Цитогенетические и молекулярные исследования, диагностическое

248 
за трудоёмкости её методов невысока: обычно исследуют не более 15-20 
метафазных пластинок. Цитогенетики все шире используют молекулярные 
методы кариотипирования, к которым относят: 

гибридизация in situ с использованием специфических проб к 
центромерам; 

метод флуоресцентной гибридизации in situ (FISН) с помощью 
специфических ДНК-зондов; 

метод 
мягкой 
гипотонической 
обработки, 
оставляющей 
сохранными клеточную мембрану и цитоплазму клетки и фиксация кислотой 
или формальдегидом перед иммунохимией (МАС-морфология, антитела, 
хромосомы); 

метод многоцветного спектрального кариотипирования (SKY). 
Метод MAC может быть комбинирован с гибридизацией in situ 
(MACISH), и тогда интерфазные клетки становятся легко обрабатываемым 
материалом, особенно при заболеваниях, где получить метафазные 
пластинки трудно. FISН-метод позволяет относительно быстро исследовать 
сотни 
интерфазных 
ядер 
или 
метафазных 
пластинок 
низкого 
морфологического качества для выявления перестроек того или иного гена. С 
помощью SKY-метода проводят анализ всего хромосомного набора в одном 
эксперименте. 
В гематологии применение метода FISH особенно перспективно при 
лимфопролиферативных заболеваниях с низким митотическим индексом или 
при Рh-негативных вариантах хронического миелолейкоза, когда этот метод 
становится единственно возможным для выявления химерного гена bсr/аbl, а 
также 
при 
дифференциальной 
диагностике 
с 
другими 
миелопролиферативными заболеваниями или оценке эффективности 
терапии. Детальная цитогенетическая характеристика для прогнозирования 
течения заболевания часто невозможна из-за сложности и множественности 
хромосомных перестроек. Тогда полезно использовать многоцветное 

249 
спектральное кариотипирование (SKY) с ДНК-зондами на весь хромосомный 
набор клетки. 
С помощью ДНК-зондов и гибридизации in situ не только определяют 
хромосомные перестройки, но и проводят генное картирование. Получили 
распространение пренатальная диагностика и мониторинг беременности. В 
настоящее время цитогенетическую «прописку» на хромосомах человека 
получили 
около 
1500 
клинических 
состояний, 
среди 
которых 
предрасположенность к заболеваниям, болезни с конституциональными 
хромосомными 
перестройками 
(идентифицированными 
или 
предполагаемыми), злокачественные новообразования (солидные опухоли и 
гемобластозы), 
заболевания, 
ассоциированные 
с 
мутациями 
митохондриальной ДНК. Нет сомнения в том, что хромосомные аберрации 
маркируют аномалии полового созревания и некоторые наследуемые 
патологические состояния. Предприняты попытки создания регистра генных 
компонентов и полигенной специфики таких заболеваний, как диабет и 
психозы. 
Накоплена обширная информация о значительном числе хромосомных 
нарушений, специфичных для ряда гемобластозов. Выявлен клоновый 
характер изменений кариотипа гемопоэтических клеток, лежащий в основе 
развития лейкозов и лимфатических опухолей. Цитогенетический анализ в 
гематологии стал играть важную роль в диагностике, прогнозировании 
течения заболеваний и оценке эффективности применяемой терапии. 
Изменения хромосом при заболеваниях системы крови сложны и 
затрагивают как количественный состав наборов – численные аберрации, так 
и структуру отдельных хромосом – структурные аберрации. При типичных 
для острых и хронических гемобластозов хромосомных аберрациях смена 
локализации или повреждение структуры генов может приводить к 
нарушению их экспрессии или к структурно-функциональным изменениям 
кодируемых ими белков. По-видимому, эти изменения играют интегральную 
роль в патогенезе, а возможно и в прогрессии лейкоза. 

250 
При хроническом миелолейкозе, хроническом лимфолейкозе, 
хроническом миеломоноцитарном лейкозе, В-лимфосаркоме хромосомные 
аберрации типа t(9:22), t(5:12), t(14; 19), t(14; 18) приводят к перестройкам 
bcr, abl, tel или bcl генов, химерные белковые продукты которых, меняя 
характер клеточной пролиферации (при этом, не являясь трансформирующим 
сигналом), делают клетки бессмертными. 
При острых лейкозах повреждения хромосом с локализацией 11q23 
(острые лимфоидные и миелоидные лейкозы), 15q22 и 17q12 (острый 
промиелоцитарный лейкоз и реже – бластный криз хронического 
миелолейкоза), а также 21q22 (острый миелобластный лейкоз, бластный криз 
ХМЛ), как правило, видоизменяют генетические факторы транскрипции 
(MILL, PML, RAPA, AML) и тем самым нарушают клеточную и тканевую 
дифференцировку, создавая базу для злокачественной трансформации 
клеток. 
Кроме перечисленных хромосомных аберраций при лейкозах часто 
регистрируют мутации генов. Так, мутации семейства протоонкогенов RAS 
бывают в 4% случаев ХМЛ на стадии развёрнутых проявлений заболевания, 
и в 26% ОМЛ (чаще при остром миеломонобластном лейкозе), сочетаясь с 
большей продолжительностью жизни больных. Примерно у 20% больных 
острыми нелимфоцитарными лейкозами отмечены мутации протоонкогенов 
FMS (локализованы на хромосоме 5q33) и повышение тирозинкиназной 
активности. При ХМЛ частые мутации протоонкогена ТР53 (хромосома 
17р13), т.е. утрата аллеля гена р53, как правило, сочетаются с бластной 
трансформацией хронической стадии лейкоза. 

жүктеу/скачать 4,09 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: