105М-1см-1; f – коэффициент разведения. (f=9,94). Результаты записать в тетрадь. 6.3 Лабораторная работа № 3. Влияние температуры на активность α-амилазы слюны. Определение оптимума pH для действия α-амилазы слюны Опыт № 1 Влияние температуры на активность фермента α-амилазы слюны Ход работы: В 4 пробирки отмерить по 4 мл 0,5 % раствора крахмала и по 1 мл слюны, разведенной в 10 раз. Пробирку 1 поместить в кипящую баню, 2 пробирку в ледяную баню, пробирку 3 –в термостат при температуре 38°С, пробирку 4 оставить при комнатной температуре. Через 10 минут содержимое каждой пробирки разделить на 2 части и провести пробу Фелинга, а с другой частью –пробу Люголя. Реакция Люголя. Реакция обнаруживает крахмал. К содержимому пробирки добавить 1 каплю раствора Люголя. Появление синего окрашивания свидетельствует о наличии крахмала. Реакция Фелинга. К содержимому пробирки добавить примерно половину объема реактива Фелинга. Верхний слой жидкости нагреть на пламени спиртовки. Появление желтого окрашивания, переходящего в кирпично-красное, указывает на наличие редуцирующих углеводов. Результат оформляют в виде таблицы, объясняют причины разной активности a-амилазы в зависимости от температуры.
Опыт № 2 Влияние значения реакции среды на активность фермента амилазы Реактивы: Раствор амилазы (слюна), раствор крахмала 1%, раствор йода (раствор Люголя), фосфатная буферная смесь (pH от 5,4 до 8,0) Ход работы: В восемь пронумерованных пробирок приливают по 2 мл фосфатной буферной смеси с различным значением рН от 5,4 до 8,0. Жидкость в каждой пробирке перемешивают и в каждую добавляют по 1 мл 1 % раствора крахмала и по 0,5 мл раствора слюны. Пробирки оставляют стоять на столе на 10 мин. После этого из каждой пробирки 1 каплю смешивают с 1 каплей йода на предметном стекле и сравнивают между собой окраски из каждой пробирки. Когда содержимое пятой пробирки будет давать с йодом красно-бурую окраску, через 1-2 мин во все пробирки добавляют по 2-3 капли раствора йода, начиная с первой, и содержимое хорошо взбалтывают. Сравнивают между собой окраску всех пробирок и по полученной окраске судят о степени расщепления крахмала, а, следовательно, об активности фермента в зависимости от значения рН среды. Результаты опыта и выводы записывают в таблицу.
жүктеу/скачать 177,5 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|