Микротехника негіздері (Әдістемелік оқУ ҚҰралы) Алматы
А.И. Михальцова бойынша объектерді спирттерден өткізбей, сіңдірмей және парафинге салмай, парафин блоктарын жасау және т.б
жүктеу/скачать 2,96 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Бояуға материал дайындау.
- Препараттарды бояу
| 3.6 А.И. Михальцова бойынша объектерді спирттерден өткізбей, сіңдірмей және парафинге салмай, парафин блоктарын жасау және т.б.
Жабдықтар: микроскоптар, қолмен цилиндрлік микротом немесе шаналы микротомға арналған бір реттік пышақтар, пышақтың бір реттік ұстағышы, сағаттар, петриден жасалған ыдыстар, зат пен қақпақ көзілдірігі, щеткалар, бөлшектейтін инелер, қыздырғыш үстел, пинцет, ұстағыштар, спираль, пипеткалар, термостат, көбік блоктары, сәбіз тамырлары (17 сурет). Нысан таңдау және дайындау: жинау, кесу, бекіту. Нысандар : сабақтар, немесе жапырақтар және т.б. Материал алудың екі әдісі бар: 1) Ұзындығы шамамен 2 см болатын сабақтар, сабақтардың кесектерін кесіп алып, оларды бірден 5-7 күн фиксаторға салу. 2) Микротомға кесу процедурасының алдында сабақтар мен жапырақтардың бөліктерін кесіп тастап, содан кейін фиксацияға жіңішке көлденең қималарды салу. Ұсынылатын фиксатор - FAA: этил спирті 96% - 100 мл.; формалин - 7 мл., мұздық сірке қышқылы - 7 мл. Материалды осы фиксаторда бір аптаға дейін сақтауға болады, содан кейін этил спиртімен шайып, 70% этил спиртін салу керек. 17-сурет. Қолмен жасалынған микротома және жүздер. Белгілеулер: 1 - микровинтті бөлігі бар қолмен жасалған микротом; 2 - бір реттік қалақтарға арналған ұстағыш; 3 - ғылыми жұмыс үшін бір жақты пышақ. Бояуға материал дайындау. Фиксацияланбаған жаңа материал: бөлімдерді FAA бекіткішке 15-20 мин. орналастыру керек. • Бөлімдерді 70% этанолмен 3 мин. ішінде шаю керек. • бөлімдерді 50% этанолмен 3 мин. шаю керек. • бөлімдерді 30% этанолмен 3 мин. шаю керек. • бөлімдерді тазартылған суда шайып, бояу кезеңіне дейін сол жерде қалдыру керек. (18-сурет) 18-сурет. Жаңа өсімдік материалынан кесінділерді фиксациялау Препараттарды бояу Өсімдіктердің микроскопиялық талдауға арналған тұрақты препараттар өндірісінде аралас түс маңызды рөл атқарады. Бұл анатомиялық ерекшеліктерін неғұрлым егжей-тегжейлі зерттеу үшін бір препаратта әр түрлі ұлпаларды анықтауға мүмкіндік береді. Бояу белгілі бір клеткалық құрылымдардың әр түрлі бояғыштарға әр түрлі жақындығына негізделген [Барыкина және басқалар, 2004]. Осылайша, қышқыл реакциямен лигнификацияланған клетка қабырғалары негізгі бояғыштармен, ал лигнирленбеген клетка қабықшалары - қышқылмен жақсы боялған. Ереже бойынша, өсімдіктердің біріккен түсі екі түрлі түсті, екі қарама-қарсы бояғышты қолдану арқылы алынған. Уолкер [Ваккер, 2006] өсімдік объектілерінің кесінділерін бояу үшін келесі бояғыш ерітінділерді қолдануды ұсынды: акридин қызыл (50% этанолдағы ерітінді 1%), акрифлавин (тазартылған судағы 1% ерітінді), астра көк (тазартылған судағы 1% ерітінді)). Акридин қызыл және акрифлавин де фторхромдар болып табылады. Бұл жаңа әдістің артықшылығы лигирленген қабықшалары бар клеткалардың түсінің қанықтылығы және флуоресцентті сәулелендіргіштің көмегімен препараттарды зерттеуге мүмкіндік береді. Көптеген зерттеушілер үшін бұл әдісті қолданудың қиындығы үш бояғышты бірінен соң бірін жағудан және қажетті түсті дифференциациядан тұрады. Бұл әдіс тізбекке салынған және парафинге салынған заттарды бояуға ұсынылды. жүктеу/скачать 2,96 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|