Методические указания по написанию доклада Методические указания по текущей и промежуточной аттестации


Лабораторная работа №1. Количественное определение активности амилазы (по Вольгемуту). Специфичность действия амилазы слюны



бет8/12
Дата16.10.2023
өлшемі177,5 Kb.
#116004
түріМетодические указания
1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   12
Байланысты:
1 RP 103113 MU 3

6.1 Лабораторная работа №1. Количественное определение активности амилазы (по Вольгемуту). Специфичность действия амилазы слюны
Опыт № 1 Определение активности амилазы в слюне по Вольгемуту
Амилазная активность слюны или амилокластическая сила слюны выражается количеством 0,1 % раствора крахмала в мл, которое может расщепляться 1 мл слюны при температуре 38 °С в течении 30 мин.
В норме амилазная активность слюны составляет 160-320 ед.
Ход работы: В 10 пронумерованных пробирок наливают по 1 мл воды. Затем в первую пробирку добавляют 1 мл слюны, разведенной в 10 раз. Содержимое первой пробирки перемешивают и 1 мл раствора (суммарное разведение в 20 раз) переносят из 1-й пробирки во вторую, перемешивают (слюна разведена в 40 раз). Затем 1 мл разведенной слюны из второй переносят в третью и т.д. - из предыдущей пробирки в следующую. Из 10 пробирки 1 мл смеси выливают. Таким образом, получается ряд разведенной слюны, в котором в каждой последующей пробирки содержание фермента вдвое меньше, чем в предыдущей.
Во все пробирки добавляют по 1 мл воды и по 2 мл 0,1 % раствора крахмала, перемешивают и помещают пробирки в термостат на 30 мин при температуре 38 °С
Через 30 минут пробирки вынимают, охлаждают, добавляют по 1-2 капле 1 % раствора йода и перемешивают. Жидкость в пробирках в зависимости от степени расщепления крахмала может окрашиваться в желтый, розовый, красный и фиолетовый цвет. Раствор желтого цвета свидетельствует о полном расщеплении крахмала, фиолетовый – о том, что крахмал в растворе еще сохранился.
Работу необходимо оформить в виде таблицы.

Разведение слюны

№ пробирки

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

20

40

80

160

320

640

1280

2560

5120

10248

Кол-во 0,1%крахмала































Окрашивание йодом































Амилокластическая активность слюны































Расчет: Берется количество слюны в последней пробирке с желтой окраской. Если это четвертая пробирка, то разведение слюны в ней – 160 раз. Составляется пропорция: 1). 160 мл слюны расщепляет 2 мл 0,1 % р-ра крахмала; 2) 1 мл слюны расщепляет Х мл 0,1 % р-ра крахмала, т.е. амилокластическая активность слюны составляет 320 ед.


Опыт № 2 Специфичность действия амилазы слюны
Приборы и материалы: раствор амилазы (слюна), раствор крахмала 1%, раствор йода (раствор Люголя), раствор хлорида натрия, раствор сульфата меди.
Ход работы: В три пробирки отмеряют: в 1 – 2,0 мл дистиллированной воды; во 2 – 1,6 мл дистиллированной воды + 0,4 мл 1 % раствора хлорида натрия; в 3 – 1,6 мл дистиллированной воды + 0,4 мл 1 % раствора сульфата меди. В каждую пробирку добавляют по 0,5 мл разведенной слюны, содержимое пробирок перемешивают и добавляют по 1,0 мл 1 % раствора крахмала. Перемешивают и оставляют стоять при комнатной температуре.
Через 5 мин в три пробирки с водой (по 1 мл в каждой), подкрашенной каплей раствора йода, отмеряют по 2-3 капли содержимого каждой опытной пробирки. Наблюдают появление окрашивания. Через 10-15 минут проводят цветную реакцию с йодом с содержимым каждой из опытных пробирок. Для этого из трех опытных пробирок отмеряют по 2-3 капли содержимого и переносят их в три пробирки с водой (по 1 мл в каждой), подкрашенной каплей раствора йода. Результаты заносят в таблицу.

Фермент

Субстрат

Время действия фермента,мин

Окраска жидкости после добавления йода в присутствии:

Воды

Хлорида натрия

Сульфата меди

Амилаза

Крахмал













Амилаза

Крахмал













Амилаза

Крахмал

















Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   12




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет