Микробиология
Т-лимфоциттерді розеткаларды тҥзу кешені әдісінде (Е-РТК)
жүктеу/скачать 5,08 Mb. Pdf көрінісі
|
BulashevAK BMB.pdf
- Бұл бет үшін навигация:
- Комплементтің ҥшінші компонентінің рецепторларын айқындау арқылы В-лимфоциттерді анықтау.
| Т-лимфоциттерді розеткаларды тҥзу кешені әдісінде (Е-РТК)
қой эритроциттерінің кӛмегімен анықтау. Т-лимфоциттерде гетерогендік эритроциттердің беткейлік антигендерімен иммундық байланысты қалыптастыра алатын қасиеті бар беткейлік мембрана рецепторлары болады. Эритроциттер лимфоциттердің айналасында орналасып, розетка тәрізді пішінді қҧрайды. 0,25 мл лимфоциттердің жҧмыс қоспасына 0,25 мл 0,5%-ды қой эритроцитінің суспензиясын қосып, 20-25 минут бӛлме температурасында ҧстайды. Сонан соң 300-400 айналымда 5 минут центрифугалап, +4ºС 15-18 сағат инкубациялайды. Пайда болған иммундық байланыстарды буферленген физиологиялық ерітіндідегі 0,6%-ды глутаральдегид ерітіндісімен бекітеді. Зат шынысына жасушалардың қоспасын енгізіп, ауада кептіреді. Препаратты метил спиртімен бекітеді де, қарапайым гемотологиялық бояумен бояйды. Препараттарды жасуша типтерінен ажырату ҥшін тҥсті екі компонентпен бояуға болады. Эритроциттер - ақшыл-қызыл тҥске, ал лимфоциттер кҥңгірт-кӛк тҥске боялады. Бҧл жағдайда бекітілген жағындыға 0,5% глицерин қосылған 76% этил спиртіндегі 1%-дық «Эозин БА» ерітіндісін 10-15 см қалыңдықта енгізіп, дистилденген сумен шайып тастайды. Содан кейін 0,3% «АзурІІ» сулы ерітіндісімен 30-40 секунд ҧстап, дистилденген сумен шаяды. Розетка тәрізді жасушалардың тҥзілуін иммерсия жағылған микроскоптың кӛмегімен бағалайды. Ҥш және одан да кӛп эритроциттер байланысқан жасушаларды санап, нәтижесін бағалайды. Олардың проценттерін, жалпы лимфоциттердің санын және 0,001 мл қандағы абсолюттік кӛрсеткішін анықтайды. Комплементтің ҥшінші компонентінің рецепторларын айқындау арқылы В-лимфоциттерді анықтау. Қой эритроциттерін ҥш мәрте Хенкс ерітіндісімен шаяды да осы ерітіндімен 5%-ды қоспа дайындайды. Қҧрғақ гемолитикалық қан сарысуын Хенкс ерітіндісімен 101 1:500 титріне дейін араластырды. 5%-ды қой эритроцитінің қоспасы мен гемолитикалық қан сарысуын 1:1 қатынасында араластырады. +37ºС 30 минут бойы инкубацияланған қоспаны 5 минут бойы центрифугалау (800 анйн/мин) арқылы Хенкс ерітіндісімен шаяды. Шайылған қой эритроциттеріне тең кӛлемде комплементті қосып, 30 минут бойы +37ºС инкубациялайды. Инкубация уақыты ӛткен соң қой эритроциттерін қайтадан Хенкс ерітіндісімен шаяды. Лимфоциттердің жҧмыс қоспасын шайылған қой эритроциттерімен (ЕАС-кешен) 1:50 қатынасында араластырып, 30 минутқа +37ºС қояды. Розеткалардың тҥзілу санын Горяев камерасында немесе Т- лимфоциттерді санағандай зат шынысында санайды. Бақылау ретінде эритроциттерге лимфоциттерді қоспай инкубациялайды. жүктеу/скачать 5,08 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|